QuEChERS結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定枇杷中氯苯嘧啶醇?xì)埩袅?/h1>
2021-09-22 22:16:24胡彧嫻林薌華賴添財(cái)
福建農(nóng)業(yè)科技 2021年7期
胡彧嫻 林薌華 賴添財(cái)
摘 要：建立了QuEChERS結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定枇杷中氯苯嘧啶醇?xì)埩袅糠椒?，樣品?jīng)乙腈提取，N丙基乙二胺（PSA）凈化，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。結(jié)果表明：氯苯嘧啶醇在0.5～200 μg·L-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（ r 2=0.999 4），檢出限為0.14 μg·kg-1，定量限為0.5 μg·kg-1;氯苯嘧啶醇在2、20、200 μg·kg-1添加水平下，平均回收率分別為87.0%、97.4%和96.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為8.3%、7.9% 和4.3%。該方法簡(jiǎn)單快速，靈敏度高，能夠滿足殘留檢測(cè)要求。
關(guān)鍵詞：氯苯嘧啶醇;枇杷;殘留;QuEChERS法;高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜
中圖分類號(hào)：S 481.8?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號(hào)：0253-2301（2021）07-0069-05
DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2021.07.013
Determination of Fenarimol Residues in Loquat by UsingQuEChERS Combined with HPLCMS/MS
HU Yuxian， LIN Xianghua， LAI Tiancai*
（Zhangzhou Agricultural Inspection and Monitoring Center， Zhangzhou， Fujian 363000， China）
Abstract： A method based on QuEChERS combined with high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry （HPLCMS/MS） was established for the determination of fenarimol residues in loquat. The samples were extracted by acetonitrile， purified by Nprimary secondary amine （PSA）， and determined by high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry. The results showed that： the linearity of fenarimol was good in the concentration range of 0.5～200 μg·L-1 （ r 2=0.999 4）， the limit of detection was 0.14 μg·kg-1， and the limit of quantitation was 0.5 μg·kg-1. The average recovery rates of fenarimol were respectively 87.0%， 97.4% and 96.7% at the adding level of 2， 20 and 200 μg·kg-1， with the relative standard deviations （RSD） of 8.3%， 7.9% and 4.3%， respectively. The method was simple， rapid and sensitive， which could meet the requirements of residue detection.
Key words： Fenarimol; Loquat; Residue; Method of QuEChERS; HPLCMS/MS
氯苯嘧啶醇又名樂必耕，異嘧菌醇，屬低毒、廣譜的內(nèi)吸性殺菌劑，兼有保護(hù)和治療作用，是一種麥角甾醇生物合成抑制劑，能抑制病原菌菌絲生長(zhǎng)[1-3]，主要應(yīng)用于果樹、蔬菜及觀賞植物等，對(duì)白粉病、黑星病、銹病等有一定的防治效果[3-4]。枇杷果肉營(yíng)養(yǎng)豐富，風(fēng)味佳良，具有止咳潤(rùn)肺、下氣等功效[5]，深受人們的喜愛，在福建、廣東、廣西、臺(tái)灣等地廣泛種植，而漳州市是福建省枇杷種植的主要產(chǎn)區(qū)之一。在栽培過程中為防治枇杷病蟲害，農(nóng)藥的使用成為農(nóng)戶果園管理的重要手段。
