山豆根正丁醇部位化學(xué)成分及其抗菌活性研究

魏鑫 張衛(wèi) 丁彩鳳 于浩飛 張麗艷 周英

摘 要： 山豆根為豆科植物越南槐（Sophora tonkinensis）的干燥根和根莖，常用于治療咽喉部感染性疾病，其大極性提取物已經(jīng)報(bào)道了具有較好的抑菌活性潛力。為了深入探究山豆根大極性抗菌活性成分，該文綜合運(yùn)用硅膠柱色譜、ODS柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜、半制備HPLC等分離純化方法對(duì)山豆根正丁醇部位化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定，并開展了單體成分抗細(xì)菌（糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌）和真菌（白色念珠菌）的活性評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：從山豆根正丁醇部位中共分離鑒定得到10 個(gè)化合物，分別為2′，4′，7-trihydroxy-6，8-bis（3-methyl-2-butenyl）flavanone （1）、染料木苷（2）、2-（2′，4′-二羥基苯基）-5，6-二氧亞甲基苯并呋喃 （3）、maltol-β-D-glucopyranoside （4）、leonuriside A （5）、松柏醇-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6）、光甘草酚（7）、2-（2′，4′-dihydroxy-phenyl）-8，8-dimethyl-10-（3-methyl-2-butenyl）-8H-pyrano [2，3-d]chroman-4-one （8）、氧化苦參堿（9）、番石榴酸（10），其中化合物4-6首次從該植物中分離得到。生物活性測(cè)試結(jié)果表明化合物1-3具有一定的抑菌作用，化合物2對(duì)綠膿桿菌的最小抑菌濃度（MIC）值為15.6 μg·mL-1，化合物3對(duì)白色念珠菌和大腸桿菌的MIC值均為31.3 μg·mL-1。

關(guān)鍵詞： 山豆根， 化學(xué)成分， 提取分離， 抑菌活性

中圖分類號(hào)： Q946 ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A ?文章編號(hào)： 1000-3142（2021）07-1054-07

Abstract： The dried roots of Sophora tonkinensis were commonly used as the treatment of the throat and other infectious diseases. In order to identify its large polar antibacterial active components， silica gel column chromatography （CC）， ODS CC and Sephadex LH-20 CC and semi preparative HPLC were used to isolate the chemical constituents from n-butanol fraction of S. tonkinensis. The antibacterial activities of the monomers against bacteria （Enterobacter faecalis， Staphylococcus aureus， Pseudomonas aeruginosa， Escherichia coli） and fungi （Candida albicans） were evaluated. The results showed ten compounds were isolated and identified as 2′，4′，7-trihydroxy-6，8-bis（3-methyl-2-butenyl）flavanone（1），genistin（2）， 2-（2′，4′-dihydroxy）-5，6-dioxomethylbenzofuran（3）， maltol-β-D-glucopyranoside（4）， leonuriside A（5），coniferylalcohol-9-O-β-D-glucopyranoside（6），glabrol（7），2-（2′，4′-dihydroxy-phenyl）-8，8-dimethyl-10-（3-methyl-2-butenyl）-8H-pyrano [2，3-d]chroman-4-one （8）， oxymatrine （9）， piscidic acid （10）. Among of them， compounds 4-6 were isolated from the title plant for the first time， for our knowledge. Besides， biological activity test showed the potential antibacterial activities of compounds 1-3. It is worth mentioning that the minimum inhibitory concentration （MIC） value of compound 2 against Pseudomonas aeruginosa was 15.6 μg·mL-1， while the MIC of compound 3 against Candida albicans and Escherichia coli were 31.3 μg·mL-1.

Key words： Sophora tonkinensis， chemical constituents， extraction and isolation， antibacterial activities

