• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    利巴韋林干預對肉雞腸道微生物群落結構的影響

    2021-09-08 05:54:07徐俊侯玉潔謝敏王夢芝鄔磊費丹周瑤敏胡麗芳
    南方農業(yè)學報 2021年5期
    關鍵詞:利巴韋林多樣性

    徐俊 侯玉潔 謝敏 王夢芝 鄔磊 費丹 周瑤敏 胡麗芳

    徐?。?986-),博士,主要從事動物營養(yǎng)與質量安全風險評估研究工作。先后主持國家自然科學基金項目、江西省重點研發(fā)計劃項目及江西省協同創(chuàng)新項目等國家級或省部級科研項目6項;作為主要成員參與國家自然科學基金項目、國家科技支撐計劃項目及農業(yè)農村部農產品質量安全風險評估等科研項目10余項。獲江西省科技進步獎一等獎1項,農業(yè)農村部農產品質量安全中心科普獎2項;制定地方標準6項;獲授權國家發(fā)明專利3項、實用新型專利5項;獲軟件著作權3項;參編著作5部;在《Journal of Integrative Agriculture》《Asian-Australasian Journal of Animal Sciences》《Frontiers in Microbiology》《動物營養(yǎng)學報》《南方農業(yè)學報》《分析試驗室》等科技期刊上發(fā)表學術論文20余篇。

    摘要:【目的】探討矮腳黃雞口服利巴韋林后其腸道微生物群落結構多樣性的變化情況,揭示抗病毒藥物對動物腸道健康的影響機制,為科學禁用抗生素及開發(fā)綠色生態(tài)飼料提供理論依據?!痉椒ā?0日齡矮腳黃雞按10 mg/kg的劑量連續(xù)口服利巴韋林溶液7 d(試驗組),以口服等量生理鹽水為對照組,停藥后收集4 h內的新鮮雞糞。通過糞便基因組提取試劑盒提取雞糞總DNA,根據細菌16S rDNA序列V3~V4可變區(qū),設計通用引物338F和806R進行PCR擴增,然后參照Illumina MiSeq平臺上機說明進行Illumina MiSeq高通量測序。【結果】從16個矮腳黃雞糞便樣品中共獲得614626條原始序列(Raw reads),經質量控制后獲得606862條優(yōu)質序列(Clean reads),按97%的序列相似度進行OTU聚類分析獲得968個OTUs,對照組和試驗組共享624個OTUs。矮腳黃雞腸道微生物群落豐富度指數(Chao1和ACE)表現為對照組顯著(P<0.05,下同)或極顯著(P<0.01,下同)高于試驗組;在物種多樣性方面,Simpson指數的組間差異不顯著(P>0.05),Shannon指數則表現為試驗組顯著高于對照組。對照組和試驗組的矮腳黃雞糞便樣品均以厚壁菌門、放線菌門、擬桿菌門和變形菌門為優(yōu)勢菌門,相對豐度均在5.00%以上;在屬分類水平上,相對豐度大于0.10%的屬共有108個,對照組和試驗組均以乳桿菌屬相對豐度最高,分別為34.07%和19.26%。矮腳黃雞口服利巴韋林后,腸道中的乳桿菌屬、腸球菌屬、Paeniglutamicibacter、Tessaracoccus、埃希氏桿菌屬、副球菌屬、Gottschalkia及黃桿菌屬呈顯著或極顯著下降趨勢,而擬桿菌屬、葡萄球菌屬、疊球菌屬、Jeotgalicoccus、Unclassified_f_rikenellaceae、Unclassifier_o_bacteroidales、Rikenellaceae_RC9_gut_group、明串珠菌屬及丹毒絲菌屬呈顯著或極顯著上升趨勢。UniFrac-PCoA分析發(fā)現,第一主成分(PC1)和第二主成分(PC2)的貢獻率分別為73.44%和6.99%,對照組和試驗組間的微生物群落結構差異明顯,彼此間可較好地區(qū)分開,但同處理組內的8個樣品能很好地聚在一起,菌群相似度很高?!窘Y論】口服利巴韋林會顯著影響矮腳黃雞腸道微生物區(qū)系,改變腸道微生物的穩(wěn)態(tài)結構,進而導致其腸道健康受到損傷。

    關鍵詞: 矮腳黃雞;利巴韋林;腸道微生物;豐富度;多樣性;Illumina MiSeq高通量測序

    中圖分類號: S831.92? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標志碼: A 文章編號:2095-1191(2021)05-1139-10

    Abstract:【Objective】The structural diversity of the intestinal microbiological community in dwarf yellow chicken after oral ribavirin was discussed, the mechanism of the effects of antiviral drugs on animal intestinal health was revealed, and provided theoretical basis for scientific prohibition on the addition of antibiotics and the development of green ecological feed. 【Method】Dwarf yellow chicken at 90 d were selected as experimental animal, and took ribavirin orally for 7 consecutive d according to the body weight dose of 10 mg/kg (treatment group), the same amount of normal saline was taken orally as control group. Manure samples were collected within 4 h after the drug stopped.The total chicken manure DNA was extracted from the fecal genome extraction kit, according to bacterial 16S rDNA sequence V3-V4 variable region, common primers 338F and 806R were designed for PCR amplification, then conducted Illumina MiSeq high-throughput sequencing with reference to the on-board Illumina MiSeq platform instructions. 【Result】In total, 614626 raw reads were obtained for the bacterial 16S rRNA genes analysis. After screening these gene sequences with strict criteria, 606862 clean reads were obtained. OTU cluster analysis based on 97% sequence similarity obtained 968 OTUs. Additional-ly, there were 624 OTUs shared between the groups. The intestinal microbiological community richness indexes(Chao1 and ACE) in the control group were significant(P<0.05, the same below) or extremely significant(P<0.01, the same below)? higher than in the treatment group. In species diversity, the Simpson index was not significant between groups(P>0.05),? Shannon index in control group was significantly higher compared to treatment group. At the phylum level, Firmicutes, Actinobacteria, Bacteroidetes and Proteobacteria were the dominant phyla in both groups, with average relative abundance above 5.00%. At the genus level, there were 108 genera accounted for more than 0.10% relative abundance, and Lactobacillus accounted for the highest relative abundance in the control group and the treatment group, which were 34.07% and 19.26% respectively. After oral administration of ribavirin, Lactobacillus, Enterococcus, Paeniglutamicibacter, Tessaracoccus, Escherichia, Paracoccus, Gottschalkia and Flavobacterium significantly or extremely decreased, while Bacteroides, Staphylococcus, Methylosarcina, Jeotgalicoccus、Unclassified_f_rikenellaceae、Unclassifier_o_bacteroidales、Rikenellaceae_RC9_gut_group, Leuconostoc and Erysipelothrix significantly or extremely increased. The UniFrac-PCoA weighted principal coordinate analysis found that the primary component(PC1) and secondary component (PC2) contributed 73.44% and 6.99%, respectively. The microbial community structure difference between the control group and the treatment group was obvious, which could be better separated from each other, but the 8 samples in the treatment group could be well gathered together, and the flora similarity was very high. 【Conclusion】Oral administration of ribavirin can significantly affect the intestinal microflora of dwarf yellow chicken, and change the steady-state structure of the intestinal microorganisms, which can cause the impaired of the intestinal health.

