艾條灸和雷火灸對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)大鼠扭體反應(yīng)及血清PGF2α含量影響的對(duì)比研究

羅秋平，朱東發(fā)，劉川，唐茂林，潘莉

（貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550025）

0 引言

痛經(jīng)是指與經(jīng)期相關(guān)的小腹疼痛、墜脹及伴有腰酸的婦科癥狀，分為原發(fā)性痛經(jīng)和繼發(fā)性痛經(jīng)[1]。原發(fā)性痛經(jīng)（primary dysmenorrhea, PD）的臨床檢查生殖系統(tǒng)無(wú)器質(zhì)性病變，前列腺素（prostaglandin,PG）水平升高是主要異常改變[2]。PD的發(fā)病率高，占痛經(jīng)的90%[1]，其周期發(fā)作的特點(diǎn)給患者帶來(lái)了巨大的精神壓力及生活負(fù)擔(dān)。艾條灸可有效緩解原發(fā)性痛經(jīng)癥狀，主要通過(guò)熱效應(yīng)發(fā)揮溫通止痛的療效，操作簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉[3]。雷火灸作為灸法中的一種，與普通艾條灸相比，同等條件下的平均熱力比普通艾條灸高出10℃以上[4]，同時(shí)雷火灸可產(chǎn)生紅外效應(yīng)可以更好地起到溫經(jīng)通絡(luò)止痛的目的[5]。因此，本研究將專(zhuān)門(mén)針對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)人群，建立實(shí)驗(yàn)性痛經(jīng)動(dòng)物模型，觀察普通艾條灸與雷火灸對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)大鼠動(dòng)物模型扭體反應(yīng)及血清PGF2α含量影響的療效差異，為臨床使用雷火灸治療原發(fā)性痛經(jīng)提供參考和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

本實(shí)驗(yàn)采用清潔級(jí)SD雌性大鼠，性成熟、未交配體，體質(zhì)量約為（240±20）g，購(gòu)自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：SCXK（京）2018-0012。飼養(yǎng)在溫度為（23±1）℃，相對(duì)濕度為（45±5）%環(huán)境中，期間日光燈光照，12h/12h晝夜交替，普通清潔級(jí)大鼠飼料，自由飲水。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格有關(guān)動(dòng)物使用以及倫理學(xué)規(guī)定進(jìn)行操作。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，通過(guò)陰道涂片美藍(lán)染色，確定大鼠的動(dòng)情周期階段。將處于動(dòng)情間期的32只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、艾灸組、雷火灸組，每組8只。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

艾條（貴州安迪藥械有限公司），雷火灸條（湖北博康醫(yī)藥科技有限公司），己烯雌酚注射劑（天津金耀藥業(yè)有限公司），縮宮素注射液（馬鞍山豐原制藥有限公司），PGF2α酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（伊萊瑞特生物科技有限公司）；離心機(jī)(Thermo Fisher Scientific，美國(guó))；多功能酶標(biāo)儀 (Molecular Devices，美國(guó) )；低溫冰箱（DW-86L386，青島 Haier集團(tuán)）。

1.3 造模方法

按參考文獻(xiàn)[6-8]方法進(jìn)行大鼠痛經(jīng)模型制備。除正常組外，其余各組采用己烯雌酚結(jié)合注射縮宮素法制備原發(fā)性痛經(jīng)大鼠模型。即皮下注射己烯雌酚，第1天及第10天每日注射0.5mg/只，第2天至第9天每日注射0.2mg/只，正常組皮下注射等量0.9%氯化鈉溶液。模型組及艾灸組、雷火灸組于末次治療1h后，腹腔注射縮宮素2U/只，正常組腹腔注射等體積生理鹽水。

1.4 治療方法

艾灸組采用普通清艾條灸、雷火灸組使用雷火灸條，進(jìn)行灸法治療，每日1次、每次15min，連續(xù)10天。大鼠穴位定位依據(jù)余曙光、徐斌《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[9]大鼠取穴標(biāo)準(zhǔn)，關(guān)元：臍下約25mm處腹中線上，仰臥取位；三陰交：后肢內(nèi)踝尖直上10mm；太沖：后肢足背第1第2跖骨間凹陷處。參考文獻(xiàn)[10]艾灸方法：先將大鼠關(guān)元、三陰交、太沖處毛去除，艾灸組點(diǎn)燃艾條放置在離大鼠皮膚2-3cm處，每穴灸15min，雷火灸組點(diǎn)燃雷火灸條放置在離大鼠皮膚2-3cm處，每穴灸15min。正常組、模型組同樣抓取但不做治療。

1.5 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

扭體反應(yīng)觀察[11]：最后一次治療后1h，除空白組外，其余各組大鼠腹腔注射縮宮素2U/只，注射縮宮素后立即開(kāi)始計(jì)時(shí)，記錄 30 min 內(nèi)每只大鼠的扭體次數(shù)。

血清中PGF2α含量檢測(cè)：扭體反應(yīng)觀察后的大鼠，注射2%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，于腹主動(dòng)脈取血6-8mL，將取到的血液靜止2h，3500r/min離心10min，取血清，放于-80℃冰箱，待檢。用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)各組大鼠血清中的PGF2α水平表達(dá)情況。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)大鼠扭體反應(yīng)的影響

除正常組外，30min內(nèi)其余各組均有扭體反應(yīng)；與正常組相比，模型組大鼠扭體次數(shù)明顯增多（P<0.01）；與模型組相比，艾灸組和雷火灸組大鼠扭體次數(shù)明顯減少（P<0.01）；雷火灸組大鼠扭體次數(shù)少于艾灸組。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠30min內(nèi)扭體次數(shù)比較（±s）

