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    熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)乙型肝炎病毒的臨床價(jià)值

    2021-09-13 01:54:36李秀萍何彩云黃澤棋魏海清
    大醫(yī)生 2021年9期
    關(guān)鍵詞:乙型肝炎定量熒光

    李秀萍,何彩云,黃澤棋,魏海清

    (1.佛山市人民政府機(jī)關(guān)門(mén)診部檢驗(yàn)科;2.佛山市人民政府機(jī)關(guān)門(mén)診部?jī)?nèi)科; 3.佛山市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東佛山 528099)

    乙型肝炎是指乙型肝炎病毒(HBV)感染,病程在半年以上或發(fā)病日期不明,伴有慢性肝炎表現(xiàn)的患者,屬于臨床常見(jiàn)的傳染性疾病,其具有較高的患病率和感染率,隨著病情進(jìn)展,嚴(yán)重者可出現(xiàn)肝硬化、原發(fā)性肝癌等病變。因此,臨床及時(shí)診斷乙型肝炎并準(zhǔn)確判定病情嚴(yán)重程度具有重要的意義。實(shí)施酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)行檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn),但該方法只能反映患者對(duì)HBV病毒的免疫應(yīng)答狀態(tài),而不能準(zhǔn)確反映機(jī)體HBV感染復(fù)制情況和傳染危險(xiǎn)性[1]。熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)對(duì)HBV患者基因的檢測(cè)具有重要的應(yīng)用價(jià)值,其可直接、動(dòng)態(tài)地反映HBV病毒的復(fù)制狀態(tài)及傳染危險(xiǎn)性,從而判斷患者的疾病狀況[2]。本研究旨在探討熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)慢性HBV的臨床價(jià)值,以期為患者臨床治療提供參考價(jià)值,現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 回顧性分析2019年3月至2020年12月在佛山市第二人民醫(yī)院治療的192例乙型肝炎患者的臨床資料,其中男性121例,女性71例;年齡25~67歲,平 均(44.61±4.82)歲;體 質(zhì) 量45~72 kg,平 均(66.63±3.18)kg。診斷標(biāo)準(zhǔn):參照《乙型肝炎防治指南(2015年更新版)》[3]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者;無(wú)腎、心、肺等重要臟器功能障礙者;無(wú)精神系統(tǒng)疾病者。排除標(biāo)準(zhǔn):凝血功能障礙者;患有惡性腫瘤疾病者;患有免疫系統(tǒng)和嚴(yán)重內(nèi)科疾病者。本研究經(jīng)佛山市第二人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施。

    1.2 方法

    1.2.1 HBV免疫學(xué)檢測(cè) 患者首先采用ELISA法進(jìn)行乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物 -M(HBV-M)的定性檢測(cè)。抽取患者清晨空腹靜脈血5 mL,于4 ℃條件下放置2 h后,分離血清,檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(HbsAb)、乙型肝炎e抗原(HbeAg)、乙型肝炎e抗體(HbeAb)、乙型肝炎表面核心抗體(HbcAb),嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢驗(yàn)操作與結(jié)果評(píng)定。

    1.2.2 HBV-DNA定量測(cè)定 采用PCR技術(shù)對(duì)HBV- 脫氧核糖核苷酸(DNA)水平進(jìn)行檢測(cè),血樣采集方法同1.2.1,置于真空惰性分離膠促凝管中,進(jìn)行離心操作(3 000 r/min,10 min)制備血漿標(biāo)本,采用熒光定量分析儀進(jìn)行熒光定量PCR測(cè)定乙型肝炎病毒HBV-DNA 水平。所有操作均由同一位有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)進(jìn)行。

    1.3 觀察指標(biāo) ①分析ELISA法檢測(cè)HBV-M結(jié)果。②分析熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)HBV-DNA結(jié)果。③比較不同病情程度患者HBV-DNA水平。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料用[ 例(%)]表示,行χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料用(±s)表示,行t檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 ELISA法檢測(cè)HBV-M結(jié)果 本研究192例乙型肝炎患者血液標(biāo)本中,HBV-M的定性檢測(cè)有8種模式,其中HBsAg+HbeAg+HbcAb、HBsAg+HbsAb+HbcAb模式陽(yáng)性檢出率分別為25.52%、35.42%,均高于其他模式陽(yáng)性檢出率,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),見(jiàn)表1。

    表1 ELISA檢測(cè)HBV-M結(jié)果

    2.2 熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA結(jié)果 HBsAg+HbeAg+ HbcAb、HBsAg+HbsAb+HbcAb模式的HBV-DNA 陽(yáng)性檢出率高于其他模式的陽(yáng)檢出性率,HBsAg+ HbeAg+HbcAb、HBsAg+HbsAb+HbcAb模式的HBVDNA表達(dá)水平高于其他模式的HBV-DNA表達(dá)水平,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),見(jiàn)表2。