山豆根為豆科植物越南槐（Sophora tonkinensis）的干燥根和根莖，主要分布于貴州、廣西、廣東、云南、江西等地，性味苦寒，有毒，歸肺、胃經(jīng)，具有清熱解毒、消腫利咽等功效，主要用于咽喉腫痛、齒齦腫痛等癥，現(xiàn)收載于2015版中國藥典（國家藥典委員會(huì)，2015）。山豆根作為貴州三力制藥上市咽喉抗感染藥品“開喉劍噴霧劑”的組方藥材，主要含有生物堿、黃酮類、三萜類及酚類等化學(xué)成分，具有抗菌、抗炎、抗病毒等藥理作用（潘其明，2016;程錢等，2017;聶安政等，2018）。山豆根大極性提取物已經(jīng)報(bào)道了具有較好的抑菌活性潛力（吳達(dá)榮等，2006），為了深入探究山豆根大極性抗菌活性成分，該研究綜合運(yùn)用經(jīng)典和現(xiàn)代分離純化方法從山豆根正丁醇部位中共分離得到10 個(gè)化合物 （圖1），其中化合物4-6首次從該植物中分離得到，此外，深入開展了單體成分抗細(xì)菌（糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌）和真菌（白色念珠菌）的活性評(píng)價(jià)研究，研究結(jié)果表明化合物1-3具有一定的抑菌活性，最小抑菌濃度（MIC）值為15.6～125.0 μg·mL-1，該研究豐富了山豆根的物質(zhì)基礎(chǔ)，為進(jìn)一步的藥理藥化研究提供科學(xué)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器和試劑

1.1.1 材料 山豆根藥材于 2019年 9 月采自貴州三力制藥有限公司，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定為豆科植物越南槐（Sophora tonkinensis）的干燥塊根，標(biāo)本保存于貴州中醫(yī)藥大學(xué)，標(biāo)本號(hào)為WX_20190901。白色念珠菌（Candida albicans）、糞腸球菌（Enterobacter faecalis）、金黃色葡萄球菌（Staphyloccus aureus）、綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa）、大腸桿菌（Escherichia coli）由北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院提供。

1.1.2 儀器和試劑 核磁共振譜1H和13C以及DEPT譜圖測(cè)試于Bruker Avance NEO 600 MHz核磁共振波譜儀（瑞士布魯克公司）;半制備液相系統(tǒng)LC52[Separation（Beijing）科技公司];RE-5210A/ER-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）;SHZ-DⅢ 循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）;HCB-1300V型垂直層流潔凈工作臺(tái)（青島海爾特種電器有限公司）;HIRAYAMA立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海土森視覺科技有限公司）;薄層色譜（TLC）硅膠板（青島海洋化有限公司）;Sephadex LH-20凝膠（GE Healthcare Bio-Sciences， Uppsala， Sweden）;MCI GEL-CHP 20P（Mitsubishi Chemical Co.， Ltd. Japan）;柱層析硅膠（青島海洋化工有限公司）;頭孢噻呋（騰龍生物藥業(yè)有限公司），氟康唑（亞邦愛普森藥業(yè)有限公司）;分析純二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、甲醇、乙醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司） 。

1.2 研究方法

1.2.1 提取與分離 山豆根干燥藥材20 kg，粗粉碎后用工業(yè)甲醇50 L于70 ℃加熱回流提取3次，每次2 h，合并三次提取液，減壓回收濃縮至浸膏649.1 g，將浸膏充分混懸于蒸餾水中，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取。取正丁醇部位萃取浸膏（400 g）硅膠拌樣，使用不同梯度的二氯甲烷∶甲醇（1∶0～0∶1）進(jìn)行洗脫，TLC點(diǎn)板合并極性相同的部分得到8個(gè)極性段位（RS-RZ），保存。取RT （9.02 g）過硅膠柱，使用不同梯度的石油醚∶乙酸乙酯（1∶0～0∶1）洗脫，經(jīng)過Sephadex LH-20 （甲醇）洗脫、半制備HPLC（甲醇-水（30∶100，V/V）梯度洗脫，得到化合物1 （3.3 mg）、化合物3 （5.3 mg）、化合物7 （3.0 mg）、化合物8 （3.0 mg）。取RU （8.40 g）經(jīng)過ODS柱，使用甲醇-水（V/V） （1∶9～1∶0）梯度洗脫，經(jīng)過半制備HPLC [甲醇-水（30∶100，V/V]梯度洗脫和Sephadex LH-20（甲醇）洗脫得到化合物2 （7.3 mg）、化合物4 （5.6 mg）、化合物5 （13.6 mg）、化合物6 （4.9 mg）。取RV （3.27 g）經(jīng)過Sephadex LH-20 （甲醇）洗脫，MCI （30%～100%，甲醇/水）和半制備HPLC [甲醇-水（30∶100，V/V]梯度洗脫，得到化合物9 （4.8 mg）、化合物10 （24.2 mg）。