    Key words: dwarf yellow chicken; ribavirin; intestinal microflora; richness; diversity; Illumina MiSeq high throughput sequencing

    Foundation item:Key Research and Development Project of Jiangxi(20192ACB60004); Postdoctoral Research Fund of Jiangxi(2015KY43)

    0 引言

    【研究意義】動物消化道內的微生物不僅有助于營養(yǎng)攝取、免疫調節(jié)及消化道上皮細胞的發(fā)育,還是抵御病原體的天然屏障,對維持宿主健康至關重要(Zoetenal et al.,2004;曾波等,2017)。促生長類抗生素在促進動物生長(Emami et al.,2012)的同時會導致動物腸道微生物群落結構多樣性及其穩(wěn)態(tài)發(fā)生改變(Vangay et al.,2015;辛可啟等,2020),盡管抗生素的使用主要針對致病菌,但對整個腸道菌群也會產生重要影響(Jernberg et al.,2010;Looft et al.,2014)。因此,研究抗生素對動物胃腸道微生物群落結構的影響,對深入探究動物消化道微生物穩(wěn)態(tài)機理具有重要意義?!厩叭搜芯窟M展】已有研究證實,抗生素可通過亞治療劑量促進動物機體生長,究其原因主要是抗生素能控制胃腸道感染及調控腸道微生物群落結構(Dibner and Richards,2005;Torok et al.,2011),雖然其作用機制尚未明確,但可確認抗生素是通過重塑腸道微生物多樣性及其相對豐度而發(fā)揮作用,為動物機體的生長營造最佳微生態(tài)環(huán)境(郭鵬等,2017;王歡等,2020)。Dumonceaux等(2006)以維吉尼亞霉素為肉雞生長促進劑添加至飼料中,結果發(fā)現雛雞回腸近端及十二指腸中乳酸桿菌的種類有所增加,即在飼料中添加維吉尼亞霉素會改變肉雞近端胃腸道的菌群結構。但也有研究報道,在家禽養(yǎng)殖過程中使用抗生素會導致乳酸桿菌的種類減少,且雞腸道菌群結構的變化還會影響其免疫功能和健康狀況(謝全喜等,2012;Lee et al.,2012)。La-ongkhum等(2011)采用PCR-DGGE研究阿維菌素對肉仔雞空腸內微生物菌群的影響,發(fā)現阿維菌素可改變腸道中魏斯氏菌屬、糞鏈球菌和嗜酸乳桿菌的含量,降低腸道內微生物菌群多樣性。倪江(2013)研究發(fā)現,在嶺南黃肉雞的基礎日糧中分別添加林可霉素、桿菌肽鋅和硫酸粘桿菌素,各處理組肉雞腸道中大腸桿菌、乳酸桿菌及雙歧桿菌的數量有升有降,而肉雞日增重分別提高5.86%、5.31%和3.73%,故推測抗生素對腸道微生物的影響只是抗生素促生長機理的一部分。Elokil等(2020)研究表明,給京紅雞口服恩諾沙星和地克珠利后其腸道中的微生物組成發(fā)生顯著變化,且停藥后無法恢復到原腸道微生態(tài)結構。針對豬的研究發(fā)現,飼喂抗生素會促使其回腸中的厚壁菌門和放線菌門相對豐度降低,變形菌門相對豐度提高,回腸和糞便中的有益菌屬下降,而有害的條件性致病菌相對豐度增加(高侃等,2016)。Zhang等(2016)研究表明,給斷奶仔豬口服乳酸菌或金霉素后,其空腸、結腸和盲腸的微生物多樣性及組成均不相同,以金霉素組的厚壁菌門和普氏菌屬相對豐度更高。Li等(2020)針對長期使用抗生素的豬腸道微生物群落多樣性進行分析,結果發(fā)現厚壁菌門和擬桿菌門(F/B)比值隨著育肥時間的推移而顯著增加,且變形菌門和纖維桿菌門的相對豐度顯著低于無抗生素組。目前,除了研究在飼料中添加抗生素對動物腸道微生物群落結構的影響外,還有關于注射抗生素對其影響的相關研究(Janczyk et al.,2007;Fleury et al.,2015)。Ruczizka等(2020)在評估注射頭孢噻肟對哺乳仔豬和生長豬糞便微生物群落結構的影響時發(fā)現,產后12 h注射頭孢噻肟會顯著影響雌、雄性仔豬糞便微生物組成的連續(xù)變化,同時對宿主生產性能造成長期影響?!颈狙芯壳腥朦c】至今,有關抗生素對動物腸道微生物影響的研究主要集中在飼用抗生素方面(倪江和楊維仁,2012;劉穎等,2017;于佳民等,2018),而有關抗病毒藥物對動物腸道微生物群落結構影響的研究鮮見報道。在家禽的養(yǎng)殖過程中,養(yǎng)殖戶為降低病毒性疾病帶來的養(yǎng)殖風險,經常性使用違禁抗病毒藥物(目前尚未批準的獸用抗病毒藥物)預防或治療病毒性疾病,尤其是近幾年的風險評估發(fā)現違規(guī)使用利巴韋林現象仍較普遍,是影響家禽產品質量安全的主要因素之一。【擬解決的關鍵問題】通過Illumina MiSeq高通量測序技術探討矮腳黃雞口服利巴韋林后其腸道微生物群落結構多樣性的變化情況,進一步揭示抗病毒藥物對動物腸道健康的影響機制,為科學禁止添加抗生素及開發(fā)綠色生態(tài)飼料提供理論依據。

    1 材料與方法

    1. 1 試驗動物及其飼養(yǎng)管理

    90日齡矮腳黃雞購自江西省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所,共80羽,平均體重1500±50 g,隨機分為2組[對照組(A)和試驗組(B)],每組8個重復,每個重復5羽。每個重復的矮腳黃雞飼養(yǎng)在同一個雞籠內,雞籠底部配有活動托盤用于接收糞便。矮腳黃雞飼喂不含任何藥物的全價配合飼料(由江西省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所自制),飼料配方見表1。

    1. 2 試驗方法

    參照實際養(yǎng)殖過程中違禁使用利巴韋林的用藥劑量,每天上午8:00按10 mg/kg的劑量給試驗組矮腳黃雞連續(xù)口服利巴韋林溶液7 d,對照組矮腳黃雞口服等量生理鹽水,每天清理托盤倒掉糞便,最后一次給藥后,在托盤上鋪一張消毒薄膜,收集4 h內的新鮮雞糞,混勻裝入消毒好的EP管中,立即放入 -80 ℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆?。測樣時將雞糞樣品置于冰上解凍,按糞便基因組提取試劑盒說明提取雞糞總DNA(QIAGEN,51504),DNA樣品采用核酸蛋白分析儀(DU640,美國Backman公司)分別測定260和280 nm處的吸光值,并以1.0%瓊脂糖凝膠電泳(DYY-6C電泳儀,北京六一儀器廠)檢測DNA質量。