迄今，國(guó)內(nèi)對(duì)氯苯嘧啶醇的研究主要集中在光化學(xué)降解與環(huán)境轉(zhuǎn)歸方面[6-10]，對(duì)其殘留檢測(cè)方法的研究較少[11-13]，而在枇杷上的殘留檢測(cè)方法尚未見報(bào)道。農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)，其樣品前處理方法主要有固相萃取法、液液萃取法、凝膠滲透色譜（GPC）法和QuEChERS法等，QuEChERS（quick，easy，cheap，effective，rugged and safe）法是由Anastassiades等[14]于2003年提出，QuEChERS前處理方法相較于其他方法，操作簡(jiǎn)單、靈敏度高，已在農(nóng)藥殘留、獸藥殘留等領(lǐng)域得到驗(yàn)證和推廣。為此，本研究采用QuEChERS進(jìn)行樣品前處理，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定枇杷中氯苯嘧啶醇?xì)埩袅?，建立QuEChERS結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法，旨在為監(jiān)測(cè)枇杷中氯苯嘧啶醇的殘留量提供依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 供試材料
1.1.1 試劑 氯苯嘧啶醇標(biāo)準(zhǔn)品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所，100 mg·L-1）;無水硫酸鎂、氯化鈉（西隴科學(xué)股份有限公司，分析純）;N丙基乙二胺
[（PSA），德國(guó)CNW公司];乙腈、甲醇、丙酮（美國(guó)天地試劑公司，色譜純）;甲酸（山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司，色譜純）;試驗(yàn)用水為超純水。
1.1.2 主要儀器設(shè)備 DIONEX Ultimate 3000Thermo TSQ Quantum Ultra EMR高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)ThermoFisher公司，帶ESI源）;318K離心機(jī)（德國(guó)Sigma公司） ;QUINTIX612上皿式天平（德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確吸取0.5 mL氯苯嘧啶醇標(biāo)準(zhǔn)品（100 mg·L-1）于10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，配制成5 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于0～4℃冰箱中避光保存?zhèn)溆谩８鶕?jù)需要分別用乙腈或空白基質(zhì)稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
1.2.2 樣品提取與凈化 參考SN/T 4138-2015《出口水果和蔬菜中敵敵畏、四氯硝基苯、丙線磷等88種農(nóng)藥殘留的篩選檢測(cè)QuEChERS氣相色譜負(fù)化學(xué)源質(zhì)譜法》[15]并適當(dāng)改進(jìn)，稱取10 g（精確至0.01 g）枇杷樣品置于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入20 mL乙腈、4 g無水硫酸鎂和1 g氯化鈉，渦旋混合2 min，于4 500 r·min-1的離心機(jī)中離心5 min。取上層有機(jī)相6.0 mL轉(zhuǎn)移至裝有0.30 g PSA、0.90 g無水硫酸鎂的離心管中，渦旋振蕩1 min，取1 mL過0.22 μm有機(jī)濾膜，待高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀分析測(cè)定。
1.2.3 檢測(cè)條件 （1）液相色譜條件。色譜柱為Atlantis T3 Column（100 mm×2.1 mm×3 μm）;流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈;進(jìn)樣量為2.0 μL;流速為0.25 mL·min-1;總運(yùn)行時(shí)間為10 min;梯度洗脫程序見表1。（2）質(zhì)譜條件。電噴霧正離子掃描（ESI+）;噴霧溫度為260℃;噴霧電壓為3 900 V;離子傳輸管溫度為300℃;鞘氣（N2）流速為3.58 L·min-1，輔助氣（N2） 流速為5.74 L·min-1，掃描模式：SRM。
1.2.4 提取溶劑的選擇 分別采用甲醇、丙酮、乙腈作為提取溶劑，其余操作步驟均按1.2.2的樣品提取與凈化進(jìn)行，添加氯苯嘧啶醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行提取回收率試驗(yàn)，根據(jù)提取效果確定最佳提取溶劑。
1.2.5 方法有效性評(píng)價(jià) 準(zhǔn)確吸取5 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋，配制成0.5、1、5、10、50、100、200 μg·L-1的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，評(píng)價(jià)方法的線性范圍和靈敏度，外標(biāo)法定量。在枇杷空白樣品中添加3個(gè)水平的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)5次，按1.2.2方法進(jìn)行操作，測(cè)定添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確度和精密度。