1.2.2 單體成分最低抑菌濃度（MIC）的測(cè)定

1.2.2.1 菌懸液的制備 取適量白色念珠菌、糞腸球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分別接種于肉湯培養(yǎng)基，白色念珠菌于28 ℃培養(yǎng)48 h，糞腸球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌于37 ℃培養(yǎng)24 h后麥?zhǔn)瞎鼙葷岱ㄅ涑?06 CFU·mL-1的菌液，備用（戴五好等，2012）。

1.2.2.2 MIC的測(cè)定 取無菌96孔板，每孔加入100 μL含有0.5% TTC無菌培養(yǎng)基，第1至第7排為樣品溶液，每個(gè)樣品均設(shè)3個(gè)復(fù)孔做平行對(duì)照，取100 μL樣品溶液加入第1至第7排的第1孔，與培養(yǎng)基充分混合，從中取100 μL加入到第2孔中，混合均勻后再取100 μL到第3孔中，以此類推，直到第11孔，取出100 μL棄去。第8排為陽性對(duì)照，第9排為空白對(duì)照（不加藥），第12列作為陰性對(duì)照（只加培養(yǎng)基）（李奇英等，1998;周曉輝等，2018）。細(xì)菌在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h， 真菌在28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，取出肉眼觀察以微孔中是否出現(xiàn)TTC紅色來檢查有無細(xì)菌生長，以不出現(xiàn)TTC紅色的微孔濃度為最低抑菌濃度，所有操作均在無菌條件下操作。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色油狀（甲醇）。ESI-MS m/z： 407.1 [M-H]-。1H-NMR （600 MHz， CD3OD） δH （ppm）： 7.47 （1H， s， H-5）， 7.28 （1H， d， J = 8.0 Hz， H-6′）， 6.34 （1H， dd， J=8.0， 2.1 Hz， H-5′）， 6.33 （1H ， d， J = 2.1 Hz， H-3′）， 5.60 （1H， dd， J=13.3， 2.9 Hz， H-2）， 5.33 （1H， m， H-7″）， 5.18 （1H， m， H-2″）， 3.36 （2H， m， H-6″）， 3.27 （2H， m， H-1″）， 2.71 （1H， dd， J=16.9， 2.9 Hz， H-3a）， 2.93 （ 1H， dd，J=16.9， 13.3 Hz， H-3b）， 1.64 （6H， s， H-4″， 5″）， 1.72 （3H， s， H-10″）， 1.79 （3H， s， H-9″）。13 C-NMR （150 MHz， CD3OD） δC （ppm）： 195.2 （C-4）， 162.0 （C-4′）， 159.5 （C-2′）， 156.6 （C-9）， 148.0 （C-7）， 134.3 （C-8″）， 132.6 （C-3″）， 128.7 （C-6′）， 125.5 （C-5）， 123.9 （C-6）， 123.2 （C-7″）， 122.9 （C-2″）， 118.6 （C-1′）， 117.3 （C-8）， 114.9 （C-10）， 107.6 （C-5′）， 103.3 （C-3′）， 76.3 （C-2）， 44.2 （C-3）， 29.0 （C-6″）， 26.0 （C-5″， 9″）， 23.3 （C-1″）， 18.0 （C-10″）， 17.8 （C-4″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Kyogoku et al.， 1973）基本一致，故確定化合物1為2′，4′，7-trihydroxy-6，8-bis（3-methyl-2-butenyl）flavanone。

化合物2：黃色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z： 455.1 [M+Na]+。1H-NMR （400 MHz， CD3OD） δH （ppm）： 8.14 （1H， s， H-2）， 7.39 （2H， d， J = 8.5 Hz， H-2， 6′）， 6.85 （2H， d， J=8.5 Hz， H-3′， 5′）， 6.71 （1H， d， J=2.2 Hz， H-8）， 6.52 （1H， d， J=2.2 Hz， H-6）， 5.05 （1H， m， H-1″）， 3.38-3.93 （6H， other sugar protons）。13 C-NMR （150 MHz， CD3OD） δC （ppm）： 181.2 （C-4）， 163.4 （C-7）， 162.2 （C-5）， 157.9 （C-9）， 157.6 （C-4′）， 154.0 （C-2）， 130.0 （C-2′， 6′）， 123.7 （C-3）， 121.7 （C-1′）， 114.9 （C-3′， 5′）， 106.7 （C-10）， 100.3 （C-1″）， 99.7 （C-6）， 94.5 （C-8）， 77.0 （C-3″）， 76.5 （C-5″）， 73.3 （C-2″）， 69.8 （C-4″）， 61.0 （C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（張良等，2011）基本一致，故確定化合物2為染料木苷。