    根據細菌16S rDNA序列V3~V4可變區(qū),設計通用引物(338F:5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3'和806R:5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'),PCR擴增反應體系20.0 μL:5×PCR Buffer 4.0 μL,338F/806R引物(5 μmol/L)各0.4 μL,dNTP Mix(2.5 mmol/L)2.0 μL,DNA聚合酶0.4 μL,DNA模板10 ng,雙蒸水補足至20.0 μL。擴增程序:95 ℃預變性3 min;95 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 45 s,進行27個循環(huán);72 ℃延伸10 min,結束后4 ℃保存。PCR擴增產物以2.0%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測,使用Axygen DNA膠回收純化試劑盒(Axy Prep DNA Gel Extration kit,AP-GX-500)進行切膠回收純化,經Biotek酶標儀(FLX800,美國伯騰儀器有限公司)定量分析后,按標準的Illumina TruSeq DNA文庫制備流程構建Illumina測序文庫,然后參照Illumina MiSeq平臺上機說明進行Barcoded Illumina MiSeq測序。

    1. 3 數據處理

    原始序列(Raw reads)經質量控制后得到有效序列(Valid reads),再丟棄長度短于150 bp、含有模糊堿基或引物堿基含2個以上錯配信息、單個堿基重復數超過6個的序列,即獲得優(yōu)質序列(Clean reads)。參照序列相似度為97%的原則,將Clean reads歸為多個操作分類單元(Operational taxonomic unit,OTU),并進行聚類分析。根據OTU信息進行腸道微生物群落豐富度及多樣性分析,豐富度采用Chao1指數和ACE指數表示,多樣性采用Shannon指數和Simpson指數表示。Shannon指數越大,說明群落多樣性越高;Simpson指數越大,則說明群落多樣性越低。在屬分類水平上繪制聚類熱圖,同時對微生物群落進行UniFrac分析,利用獲得的距離矩陣進行PCoA分析和聚類分析,從遺傳距離上判斷不同樣本間的距離,比較不同樣品間的差異性。

    1. 4 統(tǒng)計分析

    采用Excel 2010進行試驗數據整理,并以SPSS 22.0的單因素方差分析(One-way ANOVA)進行顯著性檢驗。

    2 結果與分析

    2. 1 矮腳黃雞腸道微生物群落豐富度及其多樣性

    Illumina MiSeq高通量測序結果表明,從16個矮腳黃雞糞便樣品中共獲得614626條Raw reads,經質量控制后獲得606862條Clean reads,平均每個樣品37929條Clean reads,平均序列長度為442 bp。參照97%的序列相似度進行OTU聚類分析,結果發(fā)現16個矮腳黃雞糞便樣品共產生968個OTUs,其中,對照組樣品的OTU數目為802個,試驗組樣品的OTU數目為790個,二者共享624個OTUs(圖1),占總OTU數目的64.46%;對照組和試驗組樣品的特有OTU數目分別為178和166個,占總OTU數目的18.39%和17.15%。說明口服利巴韋林后矮腳黃雞腸道微生物存在一定比例的特有OTU。

    矮腳黃雞腸道微生物群落豐富度及其多樣性分析結果如表2所示。對照組和試驗組的Clean reads差異不顯著(P>0.05,下同);16個矮腳黃雞糞便樣品的Chao1指數范圍為605.00~737.92,ACE指數范圍為591.55~728.78,豐富度指數表現為對照組顯著(P<0.05,下同)或極顯著(P<0.01,下同)高于試驗組;在物種多樣性方面,Simpson指數的組間差異不顯著,Shannon指數則表現為試驗組顯著高于對照組,說明口服利巴韋林改變了矮腳黃雞腸道中的微生物多樣性。對照組和試驗組的文庫覆蓋率(Goods coverage)均在99.00%以上,說明每個樣品測序量合理,可很好地反映矮腳黃雞腸道微生物群落結構多樣性。

    2. 2 矮腳黃雞腸道微生物組成及其群落結構

    采用RDP和BLAST對16個矮腳黃雞糞便樣品的OTU進行鑒定分析,結果在門分類水平上共鑒定獲得15個菌門(圖2),包括厚壁菌門(Firmicutes)、放線菌門(Actinobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、變形菌門(Proteobacteria)、Saccharibacteria、軟壁菌門(Tenericutes)、互養(yǎng)菌門(Synergistetes)、異常球菌—棲熱菌門(Deinococcus-Thermus)、螺旋體門(Spirochaetes)、綠彎菌門(Chloroflexi)、藍細菌門(Cyanobacteria)、梭桿菌門(Fusobacteria)、脫鐵桿菌門(Deferribacteres)、疣微菌門(Verrucomicrobia)和迷蹤菌門(Elusimicrobia)。對照組和試驗組均以厚壁菌門、放線菌門、擬桿菌門和變形菌門為優(yōu)勢菌門,相對豐度均在5.00%以上,其中以厚壁菌門的相對豐度最高。

    在屬分類水平上,相對豐度大于0.10%的屬共有108個,表明矮腳黃雞腸道中的菌群微生物非常豐富。對照組和試驗組均以乳桿菌屬(Lactobacillus)的相對豐度最高,分別為34.07%和19.26%;其次是棒狀桿菌屬(Corynebacterium),對應的相對豐度分別為9.47%和8.04%(圖3)。通過T檢驗對相對豐度排名前20位的菌屬進行差異顯著性分析,結果如圖4所示。矮腳黃雞口服利巴韋林后,其腸道中的乳桿菌屬、腸球菌屬(Enterococcus)、Paeniglutamicibacter、Tessaracoccus、埃希氏桿菌屬(Escherichia-Shigella)、副球菌屬(Paracoccus)、Gottschalkia及黃桿菌屬(Flavobacterium)呈顯著或極顯著下降趨勢,而擬桿菌屬(Bacteroides)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、疊球菌屬(Sporosarcina)、Jeotgalicoccus、Unclassified_f_rikenellaceae、Unclassifier_o_bacteroidales、Rikenellaceae_RC9_gut_group、明串珠菌屬(Tri-chococcus)及丹毒絲菌屬(Erysipelothrix)呈顯著或極顯著上升趨勢。

    2. 3 用藥前后矮腳黃雞腸道微生物群落結構的相似性

    在屬分類水平上對相對豐度排名前50位的菌屬進行聚類分析并繪制熱圖。由圖5可知,16個矮腳黃雞糞便樣品分成兩簇,其中對照組樣品聚成一簇,試驗組樣品聚成一簇,說明同處理組各樣品的微生物群落結構相似,但不同處理組間的微生物群落結構存在明顯差異,試驗重復性良好。

