淋巴細胞、血細胞及骨髓細胞檢測在鑒別再生障礙性貧血與低增生性骨髓增生異常綜合征中應(yīng)用價值

魯恒珍， 張 煌， 周帥躍， 鄭華理， 朱愛萍

安慶市第一人民醫(yī)院 血液腫瘤科，安徽 安慶 246004

再生障礙性貧血(aplastic anemia，AA)是血液系統(tǒng)常見疾病，常以骨髓造血功能低下和全血細胞減少為特征[1]，而這些特征也表現(xiàn)在低增生性骨髓增生異常綜合征(hypoplastic myelodysplastic syndrome，hypo-MDS)中[2]。AA與hypo-MDS的治療方法、預(yù)后等差異均很大，前者中期生存期可以超過174個月，而后者通常在22～33個月內(nèi)。因此，對兩者進行鑒別診斷具有重要意義[3]。本研究旨在探討淋巴細胞、血細胞及骨髓細胞檢測在鑒別AA與hypo-MDS中的應(yīng)用價值?，F(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 將安慶市第一人民醫(yī)院自2014年1月至2019年12月收治的45例AA患者[4]納入AA組、48例hypo-MDS患者[5]納入hypo-MDS組，另將25例健康體檢志愿者納入健康組。AA組中，男性30例，女性15例，中位年齡36歲；hypo-MDS組中，男性29例，女性19例，中位年齡43歲；健康組中，男性15例，女性10例，中位年齡38歲。排除標準：存在感染和其他自身免疫性疾病；應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑。3組研究對象一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。研究對象均簽署知情同意書。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 研究方法 收集3組研究對象3～5 ml外周血，收集AA組和hypo-MDS組患者2～3 ml骨髓血。采用FACSC alibur流式細胞儀(Becton Dickinson，美國)檢測外周血T淋巴細胞亞群，Sysmex XE-2100血細胞分析儀(Sysmex，日本)檢測血細胞計數(shù)，Cytomics FC500流式細胞儀(Beckman Coulter，美國)檢測骨髓細胞。采用全血/溶血紅細胞法制備標本，單克隆抗體標記細胞，四色免疫熒光檢測外周血和骨髓血(外周血：FITC/PE/Percp/APC；骨髓血：FITC/PE/PC5/PC7)。

2 結(jié)果

2.1 3組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比較 3組CD3+比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。hypo-MDS組、AA組CD3+CD8+高于健康組，CD3+CD4+、CD4+/CD8+低于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比較

2.2 hypo-MDS組和AA組CD3-CD16/CD56+自然殺傷細胞、CD3+CD57+T-大顆粒淋巴細胞、CD19+B淋巴細胞比較 AA組CD3-CD16/CD56+自然殺傷細胞、CD3+CD57+T-大顆粒淋巴細胞低于hypo-MDS組，CD19+B淋巴細胞高于hypo-MDS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 hypo-MDS組和AA組CD3-CD16/CD56+自然殺傷細胞、CD3+CD57+T-大顆粒淋巴細胞、CD19+B淋巴細胞比較

2.3 hypo-MDS組和AA組白細胞、紅細胞、血小板計數(shù)及網(wǎng)織紅細胞比較 hypo-MDS組、AA組白細胞、紅細胞、血小板計數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。AA組網(wǎng)織紅細胞低于hypo-MDS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 hypo-MDS組和AA組白細胞、紅細胞、血小板計數(shù)及網(wǎng)織紅細胞比較

2.4 hypo-MDS組和AA組骨髓原始細胞比率比較 AA組骨髓原始細胞比率為(0.52%±0.19%)，低于hypo-MDS組的(1.10%±0.35%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

AA和hypo-MDS均為骨髓造血功能衰竭疾病，在臨床特征上顯示出多種相似性[6]，但兩者的治療和預(yù)后存在顯著差異，與AA相比，hypo-MDS的白血病轉(zhuǎn)化率更高[7]，存活期更短。T淋巴細胞是重要的免疫細胞群，其亞群之間的相互作用可維持人體的正常免疫功能，當不同亞群的數(shù)量和功能異常時，可能引起免疫功能障礙，誘發(fā)一系列病理變化。在血液系統(tǒng)中，T淋巴細胞亞群異?？赡鼙憩F(xiàn)為AA、骨髓增生異常綜合征、血小板減少性紫癜等。有研究表明，AA與T細胞功能亢進引起的造血組織損傷密切相關(guān)[8]，AA患者的CD4+/CD8+降低[9-10]。同時，免疫機制異常在骨髓增生異常綜合征中也發(fā)揮重要作用[11-13]，骨髓增生異常綜合征患者外周血和骨髓中T淋巴細胞亞群比例異于常人[14-15]。Maciejewski等研究發(fā)現(xiàn)，CD8+淋巴細胞與AA發(fā)病有關(guān)[16]。Viale等[17]研究顯示，重癥AA患者的骨髓和外周血CD8+細胞集落明顯高于正常人。Smith等[18]研究報道，骨髓增生異常綜合征患者存在T抑制因子。Molldrem等[19]研究證明，異常T細胞克隆可以抑制粒細胞和巨噬細胞集落形成。因此，觀察患者的免疫狀態(tài)對于了解和治療疾病意義重大，而T淋巴細胞亞群的檢測是評估患者免疫狀態(tài)的優(yōu)質(zhì)指標。本研究結(jié)果顯示：hypo-MDS組、AA組CD3+CD8+高于健康組，CD3+CD4+、CD4+/CD8+低于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示T淋巴細胞亞群比例失衡可能與hypo-MDS、AA的發(fā)病有關(guān)。呂遠飛等[20]根據(jù)CD4+/CD8+將hypo-MDS和AA患者分入正常比例組(1.02～1.95)、倒置比例組(比例<1.02)、高比例組(比例>1.95)3個亞組，結(jié)果顯示，淋巴細胞亞群的變化可作為AA與hypo-MDS鑒別診斷的參考指標，根據(jù)淋巴細胞CD4+/CD8+將患者分為亞組進行比較更有利于鑒別的準確性。但本研究中，hypo-MDS組與AA組CD4+/CD8+差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與上述研究[20]結(jié)果不同。因此，是否可以基于CD4+/CD8+來區(qū)分AA與hypo-MDS還有待進一步研究。

自然殺傷細胞作為自然免疫中一種重要的大顆粒淋巴細胞，與腫瘤細胞的早期免疫監(jiān)測和殺傷密切相關(guān)。自然殺傷細胞可通過直接殺傷或分泌γ干擾素、腫瘤壞死因子等細胞因子抑制骨髓增生異常綜合征和AA的骨髓造血細胞[21]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AA組CD3-CD16/CD56+自然殺傷細胞、CD3+CD57+T-大顆粒淋巴細胞低于hypo-MDS組，CD19+B淋巴細胞高于hypo-MDS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。造血干細胞損傷引起的全血細胞減少可能是導(dǎo)致兩組患者大顆粒淋巴細胞比例低于正常參考值的主要原因。

骨髓造血細胞受到損傷后，淋巴細胞和其他非造血細胞會相對增加。骨髓原始細胞及成熟淋巴細胞可作為區(qū)分hypo-MDS與AA的重要指標[22]。本研究中，AA組骨髓原始細胞比率低于hypo-MDS，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這表明，骨髓細胞可能被免疫細胞的異常功能所破壞。

綜上所述，外周血T淋巴細胞亞群、大顆粒淋巴細胞、B淋巴細胞、血細胞、骨髓細胞綜合檢測可提高AA與hypo-MDS鑒別診斷的準確性。