2 結(jié)果與分析
2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化
試驗(yàn)采用0.1%甲酸水溶液和乙腈作為流動(dòng)相，將氯苯嘧啶醇標(biāo)準(zhǔn)品稀釋到1 mg·L-1，經(jīng)注射泵注入質(zhì)譜，選擇ESI+模式，調(diào)節(jié)合適的注射泵流速及噴霧溫度、電壓等條件使響應(yīng)值信號(hào)大于106，且響應(yīng)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。先全掃描確定母離子，再選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（SRM）進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜自動(dòng)優(yōu)化，得到定性和定量離子及相應(yīng)的碰撞能量，最終確定氯苯嘧啶醇的質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)（表2）。
2.2 提取溶劑的確定
農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理常用的提取劑較多，本試驗(yàn)考察了甲醇、丙酮、乙腈3種溶劑的提取效果，結(jié)果表明氯苯嘧啶醇（添加量為100 μg·kg-1）在這3種溶劑中的平均回收率分別77.2%、97.4%和98.6%，即丙酮、乙腈的提取效果優(yōu)于甲醇。盡管在丙酮和乙腈溶劑中的回收率相差不大，但丙酮較易提取出其他雜質(zhì)，為此，本試驗(yàn)優(yōu)選乙腈作為提取劑。
2.3 方法的線性范圍和靈敏度
由于樣品中基質(zhì)效應(yīng)的存在，本試驗(yàn)采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液來進(jìn)行校正。通過向空白基質(zhì)中添加不同濃度的標(biāo)樣，配制基質(zhì)匹配系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液并進(jìn)樣分析，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，在0.5～200 μg·L-1濃度范圍內(nèi)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。氯苯嘧啶醇的線性回歸方程為 y=14 799.6x-5 369.26（r2=0.999 4）， 線性關(guān)系良好。以信噪比（S/N）的3倍和10倍計(jì)算檢出限和定量限，氯苯嘧啶醇檢出限為0.14 μg·kg-1、定量限為0.5 μg·kg-1，可滿足定量分析的要求。
2.4 方法的準(zhǔn)確度和精密度
在枇杷空白樣品中分別加入2、20和200 μg·kg-1 3個(gè)質(zhì)量水平的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，重復(fù)5次。按上述方法進(jìn)行前處理和上機(jī)測(cè)定，枇杷空白樣品和加標(biāo)樣品的提取離子流色譜圖見圖2和圖3，氯苯嘧啶醇保留時(shí)間為6.21 min;氯苯嘧啶醇的平均回收率為87.0%～97.4%、RSD為4.3%～8.3%（表3），表明該方法適用于枇杷中氯苯嘧啶醇的殘留測(cè)定。
3 結(jié)論與討論
本試驗(yàn)中供試的甲醇、丙酮、乙腈3種提取劑，甲醇的提取效果呈現(xiàn)最差，這可能與其較難與水層分離有關(guān)[16]。農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)前處理，常見的凈化劑有PSA、C18、GCB等，在試驗(yàn)中可以根據(jù)樣品的特性來選擇合適的凈化劑。PSA主要用于除去基質(zhì)中極性物質(zhì)如糖類、有機(jī)酸、脂肪酸及親脂性色素等極性物質(zhì)[17];C18可以去除脂肪酸、脂類等非極性干擾物[18];GCB對(duì)色素有較強(qiáng)的吸附凈化能力，但會(huì)吸附一些平面及對(duì)稱結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥，影響農(nóng)藥的回收率[19]。枇杷樣品提取液顏色極淺，色素、脂類等干擾物較少，為此，本試驗(yàn)中在凈化時(shí)加入PSA就能達(dá)到較好凈化效果。
關(guān)于農(nóng)產(chǎn)品中氯苯嘧啶醇?xì)埩魴z測(cè)方法的研究，王姍姍等[13]建立的QuEchERS超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，測(cè)定草莓中氯苯嘧啶醇的檢出限為0.5 μg·kg-1;梁睿等[12]建立的蘋果中氯苯嘧啶醇?xì)埩魴z測(cè)方法，測(cè)定枇杷中氯苯嘧啶醇的檢出限為<0.3 μg·kg-1。本試驗(yàn)建立的QuEChERS結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，對(duì)枇杷中氯苯嘧啶醇的檢出限可達(dá)0.14 μg·kg-1、定量限為0.5 μg·kg-1，平均回收率為87.0%～97.4%、RSD為4.3%～8.3%。對(duì)枇杷中氯苯嘧啶醇的檢出限可達(dá)0.14 μg·kg-1、定量限為0.5 μg·kg-1，平均回收率為87.0%～97.4%、RSD為4.3%～8.3%，符合NY/T 788-2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[20]規(guī)定的要求。同時(shí)，根據(jù)GB 2763-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[21]規(guī)定，枇杷中氯苯嘧啶醇的MRL為0.3 mg·kg-1，能滿足于GB 2763-2019的要求。由上表明，本試驗(yàn)所建立的枇杷中氯苯嘧啶醇?xì)埩袅糠治龇椒?，樣品?jīng)乙腈提取、N丙基乙二胺（PSA）凈化、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定，方法簡(jiǎn)單快速、靈敏度高，能夠滿足殘留檢測(cè)要求。