    利用UniFrac-PCoA對用藥前后矮腳黃雞糞便微生物群落結構差異進行分析,并通過系統(tǒng)進化距離衡量樣品間的相對距離,用于表征微生物群落結構的差異性,PCoA分析可將這種差異顯示在二維或三維空間,因此,PCoA分析圖中距離越近表示2個樣品的菌群結構越相似。由圖6可知,基于UniFrac的PCoA分析結果顯示,第一主成分(PC1)和第二主成分(PC2)的貢獻率分別為73.44%和6.99%,對照組和試驗組間的微生物群落結構差異明顯,彼此間可較好地分隔開,而同處理組內的8個樣品能很好地聚在一起,菌群相似度很高。

    3 討論

    在家禽養(yǎng)殖生產中,抗生素作為預防和治療性藥物用于防止疾病發(fā)展和傳播的同時,也廣泛用于提高其生長性能。給肉雞飼喂鹽酸林可霉素、桿菌肽鋅或硫酸粘桿菌素均可顯著提高其日增重(倪江,2013);但抗生素治療已被證實會引起腸道微生物群落結構改變甚至紊亂,而造成腸道微生物平衡失調,并對宿主的生理活動及代謝性能產生有害影響,最終可能導致腸道疾病的發(fā)生(Allen and Stanton,2014)。

    前人研究證實,雞腸道內的微生物群落以厚壁菌門、擬桿菌門、放線菌門和變形菌門為主(Sergeant et al.,2014)。在本研究中,不論是對照組矮腳黃雞糞便樣品還是試驗組矮腳黃雞糞便樣品,均以厚壁菌門、擬桿菌門、放線菌門和變形菌門為主要優(yōu)勢菌門,且這4種菌門的相對豐度合計在99.00%以上。其中,厚壁菌門在對照組和試驗組的相對豐度均超過50.00%,但藥物干預后F/B比值由對照組的6.83下降至3.11。動物和人類的肥胖癥與其腸道中的厚壁菌門和擬桿菌門密切相關。Ley等(2005)、Turnbaugh等(2006)通過對比肥胖小鼠和瘦弱小鼠盲腸內容物的菌群結構,發(fā)現肥胖小鼠的擬桿菌門相對豐度較低,而厚壁菌門相對豐度較高,F/B比值在肥胖小鼠中偏高,即腸道內F/B比值較高時可提高體內脂肪的貯存。B?ckhed等(2004)針對無菌小鼠的研究也發(fā)現,擬桿菌門有促進脂肪沉積的作用,且推測與其能分解植物多糖密切相關。郭秀蘭(2008)也研究證實,豬的脂肪沉積與腸道擬桿菌門豐度及F/B比值相關,認為調控腸道微生物是控制豬脂肪沉積的有效途徑。本研究結果表明,在藥物干預后矮腳黃雞腸道內的F/B比值約降低2倍,故推測添加利巴韋林不利于矮腳黃雞體內脂肪的沉積,是由于其腸道微生態(tài)結構平衡被打破所造成。肉雞體內的脂肪沉積又分為肌內脂肪和腹脂,若能提高肌內脂肪并降低腹脂對動物而言非常有利,因此后續(xù)將進一步探究利巴韋林藥物干預對肉雞肌內脂肪和腹脂的影響機制。

    不同抗生素對動物腸道微生物群落結構造成的影響也存在差異(倪江,2013;李會智,2016;向明等,2019)。Antonopoulos等(2009)研究發(fā)現,小鼠使用阿莫西林和甲硝唑聯合治療后其盲腸區(qū)微生物菌群的豐度和結構發(fā)生顯著變化,治療結束后菌群結構可迅速恢復,但以頭孢哌酮治療小鼠會引起腸道微生物菌群多樣性的長期匱乏。李會智(2016)的研究也表明,在仔豬日糧中添加金霉素、喹乙醇+恩拉霉素、喹乙醇+維吉尼亞霉素均會降低豬糞便微生物群落多樣性。本研究結果表明,口服利巴韋林也顯著改變矮腳黃雞腸道的微生物多樣性,且給藥組的腸道微生物多樣性顯著高于對照組,與劉穎等(2017)研究發(fā)現在仔豬日糧中添加桿菌肽鋅與黏桿菌素后其腸道微生物物種多樣性較基礎飼糧組更豐富的結論一致??梢姡煌股貙游锬c道微生物群落結構及其多樣性的影響存在明顯差異,究其原因可能與抗生素對不同動物的作用機制差異有關。

    在實際生產中,亞治療劑量的抗生素能有效促進家禽生長(Emami et al.,2012),可能是提高腸道中乳酸菌數量的緣故(Dumonceaux et al.,2006),但也有研究發(fā)現使用抗生素后機體的乳酸菌數量呈降低趨勢(Lee et al.,2012)。雞腸道菌群結構的變化會影響其免疫功能和健康狀況,而雞腸道菌群結構的變化受多種因素影響,包括養(yǎng)殖條件、飲食組成及抗生素等(Lee et al.,2012)。倪江和楊維仁(2012)研究發(fā)現,在黃雞日糧飼料中添加不同抗生素(鹽酸林可霉素和桿菌肽鋅)不會顯著改變十二指腸、空腸和回腸中的微生物數量,但盲腸中的大腸桿菌和雙歧桿菌數量顯著減少。本研究中,對照組和試驗組的矮腳黃雞腸道微生物群落結構均以乳桿菌屬含量最高,其相對豐度分別為34.07%和19.26%,且口服利巴韋林后顯著降低了乳桿菌屬相對豐度。乳桿菌屬是促進腸道健康的重要益生菌,對促進免疫細胞、組織和器官生長發(fā)育及增強小腸和其他組織對病原菌的抵抗力具有重要意義,且乳酸菌代謝可通過降低腸道pH來抑制致病菌生長。矮腳黃雞口服利巴韋林7 d后其腸道乳桿菌屬含量顯著降低,降幅接近50.0%,說明利巴韋林會顯著影響肉雞腸道健康及微生物群落結構的穩(wěn)態(tài)性。

    此外,使用利巴韋林藥物干預后,矮腳黃雞糞便樣品中的腸球菌屬相對豐度由對照組的7.76%顯著下降至2.47%。腸球菌能產生酪胺,其與酪氨酸的代謝密切相關,可增強細菌與腸道的黏附性(Ladero et al.,2013)。因此,在選用抗生素治療某一特定細菌感染引起的相關疾病時,會改變整個腸道的微生態(tài)環(huán)境及該生態(tài)系統(tǒng)與宿主間的相互作用。郭鵬等(2017)研究發(fā)現,在β-內酰胺藥物治療過程中,腸球菌屬可能在結腸中生存并合成酪胺,以此提高結腸黏膜的黏附性。盡管利巴韋林屬于抗病毒藥物,不會直接作用于腸道細菌,但矮腳黃雞在口服利巴韋林后仍會顯著改變其腸道菌群結構,故推測利巴韋林會導致細菌與腸道的黏附性下降,其具體原理有待進一步探究。

    4 結論

    口服利巴韋林會顯著影響矮腳黃雞腸道微生物區(qū)系,改變腸道微生物的穩(wěn)態(tài)結構,進而導致其腸道健康受到損傷。

    參考文獻:

    高侃,皮宇,彭宇,慕春龍,朱偉云. 2016. 抗生素飼喂對生長豬回腸,糞樣微生物及其代謝產物的動態(tài)影響[C]//中國畜牧獸醫(yī)學會. 中國畜牧獸醫(yī)學會動物營養(yǎng)學分會第十二次動物營養(yǎng)學術研討會論文集. [Gao K,Pi Y,Peng Y,Mu C L,Zhu W Y. 2016. Dynamic effects of antibio-tic feeding on ileum,fecal-like microorganisms and their metabolites in growing pigs[C]//Chinese Association of Animal Science and Veterinary Medicine. Proceeding of the 12th National Symposium on Animal Nutrition,Animal Nutrition Branch,Chinese Association of Animal Science and Veterinary Medicine.]

