杜琛,陸穎,速雪麗,柏家果,張勝斌,吳雨殊,曲雅新,羅期方,張寧,陳櫻,韋祖樟,黃偉堅(jiān),歐陽(yáng)康*
(1. 廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,廣西 南寧 530005;2. 廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)西江有限公司,廣西 貴港 537104)
豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae, Mhp)是引起豬支原體肺炎(MPS)和相關(guān)豬呼吸系統(tǒng)疾病綜合征(PRDC)的病原體[1]。該病在寒冷季節(jié)多發(fā),一年四季均可發(fā)生,育肥豬是其主要感染群體,且Mhp能以氣溶膠為載體實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)距離的傳播[2],這一特點(diǎn)大大增加了對(duì)Mhp進(jìn)行防控的難度。由Mhp引起的疾病多以氣喘為主要癥狀,主要病理變化為肺部對(duì)稱性肉變,尖葉、心葉和膈葉前緣均會(huì)發(fā)生肉樣病變以及蝦肉樣病變[3],組織學(xué)變化主要以細(xì)支氣管管腔和肺泡腔內(nèi)細(xì)胞浸潤(rùn)為特征[4]。感染Mhp的豬通常表現(xiàn)為生長(zhǎng)受阻、飼料轉(zhuǎn)化率降低,且豬場(chǎng)會(huì)出現(xiàn)連續(xù)不斷發(fā)病的現(xiàn)象。此外,該病原還能造成免疫缺陷,從而誘發(fā)豬群產(chǎn)生多種疾病[5]。
豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus, PCV2)是一種無(wú)囊膜的單股環(huán)狀負(fù)鏈DNA病毒[6],與PCV1共同屬于豬圓環(huán)病毒[7]。PCV2可使豬產(chǎn)生包括生殖疾病、神經(jīng)系統(tǒng)病變、腸炎、壞死性肺炎等在內(nèi)的多種疾病[8],同時(shí)還會(huì)對(duì)豬群造成免疫抑制,降低豬群的抵抗力,使豬群更易受到其他病原體的侵害。
Mhp和PCV2在世界各國(guó)廣泛流行,都能引起豬產(chǎn)生嚴(yán)重的免疫抑制現(xiàn)象[9, 10],給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。而疫苗免疫則是防控這兩種病原最有效的方法之一,因此,本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)試A、B兩種Mhp疫苗和C、D、E、F四種PCV2疫苗不同組合對(duì)育肥豬所產(chǎn)生的不同效果,來為豬場(chǎng)篩選疫苗提供理論依據(jù),為生豬養(yǎng)殖行業(yè)提供指導(dǎo),同時(shí)為科學(xué)評(píng)判疫苗效果提供數(shù)據(jù)支持。
1.1.1實(shí)驗(yàn)場(chǎng)地
目前,廣西地區(qū)的生豬養(yǎng)殖模式一般為養(yǎng)殖戶與公司之間合作生產(chǎn)的規(guī)?;B(yǎng)殖,公司對(duì)各個(gè)養(yǎng)殖戶的基礎(chǔ)設(shè)施、飼養(yǎng)管理以及環(huán)境衛(wèi)生等方面進(jìn)行監(jiān)管,各個(gè)養(yǎng)殖戶間的養(yǎng)殖環(huán)境基本保持一致。
本研究對(duì)各個(gè)養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖環(huán)境、養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)以及養(yǎng)殖戶過往經(jīng)歷進(jìn)行了調(diào)查和篩選,選出8個(gè)效益好、成績(jī)穩(wěn)定的養(yǎng)殖戶,且根據(jù)雙盲試驗(yàn)的要求,未對(duì)養(yǎng)殖戶公開其所用疫苗的組合情況,保證除免疫不同疫苗外,其他條件一致。
1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
實(shí)驗(yàn)用豬來自廣西某公司的兩個(gè)不同豬場(chǎng),均為杜長(zhǎng)大三元雜交商品肉豬。所選妊娠母豬的窩產(chǎn)活仔數(shù)在8頭以上,母豬胎次為2~6胎。然后篩選出初生重1.5 kg以上、21日齡斷奶體重達(dá)到6 kg以上健康仔豬作為實(shí)驗(yàn)用豬。豬場(chǎng)一選用仔豬2 009頭,豬場(chǎng)二選用仔豬1 470頭。
1.1.3實(shí)驗(yàn)疫苗
選用A、B兩種Mhp疫苗與C、D、E、F四種PCV2疫苗,詳細(xì)信息見表1。
表1 疫苗信息及免疫程序
1.2.1實(shí)驗(yàn)分組
實(shí)驗(yàn)豬隨機(jī)分為8組,每組實(shí)驗(yàn)豬280~600頭。挑選養(yǎng)殖成績(jī)較好且較穩(wěn)定的養(yǎng)殖戶,每個(gè)實(shí)驗(yàn)組對(duì)應(yīng)一個(gè)養(yǎng)殖戶。各組按廠家推薦的免疫程序進(jìn)行免疫,其他疫苗的免疫保持不變,按公司免疫程序統(tǒng)一執(zhí)行。
表2 各組疫苗組合情況及進(jìn)苗頭數(shù)對(duì)應(yīng)表
1.2.2數(shù)據(jù)收集
記錄各組飼料消耗情況,計(jì)算得到料肉比(FCR);稱取21日齡斷奶和200日齡屠宰時(shí)各實(shí)驗(yàn)組的全群體重,并計(jì)算得出頭均日增重;記錄各組上市后所獲收益,計(jì)算得出頭均毛利;實(shí)驗(yàn)結(jié)束(200日齡)后計(jì)算出每組平均每頭豬所耗藥費(fèi);每組隨機(jī)抽樣20頭豬,屠宰后進(jìn)行肺部評(píng)分;記錄不同疫苗組合的上市率與上市合格率。實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格做好數(shù)據(jù)記錄。