表1 各組大鼠30min內(nèi)扭體次數(shù)比較（±s）

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，P<0.01。

組別 數(shù)量（n） 30min內(nèi)扭體次數(shù)正常組 8 -模型組 8 17.88±1.69**艾灸組 8 9.88±1.11##雷火灸組 8 8.38±1.73##

2.2 各組大鼠血清PGF2α含量變化比較

與正常組相比，模型組大鼠血清PGF2α含量顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，艾灸組和雷火灸組大鼠血清PGF2α含量顯著降低（P<0.01）；雷火灸組大鼠血清PGF2α含量少于艾灸組。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清中PGF2α含量比較（pg/mL，±s）

表2 各組大鼠血清中PGF2α含量比較（pg/mL，±s）

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01。

組別 例數(shù)n 前列腺素PGF2α(pg/mL)正常組 8 106.25±5.36模型組 8 201.25±7.19**艾灸組 8 157.50±6.50##雷火灸組 8 148.63±7.12##

3 討論

原發(fā)性痛經(jīng)在中醫(yī)屬“經(jīng)行腹痛”，痛證的發(fā)作病因分為“不通”及“不榮”?！安煌ā闭邔?shí)，胞宮氣血運(yùn)行不暢，與氣滯、血瘀、寒凝等有關(guān)；“不榮”者虛，沖任胞宮失于濡養(yǎng)，與氣血不足等有關(guān)，大多數(shù)患者的痛經(jīng)發(fā)作與“不通”關(guān)系密切，其中辨證為寒凝證占大多數(shù)[12]?；诮?jīng)絡(luò)腧穴理論，本研究中選取的關(guān)元、三陰交及太沖為原發(fā)性痛經(jīng)的高頻用穴[13]，關(guān)元為任脈與足三陰經(jīng)交會(huì)穴，屬近部取穴，有培元固本，溫通胞脈的療效，現(xiàn)代研究中，關(guān)元穴與子宮的傳入神經(jīng)纖維有密切的神經(jīng)基礎(chǔ)聯(lián)系[14]。三陰交是足肝脾腎三陰經(jīng)的交會(huì)穴，可同時(shí)三經(jīng)氣。月經(jīng)以血為基礎(chǔ)，氣為血之帥，血為氣之母，調(diào)經(jīng)則需氣血通調(diào)，太沖為肝經(jīng)的原穴，有理氣活血的作用。

扭體反應(yīng)主要指觀察大鼠腹部收縮向內(nèi)陷，軀干與后肢呈伸展?fàn)顟B(tài)，臀部與單側(cè)肢體內(nèi)旋情況，可用于代表痛經(jīng)大鼠的疼痛癥狀[7]，是本研究成功制備痛經(jīng)模型的依據(jù)，同時(shí)可反映治療后疼痛的改善情況，作為行為學(xué)指標(biāo)。本研究中，模型組、艾灸組、雷火灸組的每分鐘扭體反應(yīng)客觀地反映了模型制備成功，而治療后與模型組比較，艾灸組、雷火灸組的扭體反應(yīng)次數(shù)明顯減少；且雷火灸組扭體次數(shù)少于艾灸組，這表明雷火灸與傳統(tǒng)艾條灸均可有效改善原發(fā)性痛經(jīng)的疼痛癥狀，而雷火灸的療效更優(yōu)。

目前認(rèn)為原發(fā)性痛經(jīng)發(fā)生的主要原因是前列腺素增多，前列腺素主要包括PGE2和PGF2α。PGF2α的受體位于螺旋小動(dòng)脈壁上，高濃度的PGF2α在經(jīng)期時(shí)使子宮平滑肌收縮痙攣，減少子宮血流，子宮因此而缺血，盆腔神經(jīng)末梢受到化學(xué)、物理刺激，痛閾降低出現(xiàn)痛經(jīng)[2]。因此子宮血流情況是痛經(jīng)發(fā)作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。有研究證實(shí)，灸法可降低原發(fā)性痛經(jīng)患者的血清PGF2α含量從而改善痛經(jīng)癥狀[15]，主要通過(guò)對(duì)穴位進(jìn)行溫?zé)岽碳み_(dá)到改善子宮微循環(huán)的作用[16]，同時(shí)灸法的溫度越高，鎮(zhèn)痛效應(yīng)越好[17]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果示，艾條灸和雷火灸均可有效減少大鼠血清中PGF2α水平，而雷火灸的減少情況更優(yōu)。這說(shuō)明雷火灸在艾絨的基礎(chǔ)上多加了沉香、木香、干姜等藥物，豐富的藥力因子使雷火地發(fā)揮了高溫及紅外照射的優(yōu)勢(shì)，通過(guò)減少大鼠血清PGF2α水平，抑制子宮平滑肌收縮痙攣，改善子宮微循環(huán)，從而達(dá)到更好的止痛效果。

綜上，傳統(tǒng)艾灸及雷火灸均能緩解原發(fā)性痛經(jīng)的癥狀與發(fā)病，但雷火灸藥物產(chǎn)生的熱輻射及紅外照射的溫?zé)嶙饔媚茌^明顯減少大鼠血清中前列腺素PGF2α水平，表現(xiàn)出較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛療效?？蛇M(jìn)一步開(kāi)展雷火灸對(duì)于治療原發(fā)性痛經(jīng)的其他證型及改善原發(fā)性痛經(jīng)其他相關(guān)客觀指標(biāo)的研究，從而進(jìn)一步增加雷火灸法治療原發(fā)性痛經(jīng)的科學(xué)依據(jù)。