    表2 PCR檢測(cè)HBV-DNA結(jié)果

    2.3 不同病情程度患者HBV-DNA水平 重度乙型肝炎患者HBV-DNA水平高于輕、中度患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),見(jiàn)表3。

    表3 不同病情程度患者HBV-DNA水平比較 (±s,×104copies/mL)

    表3 不同病情程度患者HBV-DNA水平比較 (±s,×104copies/mL)

    注:與輕度組比,△P<0.05;與中度組比,▲P<0.05。 HBV-DNA:乙型肝炎病毒 - 脫氧核糖核苷酸。

    病情 例數(shù) HBV-DNA輕度 51 23.60±4.40中度 98 147.85±20.05△重度 43 254.80±27.01△▲F值 1 691.102 P值 <0.05

    3 討論

    乙型肝炎屬于臨床常見(jiàn)的一種感染性疾病,其具有較強(qiáng)的傳染力,當(dāng)機(jī)體感染HBV后可引起免疫性病理?yè)p害,且肝細(xì)胞的受損程度與機(jī)體免疫應(yīng)答密切相關(guān)。乙型肝炎患者早期癥狀較為隱匿,大部分患者被確診時(shí)已處于中晚期,因此錯(cuò)過(guò)了最佳的治療時(shí)機(jī),隨著疾病進(jìn)展,可引發(fā)肝硬化、肝癌等,嚴(yán)重威脅患者的生命安全。因此,臨床早期診斷并及時(shí)給予有效的治療具有重要的意義。

    目前臨床主要采用的檢測(cè)方法有ELISA法、熒光定量PCR技術(shù)等,ELISA法具有操作簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、靈敏度高等特點(diǎn),但由于該檢測(cè)方法只能通過(guò)反映患者對(duì)HBV感染免疫應(yīng)答狀態(tài),從而間接地對(duì)HBV進(jìn)行診斷,無(wú)法對(duì)HBV感染程度進(jìn)行測(cè)定,故存在一定的局限性[4]。熒光定量PCR技術(shù)能夠反映HBV的復(fù)制情況和傳染性,能夠?qū)σ腋尾《綝NA的轉(zhuǎn)錄進(jìn)行檢驗(yàn),避免出現(xiàn)漏診,該技術(shù)的應(yīng)用提高了對(duì)HBV的檢測(cè)準(zhǔn)確性,從而為臨床病情診斷提供重要依據(jù)[5-6]。

    HBV-M主要包括HBsAg、HbsAb、HbeAg等,其中HBsAg+HbeAg+HbcAb又被稱(chēng)為“大三陽(yáng)”,表明機(jī)體存在HBV感染且病毒處于活躍期,具有病毒數(shù)量多且傳染性強(qiáng)的特點(diǎn);HBsAg+HbsAb+HbcAb屬于“小三陽(yáng)”,HBsAg+HbeAg又被稱(chēng)為“大二陽(yáng)”,表明機(jī)體存在HBV感染,但需根據(jù)肝功能損傷情況來(lái)進(jìn)行相應(yīng)的治療[7-8]。本研究結(jié)果顯示,ELISA法檢測(cè)HBV-M結(jié)果中,HBsAg+HbeAg+HbcAb、HBsAg+HbsAb+ HbcAb模式陽(yáng)性檢出率較高,同時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)HBV-DNA結(jié)果中,HBsAg+HbeAg+HbcAb、HBsAg+HbsAb+HbcAb模式的HBV-DNA陽(yáng)性檢出率較高,表明ELISA法和PCR技術(shù)均可準(zhǔn)確判斷患者是否處于HBV感染期。同時(shí)本研究結(jié)果顯示,HBsAg+ HbeAg模式的陽(yáng)性率低于HBsAg+HbeAg+HbcAb,但HBV-DNA表達(dá)水平仍較高,表明該模式下患者仍存在HBV-DNA復(fù)制,因此臨床不能僅依靠血清學(xué)來(lái)判定結(jié)果,仍需通過(guò)檢測(cè)HBV-DNA對(duì)患者病情進(jìn)行監(jiān)測(cè)。相關(guān)研究顯示,HBV-DNA水平越高,則其復(fù)制能力也隨之增強(qiáng),可加重對(duì)肝臟組織的損害,嚴(yán)重者甚至導(dǎo)致肝硬化、肝衰竭等,增加肝癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[9]。本研究中,重度乙型肝炎患者HBV-DNA水平高于輕、中度患者,提示HBV-DNA水平與慢性乙肝患者的病情呈正相關(guān)。

    綜上,相較于ELISA法,熒光定量PCR技術(shù)可定量反映病毒感染、復(fù)制情況,為早期診斷乙型肝炎、監(jiān)測(cè)病情歸轉(zhuǎn)提供重要依據(jù)。

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