卡爾費休容量法測定凍干人用狂犬病疫苗（Vero細胞）中水分含量

馮雪 李婷婷 鄭欣 蒼鵬 王佳欣 楊紅育

（長春生物制品研究所有限責任公司 吉林長春 130012）

1 前言

凍干人用狂犬病疫苗（Vero細胞）是用狂犬病病毒固定毒接種于Vero細胞，主要用于預防狂犬病?！吨袊幍洹?020年版三部中收載的水分測定法包括費休氏法、烘干法、減壓干燥法、甲苯法和氣相色譜法[1]。此外，熱重分析法、差式掃描量熱法等方法也常應用于藥物中水分的分析[2-9]。本文參照《中國藥典》中卡爾費休容量法，聯(lián)用市售卡氏干燥爐測定水分，并將測定的結果與未聯(lián)用卡氏干燥爐的方法進行比較。

2 儀器與試劑

2.1 儀器

V30型水分測定儀（METTLER TOLEDO）；Stromboli型卡氏干燥爐（METTLER TOLEDO）；XS205型電子天平（METTLER TOLEDO）。

2.2 試劑

無水甲醇（國藥集團化學試劑有限公司）；1mg/mL費休氏試液（Merck）；2mg/mL費休氏試液（Merck）；5 mg/mL費休氏試液（Merck）；固體標準水（Merck）。

2.3 實驗樣品

凍干人用狂犬病疫苗（Vero細胞）（長春生物制品研究所有限責任公司）。

3 實驗方法

3.1 卡氏爐-卡爾費休聯(lián)用法

3.1.1 操作條件

（1）卡氏干燥爐加熱溫度：150℃±2℃。

（2）卡氏干燥爐加熱時間：10 min。

（3）費休氏試液滴定度：1、2、5 mg/ml。

（4）載氣：空氣。

3.1.2 樣品測定

精密稱取樣品適量于樣品瓶中，密封后將其放入卡氏干燥爐的相應位置并啟動，用費休氏試液滴定至終點。

3.2 卡爾費休法

以無水甲醇為溶劑，按照《中國藥典》中的卡爾費休容量法測定。

4 結果與討論

4.1 費休氏試劑滴定度的選擇

不同滴定度的費休氏試液測定結果的相對標準偏差為0.103%，無明顯差異。

4.2 稱樣量的選擇

采用滴定度為1 mg/ml的費休氏試劑，在150℃加熱10 min的測定條件下，分別稱取0.04、0.08、0.12、0.16、0.20 g的樣品，考察樣品程樣量對測定結果的影響。結果表明，不同樣品稱量質量測定結果的相對標準偏差為0.048%，無明顯差異。

4.3 精密度實驗

采用滴定度為1 mg/ml的費休氏試劑，150℃加熱10 min的測定條件下，由2位不同實驗人員在不同時間對樣品進行測定，每位實驗人員精密稱取6份樣品測定水分，測定結果見表1。計算2位實驗人員12次測定結果的RSD為0.128%，精密度良好。

表1 精密度實驗的測定結果（%）

4.4 回收率實驗

經(jīng)測定，加標回收率在87.74%～105.01%。

4.5 比對實驗

以無水甲醇為溶劑，按照《中國藥典》卡爾費休容量法，由2位不同實驗人員在不同時間對樣品進行測定，每位實驗人員精密稱取6份樣品測定水分，并將測定結果與精密度實驗結果進行比對。實驗人員A與實驗人員B比對結果的RSD分別為0.0877%和0.133%，結果基本一致。

5 結論

本文建立了凍干人用狂犬病疫苗（Vero細胞）水分的檢測方法，考察了該方法的影響因素。研究表明，費休氏試液滴定度及稱量質量對檢測結果無顯著影響；采用2種方法對樣品進行測定，結果表明2種方法的測定結果基本一致，但聯(lián)用卡氏干燥爐能夠避免樣品中其他輔料對測定結果的影響，操作方便簡潔，準確度高，為凍干人用狂犬病疫苗（Vero細胞）水分的檢測提供參考方法。