    郭鵬,孫笑非,孫冬巖,王文娟. 2017. 抗生素的使用對腸道微生物菌群的影響[J]. 飼料研究,(15):12-13. doi:10. 13557/j.cnki.issn1002-2813.2017.15.004. [Guo P,Sun X F,Sun D Y,Wang W J. 2017. Effects of antibiotic use on intestinal microflora[J]. Feed Research,(15):12-13.]

    郭秀蘭. 2008. 豬腸道硬壁菌門和擬桿菌門數量的檢測及其相對豐度與脂肪沉積的相關性研究[D]. 雅安:四川農業(yè)大學. [Guo X L. 2008. Detecation of firmicutes and bacteroidetes in the pig gut and the correlation between their relative abundance and fat deposit[D]. Ya?an:Sichuan Agricultural University.]

    李會智. 2016. 抗生素對斷奶仔豬的生長性能和糞便微生物的影響[D]. 南京:南京農業(yè)大學. [Li H Z. 2016. Effects of antibiotic additives on the production performance and fecal microbes of weaned pigs[D]. Nanjing:Nanjing Agri-cultural University.]

    劉穎,王海斌,周剛,霍永久,董麗,王海飛,包文斌,喻禮懷. 2017. 抗生素對仔豬腸道微生物的影響[J]. 動物營養(yǎng)學報,29(8):2912-2922. doi:10.3969/j.issn.1006-267x.2017. 08.036. [Liu Y,Wang H B,Zhou G,Huo Y J,Dong L,Wang H F,Bao W B,Yu L H. 2017. Effects of antibiotics on intestinal microorganisms of piglets[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition,29(8):2912-2922.]

    倪江,楊維仁. 2012. 不同抗生素對嶺南黃肉雞生產性能、腸道菌群結構以及相關免疫指標的影響[C]//中國畜牧獸醫(yī)學會. 中國畜牧獸醫(yī)學會動物營養(yǎng)學分會第十一次全國動物營養(yǎng)學術研討會. [Ni J,Yang W R. 2012. Effects of different antibiotics on production performance,intestinal flora structure and related immune indexes of Lingnan yellow broiler chickens[C]//Chinese Association of Animal Science and Veterinary Medicine. Proceeding of the 11th National Symposium on Animal Nutrition,Animal Nutrition Branch,Chinese Association of Animal Science and Veterinary Medicine.]

    倪江. 2013. 不同抗生素對肉雞腸道免疫以及盲腸代謝影響的研究[D]. 泰安:山東農業(yè)大學. [Ni J. 2013. Effects of different antibiotics on intestinal immunity and cecal metabolism in broilers[D]. Taian:Shandong Agricultural University.]

    王歡,李平華,牛清,杜陶然,蒲廣,范麗娟,牛培培,吳承武,周五朵,黃瑞華. 2020. 日糧纖維水平對不同豬種腸道物理屏障和微生物的影響[J]. 江蘇農業(yè)學報,36(3):639-647. doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2020.03.016. [Wang H,Li P H,Niu Q,Du T R,Pu G,Fan L J,Niu P P,Wu C W,Zhou W D,Huang R H. 2020. Effects of dietary fiber levels on intestinal physical barrier and microbiota in di-fferent pig breeds[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Scien-ces,36(3):639-647.]

    向明,李媛媛,郭乾鵬,任亞雪,梁世忠,黃怡. 2019. 屎腸球菌對哺乳期仔豬結腸微生物群落優(yōu)勢門屬的影響[J]. 南方農業(yè)學報,50(3):477-484. doi:10.3969/j.issn.2095-1191.2019.03.06. [Xiang M,Li Y Y,Guo Q P,Ren Y X,Liang S Z,Huang Y. 2019. Effects of Enterococcus fae-cium on dominant phyla and genera of colonic microbial communities in suckling piglets[J]. Journal of Southern Agriculture,50(3):477-484.]

    謝全喜,崔詩法,徐海燕,曹銀生,林顯華,辛國芹,谷巍. 2012. 復合微生態(tài)制劑與飼用抗生素對肉雞生長性能、免疫性能和抗氧化指標的影響[J]. 動物營養(yǎng)學報,24(7):1339-1343. doi:10.3969/j.issn.1006-267x.2012.07. 019. [Xie Q X,Cui S F,Xu H Y,Cao Y S,Lin X H,Xin G Q,Gu W. 2012. Effects of compound probiotics and antibiotics on growth performance,immune function and antioxidant indices of broilers[J]. Chinese Journal of Ani-mal Nutrition,24(7):1339-1343.]

    辛可啟,聶澤健,萬敏艷,年芳,唐德富. 2020. 有機硒對肉仔雞生長性能和腸道微生物區(qū)系的影響[J]. 甘肅農業(yè)大學學報,55(5):31-38. doi:10.13432/j.cnki.jgsau.2020. 05.004. [Xin K Q,Nie Z J,Wan M Y,Nian F,Tang D F. 2020. Effects of organic selenium on growth performance and intestinal microflora of broilers[J]. Journal of Gansu Agricultural University,55(5):31-38.]

    于佳民,陳振,齊秀曄,謝全喜,鄭軍紅,劉學江,谷巍,單寶龍. 2018. 復合微生態(tài)制劑、飼用抗生素對肉雞生長性能、腸道菌群數量和免疫性能的影響[J]. 中國畜牧獸醫(yī),45(8):2219-2226. doi:10.16431/j.cnki.1671-7236. 2018.08.022. [Yu J M,Chen Z,Qi X Y,Xie Q X,Zheng J H,Liu X J,Gu W,Shan B L. 2018. Effects of compound probiotics and antibiotics on growth performance,intestinal flora and immune function of broilers[J]. China Animal Husbandry and Veterinary Medicine,45(8):2219-2226.]

    曾波,張智,李再新. 2017. 家兔腸道微生物ERIC-PCR指紋圖譜構建及分析[J]. 南方農業(yè)學報,48(1):139-143. [Zeng B,Zhang Z,Li Z X. 2017. Construction and analysis of ERIC-PCR fingerprinting of rabbit intestinal microbes[J]. Journal of Southern Agriculture,48(1):139-143.]

    Allen H K,Stanton T B. 2014. Altered egos:Antibiotic effects on food animal microbiomes[J]. Annual Review of Microbiology,68:297-315. doi:10.1146/annurev-micro-091213-113052.