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（責(zé)任編輯：柯文輝）
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HU Yuxian， LIN Xianghua， LAI Tiancai*
（Zhangzhou Agricultural Inspection and Monitoring Center， Zhangzhou， Fujian 363000， China）
Abstract： A method based on QuEChERS combined with high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry （HPLCMS/MS） was established for the determination of fenarimol residues in loquat. The samples were extracted by acetonitrile， purified by Nprimary secondary amine （PSA）， and determined by high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry. The results showed that： the linearity of fenarimol was good in the concentration range of 0.5～200 μg·L-1 （ r 2=0.999 4）， the limit of detection was 0.14 μg·kg-1， and the limit of quantitation was 0.5 μg·kg-1. The average recovery rates of fenarimol were respectively 87.0%， 97.4% and 96.7% at the adding level of 2， 20 and 200 μg·kg-1， with the relative standard deviations （RSD） of 8.3%， 7.9% and 4.3%， respectively. The method was simple， rapid and sensitive， which could meet the requirements of residue detection.
Key words： Fenarimol; Loquat; Residue; Method of QuEChERS; HPLCMS/MS
氯苯嘧啶醇又名樂必耕，異嘧菌醇，屬低毒、廣譜的內(nèi)吸性殺菌劑，兼有保護(hù)和治療作用，是一種麥角甾醇生物合成抑制劑，能抑制病原菌菌絲生長(zhǎng)[1-3]，主要應(yīng)用于果樹、蔬菜及觀賞植物等，對(duì)白粉病、黑星病、銹病等有一定的防治效果[3-4]。枇杷果肉營(yíng)養(yǎng)豐富，風(fēng)味佳良，具有止咳潤(rùn)肺、下氣等功效[5]，深受人們的喜愛，在福建、廣東、廣西、臺(tái)灣等地廣泛種植，而漳州市是福建省枇杷種植的主要產(chǎn)區(qū)之一。在栽培過程中為防治枇杷病蟲害，農(nóng)藥的使用成為農(nóng)戶果園管理的重要手段。
迄今，國(guó)內(nèi)對(duì)氯苯嘧啶醇的研究主要集中在光化學(xué)降解與環(huán)境轉(zhuǎn)歸方面[6-10]，對(duì)其殘留檢測(cè)方法的研究較少[11-13]，而在枇杷上的殘留檢測(cè)方法尚未見報(bào)道。農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)，其樣品前處理方法主要有固相萃取法、液液萃取法、凝膠滲透色譜（GPC）法和QuEChERS法等，QuEChERS（quick，easy，cheap，effective，rugged and safe）法是由Anastassiades等[14]于2003年提出，QuEChERS前處理方法相較于其他方法，操作簡(jiǎn)單、靈敏度高，已在農(nóng)藥殘留、獸藥殘留等領(lǐng)域得到驗(yàn)證和推廣。為此，本研究采用QuEChERS進(jìn)行樣品前處理，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定枇杷中氯苯嘧啶醇?xì)埩袅?，建立QuEChERS結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法，旨在為監(jiān)測(cè)枇杷中氯苯嘧啶醇的殘留量提供依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 供試材料
