2011—2020年蒙自市狂犬病流行病學調(diào)查分析

王艷芬，張雅倫，舒相華，張瑩，張雅靖，王余磊，呂濤，張智慧，潘瓊，黃鑫，董燕，宋春蓮*

(1.蒙自市動物疫病預防控制中心，云南 蒙自 661199； 2.云南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，云南 昆明 650201； 3.昆明市豬病防治重點實驗室，云南 昆明 650201；4.昆明市動物疫病防控技術(shù)科技創(chuàng)新中心，云南 昆明 650201)

狂犬病(Rabies)俗稱“瘋狗病”“恐水癥”，是由狂犬病病毒引起的一種以侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)為特征的高度致死性的人獸共患傳染病，我國將其歸于二類動物疫病，是迄今為止唯一病死率達 100%的急性傳染病?？袢《就庑纬蕪棤睿瑑?nèi)含有單鏈RNA，病毒顆粒長130～240nm，直徑65～80 nm[1]。狂犬病病毒易被日光、紫外線、甲醛、新潔爾滅、50%～70%酒精等滅活。人主要是通過直接接觸感染，大多是被攜帶狂犬病毒的動物抓傷、咬傷或舔舐傷口處，或者狂犬病患病動物唾液和組織液直接接觸傷口發(fā)生感染。也能夠通過吸入氣溶膠而感染[2]。臨床表現(xiàn)以恐水、畏光、吞咽困難、流涎、狂躁等為主要特征。當前，仍然沒有有效藥物和療法治療狂犬病[3]，暴露前或暴露后接種狂犬疫苗是唯一有效的預防手段[4]，在被患狂犬病動物或疑似患狂犬病動物咬傷、舔舐后，應立即用流水、肥皂水沖洗傷口，并及時注射狂犬病疫苗，降低狂犬病的發(fā)病率?？袢〉陌l(fā)病過程可分為3個階段：一是局部組織內(nèi)繁殖期；二是侵入中樞神經(jīng)期；三是向各器官擴散期?？袢“l(fā)生不分季節(jié)，一年四季都可能發(fā)生，在我國，狂犬病發(fā)生集中在夏秋兩季[2]，居全球第二，僅次于印度。有資料表明，狂犬病病毒主要由蝙蝠傳播[5]，而犬是人和動物間傳播狂犬病病毒的主要連接對象。我國狂犬病的流行，自20世紀50年代以來出現(xiàn)過3次高峰[6]，由此可見，我國狂犬病疫情依然比較嚴重，而且狂犬病疫區(qū)在我國呈不斷擴大的趨勢，全國已有28個省市報告過狂犬病。為了防止狂犬病的發(fā)生和傳播，對易感動物進行狂犬病疫苗免疫預防是一項至關重要的工作。

目前，關于狂犬病抗體檢測技術(shù)主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗、間接免疫熒光法、快速熒光灶抑制試驗、膠體金免疫層析技術(shù)等?？袢】乖瓩z測技術(shù)主要有熒光抗體試驗、乳膠凝集試驗、免疫組織化學、原位雜交法、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應、基因芯片技術(shù)等?？贵w檢測中酶聯(lián)免疫吸附試驗具有快速、敏感、簡便的優(yōu)點，抗原檢測中熒光RT-PCR方法具有較高的特異性和靈敏度。本次檢測采用ELISA和熒光RT-PCR方法完成檢測，通過此次檢測，能夠為蒙自市7個街道(鄉(xiāng)、鎮(zhèn))狂犬病的防控工作提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料來源

材料來源于2011—2020年蒙自市7個街道(鄉(xiāng)、鎮(zhèn))(文瀾街道、草壩鎮(zhèn)、雨過鋪街道、新安鎮(zhèn)、冷泉鎮(zhèn)、西北勒鄉(xiāng)、期路白鄉(xiāng))，經(jīng)“春季或秋季集中免疫加日常補免”程序免疫狂犬病疫苗的犬只,犬血清和唾液棉拭子分別為282份和124份。

1.2 采樣方法及保存

參照《動物狂犬病病毒中和抗體檢測技術(shù)》(GB/T 34739—2017)，無菌采集犬血液不少于2mL,室溫或37℃靜置60min，4℃放置1h后, 6000r /min離心5min,收集上清,-20℃以下保存待檢。無菌采集犬唾液棉拭子放置于有PBS的2mL離心管中，4℃放置2h后，擠壓棉球，并離心取上清液，-20℃以下保存待檢。

1.3 主要設備

全波長酶標儀(Multiskan SKY)，熒光定量PCR儀(BIO RAD美國伯樂)，高速冷凍離心機(Thermo Fisher)。

1.4 主要試劑

狂犬病 ELISA 檢測試劑盒(上海艾研生物科技有限公司)、狂犬病熒光RT-PCR試劑盒(北京海森通生物科技有限責任公司)。

1.5 檢測方法

ELISA檢測方法，將分離后的血清，參照ELISA 試劑盒說明書進行操作。熒光RT-PCR檢測方法，所有采集的拭子參照熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書進行操作。

1.6 結(jié)果判定

ELISA檢測結(jié)果PI(阻斷率)>35%判斷為陽性。熒光RT-PCR檢測結(jié)果Ct值≤30.0，且出現(xiàn)特定的擴增曲線，判定為陽性。

2 結(jié)果

2.1 抗體檢測結(jié)果

282份犬血清進行免疫抗體檢測，結(jié)果見表1?？傟栃月蕿?4.1%。其中2011年、2013年、2015年分別為61.8%、56.0%、67.9%，低于70%為免疫不合格；2019年、2020年抗體陽性率較高，均超過90%，免疫效果良好。