    Antonopoulos D A,Huse S M,Morrison H G,Schmidt T M,Sogin M L,Young V B. 2009. Reproducible community dynamics of the gastrointestinal microbiota following antibiotic perturbation[J]. Infection and Immunity,77(6):2367-2375. doi:10.1128/IAI.01520-08.

    B?ckhed F,Ding H,Wang T,Hooper L V,Koh G Y,Nagy A,Semenkovich C F,Gordon J I. 2004. The gut microbiota as an environmental factor that regulates fat storage[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,101(44):15718-15723. doi:10. 1073/pnas.0407076101.

    Dibner J J,Richards J D. 2005. Antibiotic growth promoters in agriculture:History and mode of action[J]. Poultry Science,84(4):634-643. doi:10.1093/ps/84.4.634.

    Dumonceaux T J,Hill J E,Hemmingsen S M,van Kessel A G. 2006. Characterization of intestinal microbiota and response to dietary virginiamycin supplementation in the broiler chicken[J]. Applied and Environmental Microbio-logy,72(4):2815-2823. doi:10.1128/AEM.72.4.2815-2823.2006.

    Elokil A A,Abouelezz K F M,Ahmad H I,Pan Y H,Li S J. 2020. Investigation of the impacts of antibiotic exposure on the diversity of the gut microbiota in chicks[J]. Animals,10(5):896. doi:10.3390/ani10050896.

    Emami N K,Samie A H,Rahmani H R,Ruizferia C A. 2012. The effect of peppermint essential oil and fructooligosaccharides,as alternatives to virginiamycin,on growth performance,digestibility,gut morphology and immune response of male broilers[J]. Animal Feed Science and Technology,175(1-2):57-64. doi:10.1016/j.anifeedsci.2012.04. 001.

    Fleury M A,Mourand G,Jouy E,Touzain F,Le Devendec L,de Boisseson C,Eono F,Cariolet R,Guérin A,Le Goff O,Blanquet-Diot S,Alric M,Kempf I. 2015. Impact of ceftiofur injection on gut microbiota and Escherichia coli resistance in pigs[J]. Antimicrobial Agents and Chemotherapy,59(9):5171-5180. doi:10.1128/AAC.00177-15.

    Janczyk P,Pieper R,Souffrant W B,Bimczok D,Rothk?tter H J,Smidt H. 2007. Parenteral long-acting amoxicillin reduces intestinal bacterial community diversity in piglets even 5 weeks after the administration[J]. The ISME Journal,1(2):180-183. doi:10.1038/ismej.2007.29.

    Jernberg C,L?fmark S,Edlund C,Jansson J K. 2010. Long-term impacts of antibiotic exposure on the human intestinal microbiota[J]. Microbiology,156(11):3216-3223. doi:10.1099/mic.0.040618-0.

    Ladero V,Linares D M,Rio B D,Fernandez M,Martin M C,Alvarez M A. 2013. Draft genome sequence of the tyramine producer Enterococcus durans strain IPLA 655[J]. Genome Announcements,1(3):e00265-13. doi:10.1128/genomeA.00265-13.

    La-ongkhum O,Pungsungvom N,Amornthewaphat N,Nitisinprasert S. 2011. Effect of the antibiotic avilamycin on the structure of the microbial community in the jejunal intestinal tract of broiler chickens[J]. Poultry Science,90(7):1532-1538. doi:10.3382/ps.2010-01288.

    Lee K W,Hong Y H,Lee S H,Jang S I,Park M S,Bautista D A,Ritter G D,Jeong W,Jeoung H Y,An D J,Lillehoj E P,Lillehoj H S. 2012. Effects of anticoccidial and antibiotic growth promoter programs on broiler performance and immune status[J]. Research in Veterinary Science,93(2):721-728. doi:10.1016/j.rvsc.2012.01.001.

    Ley R E,B?ckhed F,Turnbaugh P J,Lozupone C A,Knight R D,Gordon J I. 2005. Obesity alters gut microbial eco-logy[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,102(31):11070-11075. doi:10.1073/pnas.0504978102.

    Li Y,Zhu Y H,Wei H,Chen Y S,Shang H T. 2020. Study on the diversity and function of gut microbiota in pigs fo-llowing long-term antibiotic and antibiotic-free breeding[J]. Current Microbiology,77(12):4114-4128. doi:10. 1007/s00284-020-02240-8.

    Looft T,Allen H K,Cantarel B L,Levine U Y,Bayles D O,Alt D P,Henrissat B,Stanton T B. 2014. Bacteria,phages and pigs:The effects of in-feed antibiotics on the microbiome at different gut locations[J]. The ISME Journal,8(8):1566-1576. doi:10.1038/ismej.2014.12.

    Ruczizka U,Metzler-Zebeli B,Unterweger C,Mann E,Sch-warz L,Knecht C,Hennig-Pauka I. 2020. Early parenteral administration of ceftiofur has gender-specific short- and long-term effects on the fecal microbiota and growth in pigs from the suckling to growing phase[J]. Animals,10(1):17. doi:10.3390/ani10010017.

    Sergeant M J,Constantinidou C,Cogan T A,Bedford M R,Penn C W,Pallen M J. 2014. Extensive microbial and functional diversity within the chicken cecal microbiome[J]. PLoS One,9(3):e91941. doi:10.1371/journal.pone. 0091941.

    Torok V A,Allison G E,Percy N J,Ophel-Keller K,Hughes R J. 2011. Influence of antimicrobial feed additives on broiler commensal posthatch gut microbiota development and performance[J]. Applied and Environmetnal Microbio-logy,77(10):3380-3390. doi:10.1128/AEM.02300-10.

    Turnbaugh P J,Ley R E,Mahowald M A,Magrini V,Mardis E R,Gordon J I. 2006. An obesity-associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest[J]. Nature,444(7122):1027-1031. doi:10.1038/nature05414.

    Vangay P,Ward T,Gerber J S,Knights D. 2015. Antibiotics,pediatric dysbiosis,and disease[J]. Cell Host & Microbe,17(5):553-564. doi:10.1016/j.chom.2015.04.006.

    Zhang D Y,Ji H F,Liu H,Wagn S X,Wang J,Wang Y M. 2016. Changes in the diversity and composition of gut microbiota of weaned piglets after oral administration of Lactobacillus or an antibiotic[J]. Applied Microbiology and Biotechnology,100(23):10081-10093. doi:10.1007/s00253-016-7845-5.

    Zoetenal E G,Cheng B,Koike S,Mackie R I. 2004. Molecular microbial ecology of the gastrointestinal tract:From phylogeny to function[J]. Current Issues in Intestinal Microbiology,5(2):31-48.