化合物3： 淡黃色粉末（甲醇）。1H-NMR （600 MHz， CD3OD） δH （ppm）：7.67 （1H， d， J=8.4 Hz， H-6′）， 7.09 （1H， s， H-3）， 7.02 （1H， s， H-4）， 6.95 （1H， s， H-7）， 6.43 （1H， d， J=2.2， H-3′）， 6.41 （1H， dd，J=2.2， 8.4 Hz， H-5′）， 5.96 （2H， s， -OCH2O-）。13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δC （ppm）： 158.1 （C-2′）， 155.5 （C-4′）， 153.2 （C-8）， 148.6 （C-2）， 145.4 （C-5）， 144.3 （C-6）， 126.6 （C-6′）， 123.4 （C-9）， 110.1 （C-1′）， 106.7 （C-3）， 103.2 （C-4）， 102.4 （C-7）， 101.0 （-OCH2O-）， 98.6 （C-5′）， 92.4 （C-3′）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（程玲等，2015）基本一致，故確定化合物3為2-（2′，4′-二羥基苯基）-5，6-二氧甲基苯并呋喃。

化合物4： 無色油狀（甲醇）。ESI-MS m/z： 311.0 [M+Na]+。1H-NMR （600 MHz， CD3OD） δH （ppm）： 8.01 （1H， d， J = 5.6 Hz， H-6）， 6.45 （1H， d， J=5.6 Hz， H-5）， 4.81 （1H， d， J=7.5 Hz， H-1′）， 3.84-3.24 （6H， other sugar protons），

2.47 （3H， s， H-7）。13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δC （ppm）： 175.8 （C-4）， 163.2 （C-2）， 155.8 （C-6）， 142.3 （C-3）， 116.0 （C-5）， 104.1 （C-1′）， 77.2 （C-3′）， 76.7 （C-5′）， 74.1 （C-2′）， 69.7 （C-4′）， 61.2 （C-6′）， 14.4 （C-7）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Woo et al.， 2017）基本一致，故確定化合物4為maltol-β-D-glucopyranoside。

化合物5：白色粉末（甲醇 ）。ESI-MS m/z： 355.1 [M+Na]+。1H-NMR （600 MHz， CD3OD） δH （ppm）： 6.13 （2H， s， H-3， 5）， 4.67 （1H， d， J=7.4 Hz， H-1′）， 3.79 （6H， s， -OCH3）。13 C-NMR （150 MHz， CD3OD） δC （ppm）： 154.6 （C-4）， 153.4 （C-2， 6）， 128.3 （C-1）， 104.9 （C-1′）， 93.2 （C-3， 5）， 76.9 （C-3′）， 76.4 （C-5′）， 74.3 （C-2′）， 69.9 （C-4′）， 61.2 （C-6′）， 55.4 （-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（楊晨悅等，2018）基本一致，故確定化合物5為leonuriside A。