表1 2011—2020年蒙自市7個街道(鄉(xiāng)、鎮(zhèn))犬只狂犬病免疫抗體檢測結(jié)果

2.2 2011-2020年免疫抗體水平變化結(jié)果分析

如圖1可見，免疫抗體水平10年呈上升趨勢。其中2013年最低，2019年最高。

圖1 2011—2020年狂犬病免疫抗體水平趨勢圖

2.3 抗原檢測結(jié)果

由表2可見，124份犬唾液棉拭子檢測結(jié)果，2017年和2020年陽性率均為23.1%，表明該地區(qū)有犬感染狂犬病病毒，并出現(xiàn)發(fā)病犬傷人的情況。

表2 2011—2020年犬狂犬病抗原檢測結(jié)果

2.4 地理分布

根據(jù)對抗原陽性樣品的來源追蹤，發(fā)現(xiàn)抗原陽性樣品來自西北勒和期路白2個鄉(xiāng)，且陽性樣品數(shù)均為3份，其他街道(鄉(xiāng)、鎮(zhèn))均未檢出抗原陽性樣品。

2.5 年齡分布

西北勒和期路白2個鄉(xiāng)出現(xiàn)狂犬病發(fā)病犬咬人情況，對被咬傷的12人進行年齡調(diào)查，結(jié)果顯示2～8歲有3人，24～45歲有4人，50～86歲有5人，成年人的占比高于未成年人，這可能與被咬傷者的活動能力和活動軌跡有一定關系。

3 討論

3.1 蒙自市7個街道(鄉(xiāng)、鎮(zhèn))發(fā)病犬流行病學調(diào)查結(jié)果

在對發(fā)病犬和被病犬咬傷病例的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，時間在5—9月，此時正處于夏秋季節(jié)，天氣炎熱，犬易煩躁發(fā)狂，這一結(jié)果與其他地區(qū)報道的病例多發(fā)生在氣候溫暖的季節(jié)，具有明顯的季節(jié)性特征[7，8]相符合，發(fā)病犬出現(xiàn)在蒙自市相對較偏遠山區(qū)鄉(xiāng)，且發(fā)病犬未經(jīng)免疫。有報道，我國農(nóng)村犬狂犬病免疫率為48.7%，城市中犬的整體免疫率約為59.3%[6]，農(nóng)村地區(qū)的免疫率低于城市?？袢∧壳吧袩o特效治療方法，只能依靠疫苗免疫預防，該地犬發(fā)病可能與未經(jīng)疫苗免疫有直接聯(lián)系，增加了狂犬病發(fā)病概率。本次抗原檢測2017年有3例犬狂犬病發(fā)病病例出現(xiàn)且咬傷8人，有資料顯示，我國因患狂犬病致死案例就有90例，僅次于印度居世界第二[9]?？袢〔《镜膫鞑ネ緩蕉喾N多樣，可通過舔咬直接接觸傳播，也可污染周圍環(huán)境，造成間接傳播[10]，同群犬中可能通過相互舔咬或污染環(huán)境而造成交叉感染。

3.2 狂犬病疫苗免疫中存在的問題

2011—2020年抗體陽性率基本呈現(xiàn)逐年升高趨勢，2013 年最低，2019年最高，其次是2020年，出現(xiàn)這種情況可能與使用疫苗的種類有關，2019年、2020年均使用狂犬病弱毒疫苗，其他年份均使用狂犬病滅活疫苗，陳玉華[11]在試驗中得出結(jié)論，PRRS弱毒疫苗的免疫效果明顯優(yōu)于滅活苗。盧毅[12]指出高致病性豬藍耳病弱毒疫苗的抗體水平和抗體上升速度較快,免疫作用較強,在使用時可以優(yōu)先考慮弱毒疫苗。弱毒疫苗具有免疫原性好、免疫期長等特性，結(jié)合蒙自市7個街道(鄉(xiāng)、鎮(zhèn))的疫苗免疫合格率，在狂犬病的免疫預防時，應該優(yōu)先采用弱毒疫苗進行免疫。

3.3 狂犬病的危害及防控

此次抗體檢測分析，每年采集到的樣本量較少，可能會造成抗體檢測結(jié)果有誤差，但是也能說明蒙自市狂犬病免疫抗體陽性率逐年增加；抗原檢測結(jié)果暴露出狂犬病在該地區(qū)存在，且狂犬病的危害較為嚴重，不僅是對易感動物，人也容易被病毒攜帶動物咬傷、抓傷，導致狂犬病的發(fā)生?？袢〉姆揽貞凑詹煌貐^(qū)制定不同的狂犬病免疫程序，每年有計劃地開展狂犬病免疫抗體和病原學監(jiān)測，及時掌握免疫效果和疫情動態(tài)。同時，定期開展狂犬病流行病學調(diào)查，掌握犬只養(yǎng)殖情況和免疫情況，分析狂犬病防控過程中存在的問題及疫情風險因素，提出科學防控方案。加強狂犬病對社會公共安全危害的宣傳力度，提高人們對狂犬病的認知度，增強人們對犬只咬傷、抓傷的處理意識，完善規(guī)范養(yǎng)犬管理制度，要求對所有犬只進行拴養(yǎng)，降低發(fā)病風險。增強人們的防護意識，注重環(huán)境消毒工作，對疑似發(fā)病犬或死亡犬進行上報，集中到固定地點進行嚴格消毒并無害化處理，不隨意丟棄，不私自處理，以免造成疫病傳播。