    (責任編輯 蘭宗寶)

    猜你喜歡
    利巴韋林多樣性
    疏風解毒膠囊聯合利巴韋林治療手足口病的臨床效果觀察
    疏風解毒膠囊聯合利巴韋林治療手足口病的臨床效果觀察
    熱毒寧聯合利巴韋林治療小兒手足口病的臨床療效
    由古典戲曲看“代言體”在中國的前世今生
    戲劇之家(2016年22期)2016-11-30 15:13:39
    淺談新時期群文輔導工作的特征
    新時期群文輔導工作的特征
    痰熱清聯合利巴韋林治療小兒支氣管肺炎療效分析
    今日健康(2016年12期)2016-11-17 11:31:49
    海洋微生物次生代謝的生物合成機制
    科技資訊(2016年19期)2016-11-15 10:39:12
    舞蹈表演的表現形式多樣性研究
    人間(2016年27期)2016-11-11 16:27:23
    水磨地區(qū)蕨類植物多樣性調查分析
    午夜老司机福利片| 波多野结衣巨乳人妻| 看黄色毛片网站| 亚洲成人免费电影在线观看| 草草在线视频免费看| 91成年电影在线观看| 国产成人影院久久av| 国产v大片淫在线免费观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲第一青青草原| 禁无遮挡网站| 中文字幕久久专区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 在线观看一区二区三区| 国产真人三级小视频在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲第一电影网av| 超碰成人久久| 久久久久亚洲av毛片大全| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 老鸭窝网址在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 精品国内亚洲2022精品成人| 麻豆成人av在线观看| 亚洲美女黄片视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久九九热精品免费| 色尼玛亚洲综合影院| 99国产精品一区二区三区| www日本在线高清视频| 黄色a级毛片大全视频| 无人区码免费观看不卡| 操出白浆在线播放| 99在线视频只有这里精品首页| 十八禁人妻一区二区| 国产精华一区二区三区| 国产国语露脸激情在线看| 日韩欧美在线二视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 老司机靠b影院| 一二三四社区在线视频社区8| 午夜精品在线福利| 国产精品野战在线观看| 久久人人精品亚洲av| 听说在线观看完整版免费高清| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲午夜理论影院| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 91av网站免费观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 欧美性长视频在线观看| 两个人免费观看高清视频| а√天堂www在线а√下载| 1024视频免费在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 精华霜和精华液先用哪个| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩av在线大香蕉| 中国美女看黄片| 日本免费a在线| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 精品一区二区三区四区五区乱码| 精品欧美一区二区三区在线| 男女视频在线观看网站免费 | 午夜福利在线观看吧| 国产真实乱freesex| 精品午夜福利视频在线观看一区| 天堂影院成人在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 黑人操中国人逼视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 精品国产乱子伦一区二区三区| 一区二区三区高清视频在线| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产真实乱freesex| 午夜激情av网站| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产黄片美女视频| 一区二区三区激情视频| 国产男靠女视频免费网站| 午夜福利一区二区在线看| 日韩视频一区二区在线观看| 人人妻人人澡人人看| 久久久久久久久中文| 波多野结衣高清无吗| 亚洲九九香蕉| 国产高清videossex| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲av美国av| 后天国语完整版免费观看| 国产精品久久视频播放| 午夜激情av网站| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲全国av大片| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 午夜免费观看网址| 91国产中文字幕| 脱女人内裤的视频| 午夜影院日韩av| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲精品国产一区二区精华液| 一级黄色大片毛片| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 深夜精品福利| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲专区国产一区二区| 90打野战视频偷拍视频| 老司机福利观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 禁无遮挡网站| 成人永久免费在线观看视频| 在线永久观看黄色视频| 午夜激情福利司机影院| 精品福利观看| 美女高潮到喷水免费观看| av片东京热男人的天堂| 白带黄色成豆腐渣| 国产一区二区在线av高清观看| 99热6这里只有精品| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 宅男免费午夜| 国产亚洲欧美98| www日本在线高清视频| 国产欧美日韩一区二区三| 制服诱惑二区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精品久久久久久精品电影 | 一二三四在线观看免费中文在| 日韩欧美三级三区| x7x7x7水蜜桃| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 午夜福利视频1000在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 啦啦啦韩国在线观看视频| 最近最新免费中文字幕在线| 久久中文字幕一级| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 精品一区二区三区av网在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 无限看片的www在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 国产三级在线视频| 88av欧美| 一级片免费观看大全| 国产亚洲欧美98| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 成人精品一区二区免费| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 99热6这里只有精品| 亚洲国产精品合色在线| 天堂√8在线中文| xxxwww97欧美| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 女性生殖器流出的白浆| 久久久久精品国产欧美久久久| 老汉色∧v一级毛片| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美一级a爱片免费观看看 | 免费看十八禁软件| 又黄又粗又硬又大视频| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 一进一出抽搐gif免费好疼| 香蕉丝袜av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲精品国产区一区二| 性色av乱码一区二区三区2| 久久人妻av系列| 日韩精品青青久久久久久| 色播亚洲综合网| 一级毛片女人18水好多| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产真实乱freesex| 色婷婷久久久亚洲欧美| av有码第一页| 一本精品99久久精品77| 啦啦啦免费观看视频1| 成年人黄色毛片网站| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产一区二区在线av高清观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 18禁观看日本| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 欧美丝袜亚洲另类 | 色老头精品视频在线观看| 深夜精品福利| 午夜成年电影在线免费观看| 神马国产精品三级电影在线观看 | 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美激情久久久久久爽电影| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 最近在线观看免费完整版| 精品无人区乱码1区二区| 黄片播放在线免费| 麻豆成人av在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 日韩三级视频一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 免费看日本二区| 女性被躁到高潮视频| 黄片小视频在线播放| av片东京热男人的天堂| 国产精品综合久久久久久久免费| 日韩高清综合在线| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品久久久久久成人av| 精品久久久久久,| 桃红色精品国产亚洲av| 岛国在线观看网站| 日韩视频一区二区在线观看| 怎么达到女性高潮| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 很黄的视频免费| 久久国产精品影院| 搡老妇女老女人老熟妇| 91在线观看av| av有码第一页| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久久国产成人免费| 女性被躁到高潮视频| 久久久久久久午夜电影| 国产成人av激情在线播放| 午夜福利18| tocl精华| 亚洲熟女毛片儿| 男女之事视频高清在线观看| 久久久久久久久中文| 国产精品,欧美在线| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲电影在线观看av| 国产高清有码在线观看视频 | 中文字幕久久专区| 精品乱码久久久久久99久播| 中文字幕久久专区| 久久狼人影院| 久久草成人影院| 日韩免费av在线播放| 视频在线观看一区二区三区| 欧美激情久久久久久爽电影| 哪里可以看免费的av片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美又色又爽又黄视频| 91国产中文字幕| 激情在线观看视频在线高清| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 色播在线永久视频| 久久久久久国产a免费观看| 正在播放国产对白刺激| 在线观看一区二区三区| 欧美一级毛片孕妇| 国产三级在线视频| 免费在线观看亚洲国产| 成人国产一区最新在线观看| 最近在线观看免费完整版| 国产精品免费视频内射| 久久精品国产亚洲av高清一级| 99国产精品99久久久久| 国产午夜精品久久久久久| 色尼玛亚洲综合影院| 国产在线观看jvid| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 69av精品久久久久久| 欧美日本视频| 免费高清在线观看日韩| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品一区二区三区四区久久 | 91成人精品电影| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | avwww免费| 桃色一区二区三区在线观看| 日韩精品青青久久久久久| 