1.1.1 試劑 氯苯嘧啶醇標(biāo)準(zhǔn)品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所，100 mg·L-1）;無水硫酸鎂、氯化鈉（西隴科學(xué)股份有限公司，分析純）;N丙基乙二胺
[（PSA），德國(guó)CNW公司];乙腈、甲醇、丙酮（美國(guó)天地試劑公司，色譜純）;甲酸（山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司，色譜純）;試驗(yàn)用水為超純水。
1.1.2 主要儀器設(shè)備 DIONEX Ultimate 3000Thermo TSQ Quantum Ultra EMR高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)ThermoFisher公司，帶ESI源）;318K離心機(jī)（德國(guó)Sigma公司） ;QUINTIX612上皿式天平（德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確吸取0.5 mL氯苯嘧啶醇標(biāo)準(zhǔn)品（100 mg·L-1）于10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，配制成5 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于0～4℃冰箱中避光保存?zhèn)溆谩８鶕?jù)需要分別用乙腈或空白基質(zhì)稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
1.2.2 樣品提取與凈化 參考SN/T 4138-2015《出口水果和蔬菜中敵敵畏、四氯硝基苯、丙線磷等88種農(nóng)藥殘留的篩選檢測(cè)QuEChERS氣相色譜負(fù)化學(xué)源質(zhì)譜法》[15]并適當(dāng)改進(jìn)，稱取10 g（精確至0.01 g）枇杷樣品置于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入20 mL乙腈、4 g無水硫酸鎂和1 g氯化鈉，渦旋混合2 min，于4 500 r·min-1的離心機(jī)中離心5 min。取上層有機(jī)相6.0 mL轉(zhuǎn)移至裝有0.30 g PSA、0.90 g無水硫酸鎂的離心管中，渦旋振蕩1 min，取1 mL過0.22 μm有機(jī)濾膜，待高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀分析測(cè)定。
1.2.3 檢測(cè)條件 （1）液相色譜條件。色譜柱為Atlantis T3 Column（100 mm×2.1 mm×3 μm）;流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈;進(jìn)樣量為2.0 μL;流速為0.25 mL·min-1;總運(yùn)行時(shí)間為10 min;梯度洗脫程序見表1。（2）質(zhì)譜條件。電噴霧正離子掃描（ESI+）;噴霧溫度為260℃;噴霧電壓為3 900 V;離子傳輸管溫度為300℃;鞘氣（N2）流速為3.58 L·min-1，輔助氣（N2） 流速為5.74 L·min-1，掃描模式：SRM。
1.2.4 提取溶劑的選擇 分別采用甲醇、丙酮、乙腈作為提取溶劑，其余操作步驟均按1.2.2的樣品提取與凈化進(jìn)行，添加氯苯嘧啶醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行提取回收率試驗(yàn)，根據(jù)提取效果確定最佳提取溶劑。
1.2.5 方法有效性評(píng)價(jià) 準(zhǔn)確吸取5 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋，配制成0.5、1、5、10、50、100、200 μg·L-1的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，評(píng)價(jià)方法的線性范圍和靈敏度，外標(biāo)法定量。在枇杷空白樣品中添加3個(gè)水平的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)5次，按1.2.2方法進(jìn)行操作，測(cè)定添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確度和精密度。
2 結(jié)果與分析
2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化
試驗(yàn)采用0.1%甲酸水溶液和乙腈作為流動(dòng)相，將氯苯嘧啶醇標(biāo)準(zhǔn)品稀釋到1 mg·L-1，經(jīng)注射泵注入質(zhì)譜，選擇ESI+模式，調(diào)節(jié)合適的注射泵流速及噴霧溫度、電壓等條件使響應(yīng)值信號(hào)大于106，且響應(yīng)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。先全掃描確定母離子，再選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（SRM）進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜自動(dòng)優(yōu)化，得到定性和定量離子及相應(yīng)的碰撞能量，最終確定氯苯嘧啶醇的質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)（表2）。