化合物6：黃色油狀（甲醇）。ESI-MS m/z： 365.0 [M + Na]+。1H-NMR （400 MHz， CD3OD） δH （ppm）： 7.02 （1H， d， J=2.0 Hz， H-2）， 6.86 （1H， dd， J=8.1， 2.0 Hz， H-6）， 6.73 （1H， d， J = 8.1 Hz， H-5）， 6.58 （1H， d， J=15.9 Hz， H-7）， 6.20 （1H， m， H-8）， 4.50 （1H， m， H-9a）， 4.37 （1H， d， J = 7.8 Hz， H-1′）， 4.30 （1H， m， H-9b）， 3.86 （3H， s， -OCH3）。13 C-NMR （150 MHz， CD3OD） δC （ppm）： 147.7 （C-3）， 146.4 （C-4）， 133.0 （C-7）， 129.0 （C-1）， 122.4 （C-8）， 119.8 （C-6）， 114.8 （C-5）， 109.2 （C-2）， 101.8 （C-1′）， 76.8 （C-3′）， 76.6 （C-5′）， 73.8 （C-2′）， 70.4 （C-4′）， 69.7 （C-9）， 61.5 （C-6′）， 55.0 （-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（周媛媛等，2015）基本一致，故確定化合物6為松柏醇-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物7：黃色油狀（甲醇）。ESI-MS m/z： 415.1 [M+Na]+。1H-NMR （600 MHz， CD3OD） δH （ppm）： 7.59 （1H， d， J = 8.7 Hz， H-5）， 7.20 （1H， d， J = 2.3 Hz， H-2′）， 7.13 （1H， dd， J=8.3， 2.3 Hz， H-6′）， 6.78 （1H， d， J=8.3 Hz， H-5′）， 6.51 （1H， d， J=8.7 Hz， H-6）， 5.33 （2H， m， H-2， 7″）， 5.19 （1H， ddd， J=1.3， 6.0， 7.2 Hz， H-2″）， 2.99 （1H， dd， J=16.9， 12.7 Hz， H-3a）， 2.72 （1H， dd， J=16.9， 3.1 Hz， H-3b）， 1.74 （3H， s， H-9″）， 1.71 （3H， s， H-10″）， 1.63 （3H， s， H-4″）， 1.60 （3H， s， H-5″）。13 C-NMR （150 MHz， CD3OD） δC （ppm）： 193.0 （C-4）， 162.5 （C-7）， 161.7 （C-9）， 155.1 （C-4′）， 131.8 （C-3″）， 130.8 （C-8″）， 130.1 （C-1′）， 128.1 （C-2′）， 127.5 （C-3′）， 125.3 （C-5）， 124.6 （C-6′）， 122.4 （C-2″）， 122.0 （C-7″）， 115.7 （C-5′）， 114.3 （C-10）， 113.8 （C-8）， 109.4 （C-6）， 79.6 （C-2）， 43.5 （C-3）， 27.9 （C-6″）， 24.6 （C-5″， 10″）， 21.6 （C-1″）， 16.6 （C-4″）， 16.5 （C-9″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（李行諾等，2009）基本一致，故確定化合物7為光甘草酚。

化合物8：黃色粉末（甲醇）。ESI-MS m/z： 405.1 [M-H]-。1 H-NMR （600 MHz， CD3OD） δH （ppm）： 7.41 （1H， s， H-5）， 7.28 （1H， d， J=8.0 Hz， H-6′）， 6.38 （1H， d， J=9.9 Hz， H-6）， 6.34-6.35 （2H， m， H-3′， 5′）， 5.65 （1H， dd， J = 13.3， 2.9 Hz， H-2）， 5.70 （1H， d， J = 9.9 Hz， H-7）， 5.18 （1H， m， H-2″）， 2.75 （1H， dd， J=16.9， 2.9 Hz， H-3a）， 2.99 （1H， dd， J=16.9， 13.3 Hz， H-3b）， 1.67 （3H， s， H-4″）， 1.64 （3H， s， H-5″）， 1.46 （3H， s， H-6″）， 1.44 （3H， s， H-7″）。13 C-NMR （150 MHz， CD3OD） δC （ppm）： 191.9 （C-4）， 163.2 （C-4′）， 159.7 （C-2′）， 158.8 （C-9）， 156.8 （C-11）， 136.6 （C-3″）， 132.3 （C-7）， 130.6 （C-6'）， 128.7 （C-5）， 123.1 （C-2″）， 123.0 （C-1′）， 122.7 （C-6）， 118.4 （C-10）， 118.3 （C-13）， 117.0 （C-12）， 107.7 （C-5′）， 103.4 （C-3′）， 78.9 （C-8）， 76.5 （C-2）， 44.0 （C-3）， 28.8 （C-6″）， 28.6 （C-7″）， 26.0 （C-5″）， 22.8 （C-1″）， 18.1 （C-4″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Kyogoku et al.， 1973）基本一致，故確定化合物8為2-（2′，4′-dihydroxy-phenyl）-8，8-dimethyl-10-（3-methyl-2-butenyl）-8H-pyrano [2，3-d]chroman-4-one。