精品欧美国产一区二区三| 一级黄色大片毛片| 搡老妇女老女人老熟妇| 一本大道久久a久久精品| 成人免费观看视频高清| 99国产精品99久久久久| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 日本一本二区三区精品| 国产免费av片在线观看野外av| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 美女 人体艺术 gogo| 色哟哟哟哟哟哟| av视频在线观看入口| 淫妇啪啪啪对白视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产精品一区二区免费欧美| 午夜激情av网站| 久热这里只有精品99| 丝袜美腿诱惑在线| e午夜精品久久久久久久| 婷婷亚洲欧美| 亚洲激情在线av| 日韩有码中文字幕| 日韩国内少妇激情av| 在线永久观看黄色视频| 久久香蕉激情| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 黄色女人牲交| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品亚洲美女久久久| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 中文资源天堂在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久9热在线精品视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产成人av激情在线播放| 1024香蕉在线观看| xxx96com| 国产一区在线观看成人免费| 青草久久国产| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美黑人巨大hd| 国产成人av激情在线播放| 亚洲美女黄片视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 看片在线看免费视频| 男女下面进入的视频免费午夜 | 丁香六月欧美| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 后天国语完整版免费观看| 成人永久免费在线观看视频| 黄片小视频在线播放| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美一区二区精品小视频在线| 最近在线观看免费完整版| 999久久久精品免费观看国产| 禁无遮挡网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 成人手机av| 欧美三级亚洲精品| 好男人在线观看高清免费视频 | 性欧美人与动物交配| 亚洲真实伦在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| www.自偷自拍.com| 十分钟在线观看高清视频www| 国产亚洲精品第一综合不卡| 婷婷丁香在线五月| av欧美777| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲片人在线观看| 中文在线观看免费www的网站 | 制服诱惑二区| 亚洲专区中文字幕在线| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品av久久久久免费| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | av片东京热男人的天堂| 美女免费视频网站| 欧美国产日韩亚洲一区| 免费在线观看完整版高清| 欧美久久黑人一区二区| www.999成人在线观看| 免费观看精品视频网站| 美女高潮到喷水免费观看| 久久久久久久久中文| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产激情偷乱视频一区二区| av在线天堂中文字幕| 午夜日韩欧美国产| 丝袜美腿诱惑在线| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 在线观看免费视频日本深夜| 男人操女人黄网站| 久久久久亚洲av毛片大全| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲欧美精品综合久久99| 在线视频色国产色| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 少妇的丰满在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲第一青青草原| 色尼玛亚洲综合影院| 国产av在哪里看| 1024手机看黄色片| 搡老熟女国产l中国老女人| 日本 av在线| 香蕉国产在线看| 国语自产精品视频在线第100页| 午夜免费观看网址| 亚洲欧美精品综合久久99| 自线自在国产av| 在线观看免费日韩欧美大片| 激情在线观看视频在线高清| or卡值多少钱| 精品国产乱子伦一区二区三区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲成国产人片在线观看| 久久精品人妻少妇| 成人手机av| 一级黄色大片毛片| 久久久久久国产a免费观看| 九色国产91popny在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 男男h啪啪无遮挡| 一进一出好大好爽视频| 精品久久久久久成人av| 色在线成人网| 在线看三级毛片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 长腿黑丝高跟| 亚洲一区高清亚洲精品| 精品不卡国产一区二区三区| 成在线人永久免费视频| 国产99久久九九免费精品| 亚洲中文av在线| 国产熟女xx| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美精品亚洲一区二区| 99在线视频只有这里精品首页| 日韩精品青青久久久久久| 免费看日本二区| 黄色女人牲交| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 91成年电影在线观看| 欧美性长视频在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 午夜福利高清视频| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日本一本二区三区精品| 久久久精品欧美日韩精品| 色老头精品视频在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 大型黄色视频在线免费观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 草草在线视频免费看| 久久人妻av系列| 色综合站精品国产| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产色视频综合| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲精品国产一区二区精华液| 一进一出好大好爽视频| 一级毛片高清免费大全| 欧美在线一区亚洲| 999久久久精品免费观看国产| x7x7x7水蜜桃| 久热这里只有精品99| 亚洲人成网站高清观看| a级毛片a级免费在线| 日韩精品中文字幕看吧| 男人操女人黄网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日韩三级视频一区二区三区| 色播在线永久视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产一区二区在线av高清观看| 国产激情欧美一区二区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 757午夜福利合集在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 国产成人av激情在线播放| 国产精品,欧美在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久天堂一区二区三区四区| 黄色丝袜av网址大全| 黄色女人牲交| 国产片内射在线| 国产av一区二区精品久久| 久久伊人香网站| 两个人免费观看高清视频| 午夜成年电影在线免费观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 成人亚洲精品av一区二区| 一a级毛片在线观看| 午夜久久久在线观看| 久久亚洲精品不卡| 一级毛片精品| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久婷婷成人综合色麻豆| www国产在线视频色| 99热只有精品国产| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产精品久久电影中文字幕| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲最大成人中文| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品国产一区二区三区四区第35| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 久久久国产精品麻豆| 欧美日韩精品网址| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲精品av麻豆狂野| cao死你这个sao货| 91字幕亚洲| 精品久久久久久成人av| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲专区国产一区二区| 在线看三级毛片| 宅男免费午夜| 欧美乱色亚洲激情| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产在线观看jvid| 免费在线观看日本一区| cao死你这个sao货| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产乱人伦免费视频| 可以在线观看的亚洲视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 麻豆一二三区av精品| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久欧美精品欧美久久欧美| 制服人妻中文乱码| 欧美日韩乱码在线| 999久久久精品免费观看国产| 精品欧美一区二区三区在线| 国产午夜精品久久久久久| 国产黄片美女视频| 亚洲欧美激情综合另类| 久久久久久久久久黄片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品国产一区二区三区四区第35| 真人做人爱边吃奶动态| 在线观看午夜福利视频| 村上凉子中文字幕在线| 中文字幕久久专区| 夜夜爽天天搞| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 日韩欧美国产在线观看| 香蕉丝袜av| 免费在线观看影片大全网站| www.精华液| 亚洲无线在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 国产成人欧美在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美日韩精品网址| 两人在一起打扑克的视频| 88av欧美| 白带黄色成豆腐渣| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 757午夜福利合集在线观看| 一进一出抽搐动态| 免费电影在线观看免费观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美午夜高清在线| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 麻豆国产av国片精品| 久久99热这里只有精品18| 国产精品亚洲美女久久久| 麻豆成人午夜福利视频| 国产免费av片在线观看野外av| 国产伦在线观看视频一区| 后天国语完整版免费观看| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩大码丰满熟妇| 国产真人三级小视频在线观看| 人人妻人人看人人澡| 国产色视频综合| 久久亚洲精品不卡| 成人永久免费在线观看视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 1024香蕉在线观看| 女性被躁到高潮视频| 免费在线观看成人毛片| 国产精品二区激情视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 最新在线观看一区二区三区| 黄色视频不卡|