2.2 提取溶劑的確定
農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理常用的提取劑較多，本試驗(yàn)考察了甲醇、丙酮、乙腈3種溶劑的提取效果，結(jié)果表明氯苯嘧啶醇（添加量為100 μg·kg-1）在這3種溶劑中的平均回收率分別77.2%、97.4%和98.6%，即丙酮、乙腈的提取效果優(yōu)于甲醇。盡管在丙酮和乙腈溶劑中的回收率相差不大，但丙酮較易提取出其他雜質(zhì)，為此，本試驗(yàn)優(yōu)選乙腈作為提取劑。
2.3 方法的線性范圍和靈敏度
由于樣品中基質(zhì)效應(yīng)的存在，本試驗(yàn)采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液來進(jìn)行校正。通過向空白基質(zhì)中添加不同濃度的標(biāo)樣，配制基質(zhì)匹配系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液并進(jìn)樣分析，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，在0.5～200 μg·L-1濃度范圍內(nèi)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。氯苯嘧啶醇的線性回歸方程為 y=14 799.6x-5 369.26（r2=0.999 4）， 線性關(guān)系良好。以信噪比（S/N）的3倍和10倍計(jì)算檢出限和定量限，氯苯嘧啶醇檢出限為0.14 μg·kg-1、定量限為0.5 μg·kg-1，可滿足定量分析的要求。
2.4 方法的準(zhǔn)確度和精密度
在枇杷空白樣品中分別加入2、20和200 μg·kg-1 3個(gè)質(zhì)量水平的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，重復(fù)5次。按上述方法進(jìn)行前處理和上機(jī)測(cè)定，枇杷空白樣品和加標(biāo)樣品的提取離子流色譜圖見圖2和圖3，氯苯嘧啶醇保留時(shí)間為6.21 min;氯苯嘧啶醇的平均回收率為87.0%～97.4%、RSD為4.3%～8.3%（表3），表明該方法適用于枇杷中氯苯嘧啶醇的殘留測(cè)定。
3 結(jié)論與討論
本試驗(yàn)中供試的甲醇、丙酮、乙腈3種提取劑，甲醇的提取效果呈現(xiàn)最差，這可能與其較難與水層分離有關(guān)[16]。農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)前處理，常見的凈化劑有PSA、C18、GCB等，在試驗(yàn)中可以根據(jù)樣品的特性來選擇合適的凈化劑。PSA主要用于除去基質(zhì)中極性物質(zhì)如糖類、有機(jī)酸、脂肪酸及親脂性色素等極性物質(zhì)[17];C18可以去除脂肪酸、脂類等非極性干擾物[18];GCB對(duì)色素有較強(qiáng)的吸附凈化能力，但會(huì)吸附一些平面及對(duì)稱結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥，影響農(nóng)藥的回收率[19]。枇杷樣品提取液顏色極淺，色素、脂類等干擾物較少，為此，本試驗(yàn)中在凈化時(shí)加入PSA就能達(dá)到較好凈化效果。
關(guān)于農(nóng)產(chǎn)品中氯苯嘧啶醇?xì)埩魴z測(cè)方法的研究，王姍姍等[13]建立的QuEchERS超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，測(cè)定草莓中氯苯嘧啶醇的檢出限為0.5 μg·kg-1;梁睿等[12]建立的蘋果中氯苯嘧啶醇?xì)埩魴z測(cè)方法，測(cè)定枇杷中氯苯嘧啶醇的檢出限為<0.3 μg·kg-1。本試驗(yàn)建立的QuEChERS結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，對(duì)枇杷中氯苯嘧啶醇的檢出限可達(dá)0.14 μg·kg-1、定量限為0.5 μg·kg-1，平均回收率為87.0%～97.4%、RSD為4.3%～8.3%。對(duì)枇杷中氯苯嘧啶醇的檢出限可達(dá)0.14 μg·kg-1、定量限為0.5 μg·kg-1，平均回收率為87.0%～97.4%、RSD為4.3%～8.3%，符合NY/T 788-2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[20]規(guī)定的要求。同時(shí)，根據(jù)GB 2763-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[21]規(guī)定，枇杷中氯苯嘧啶醇的MRL為0.3 mg·kg-1，能滿足于GB 2763-2019的要求。由上表明，本試驗(yàn)所建立的枇杷中氯苯嘧啶醇?xì)埩袅糠治龇椒?，樣品?jīng)乙腈提取、N丙基乙二胺（PSA）凈化、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定，方法簡(jiǎn)單快速、靈敏度高，能夠滿足殘留檢測(cè)要求。
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（責(zé)任編輯：柯文輝）
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