化合物9：無色固體（甲醇）。ESI-MS m/z： 287.3 [M+Na]+。1H-NMR （600 MHz， CD3OD） δH （ppm）： 4.92 （1H， m， H-11）， 4.33 （1H， dd， J=12.2， 5.0 Hz， H-17b）， 4.05 （1H， t， J=12.5 Hz， H-17a）， 3.34 （2H， m， H-2）， 3.08 （2H， m， H-10）。13 C-NMR （150 MHz， CD3OD） δC （ppm）： 171.5 （C-15）， 68.5 （C-10）， 68.0 （C-2）， 66.6 （C-6）， 53.6 （C-11）， 42.2 （C-7）， 41.9 （C-17）， 34.3 （C-5）， 32.2 （C-14）， 27.9 （C-12）， 25.4 （C-4）， 23.7 （C-8）， 18.3 （C-13）， 16.9 （C-3）， 16.8 （C-9）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（張?zhí)m珍等，1997）基本一致，故確定化合物9為氧化苦參堿。

化合物10：黃色油狀（甲醇）。ESI-MS m/z： 255.1 [M-H]-。1 H-NMR （400 MHz， CD3OD） δH （ppm）： 7.08 （2H， d， J = 8.1 Hz， H-2′， 6′）， 6.66 （2H， d，J=8.2 Hz， H-3′， 5′）， 4.52 （1H， s， H-3）， 3.14 （1H， d， J=13.8 Hz， H-7′b）， 2.99 （1H， d， J=13.8 Hz， H-7′a）。13C-NMR （100 MHz， CD3OD） δC （ppm）： 174.5 （C-1）， 173.4 （C-4）， 155.8 （C-4′）， 131.1 （C-2′， 6′）， 126.6 （C-1′）， 114.3 （C-3′， 5′）， 80.1 （C-2）， 75.0 （C-3）， 40.6 （C-7′）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Song et al.， 2019）基本一致，故確定化合物10為番石榴酸。

2.2 化合物抗菌活性結(jié)果

為了進(jìn)一步探究山豆根抗菌活性成分，對(duì)所分離得到的單體化合物1-10進(jìn)行抗菌活性評(píng)價(jià)，結(jié)果表明化合物1-3對(duì)四株細(xì)菌菌株（糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌）和一株真菌菌株（白色念珠菌）具有一定的抑制作用，MIC實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，化合物1-3的MIC值范圍為15.6～125.0 μg·mL-1（表1）。

3 討論與結(jié)論

山豆根作為苗族習(xí)用藥物，是上市咽喉抗感染用藥“開喉劍噴霧劑”的組方藥材之一，臨床應(yīng)用前景廣泛，具有清熱解毒、消腫利咽等功效，主要含有生物堿、黃酮類、三萜類及酚類等化學(xué)成分 （潘其明，2016;程錢等，2017;聶安政等，2018）。前期有研究已經(jīng)報(bào)道了山豆根大極性提取物的抑菌活性潛力（吳達(dá)榮等，2006），為了深入探究其抗菌活性成分，本研究從山豆根正丁醇部位中共分離得到10 個(gè)單體化合物，其中化合物4-6為首次從該植物中分離得到，此外黃酮類化合物1-3對(duì)多個(gè)菌株表現(xiàn)出中等活性的抑菌作用，MIC值為15.6～125.0 μg·mL-1，提示山豆根中大極性黃酮類化合物可能是其抗菌主要活性成分。

由致病菌誘發(fā)的感染性疾病嚴(yán)重危害人類健康，隨著抗生素的濫用，種類豐富、結(jié)構(gòu)多樣的天然產(chǎn)物抗菌素越發(fā)受到藥物學(xué)家的關(guān)注（柯春林等，2015），尋找天然特異性細(xì)菌抑制劑具有重要意義，已經(jīng)成為抗菌藥物開發(fā)的研究熱點(diǎn)。從上述抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn)，區(qū)別于化合物3具有針對(duì)細(xì)菌和真菌的廣譜抑菌活性，活性化合物1-2表現(xiàn)出對(duì)部分細(xì)菌的選擇性抑制作用，為特異性抗菌藥物的研發(fā)提供了新的分子模板和研究思路。

本研究豐富了山豆根的化學(xué)成分，初步探討了其抗菌活性化合物，為后續(xù)深入的作用機(jī)制研究奠定了化學(xué)基礎(chǔ)，也為進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)修飾以及傳統(tǒng)中藥的資源開發(fā)和利用提供借鑒。

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（責(zé)任編輯 周翠鳴）