肺部評(píng)分系統(tǒng)采用Madec方法[11],見表3。根據(jù)肺葉損傷面積比例劃分為5個(gè)等級(jí),評(píng)分依次為0~4分。分別對(duì)肺部尖葉、心葉、膈葉和副葉七個(gè)肺葉進(jìn)行評(píng)分,每個(gè)肺葉的得分之和為所檢豬只的肺部評(píng)分,每頭豬的最高評(píng)分為28分。
表3 肺部評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)
1.2.3權(quán)重系數(shù)
根據(jù)行業(yè)專家意見,如表4設(shè)定評(píng)價(jià)參數(shù)并賦予不同參數(shù)特定的權(quán)重系數(shù)。針對(duì)本實(shí)驗(yàn)的8組評(píng)價(jià)對(duì)象,每個(gè)參數(shù)排名第1位到第8位分別得分100、95、90、85、80、75、70、65,乘以各自所占系數(shù),再相加得到各組評(píng)價(jià)對(duì)象的總分,以此作為最終的排名依據(jù)。
表4 參數(shù)與所占權(quán)重系數(shù)表
對(duì)8個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別所消耗的飼料量與各個(gè)實(shí)驗(yàn)組總的增重量進(jìn)行統(tǒng)計(jì),得出各組料肉比數(shù)據(jù),結(jié)果見表5。由表中數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn),第1組和第2組料肉比最低,兩組實(shí)驗(yàn)豬平均增重1 kg需要的飼料量分別為2.58 kg與2.57 kg,而第7組的實(shí)驗(yàn)豬平均增重1 kg需要的飼料量為2.85 kg,明顯高于其他實(shí)驗(yàn)組。
表5 各實(shí)驗(yàn)組的料肉比數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
對(duì)8個(gè)實(shí)驗(yàn)組21日齡斷奶和200日齡屠宰時(shí)的全群體重進(jìn)行統(tǒng)計(jì),得出各組頭均日增重?cái)?shù)據(jù),結(jié)果見表6。由表中數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn),第5組和第6組平均每天增重0.72kg,略高于其他組。第7組平均每天增重0.65kg,明顯低于其他組。
表6 各實(shí)驗(yàn)組的頭均日增重?cái)?shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
對(duì)8個(gè)實(shí)驗(yàn)組200日齡屠宰時(shí)所獲收益進(jìn)行統(tǒng)計(jì),得出各組頭均毛利數(shù)據(jù),結(jié)果見表7。由表中數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn),第1組頭均毛利最高,為243.78元/頭;第3、5、6組頭均毛利分別為238.12元/頭、228.71元/頭和227.91元/頭,略低于第1組。第7組每頭豬的毛利僅為114.09元,與其他實(shí)驗(yàn)組相比,結(jié)果較差。
表7 各實(shí)驗(yàn)組的頭均毛利數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
8個(gè)實(shí)驗(yàn)組200日齡屠宰時(shí)每組隨機(jī)抽樣20頭,屠宰后進(jìn)行肺部評(píng)分,結(jié)果見表8。第1、2、3組肺部評(píng)分平均值分別為2.07分、2.29分和2.56分,處于較低水平;第3、4、5、8組稍高,第7組的肺部評(píng)分為6.35分,在所有實(shí)驗(yàn)組中為最高分。
表8 各實(shí)驗(yàn)組肺部評(píng)分分析結(jié)果
實(shí)驗(yàn)對(duì)不同疫苗組合的上市率以及上市正品率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)與分析,結(jié)果見表9。由表中數(shù)據(jù)可以看出,第5組、第6組和第8組上市率較高,分別為97.86%、96.79%和95.83%;第4組的上市率為89.98%,明顯低于其他組。而上市正品率最高的是第1組和第8組,都為100%,最低的是第2組和第7組,為98.05%和98.27。
對(duì)8個(gè)實(shí)驗(yàn)組200日齡屠宰時(shí)每組平均每頭豬所耗藥費(fèi)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析,結(jié)果見表9。由表中數(shù)據(jù)可以看出,第1組和第2組的頭均藥費(fèi)最低,分別為51.42元和51.80元,最高的為第6組和第8組,分別為81.71元和79.84元。
表9 各組上市率、上市正品率和頭均藥費(fèi)統(tǒng)計(jì)表
第1—4組免疫的是Mhp疫苗A,第5—8組為Mhp疫苗B。本次研究結(jié)果顯示免疫A疫苗的肉豬在料肉比、頭均藥費(fèi)、肺部評(píng)分、頭均毛利等方面分值均優(yōu)于免疫B疫苗的肉豬,免疫A疫苗的肉豬頭均日增重較均衡,但上市率不如免疫B疫苗的肉豬,總體來說,A疫苗的免疫效果優(yōu)于B疫苗。1組與5組,2組與6組,3組與7組,4組與8組分別免疫PCV2疫苗C、D、E和F,前4組中1組成績(jī)最好,后4組中第5組成績(jī)最好,說明PCV2疫苗C的免疫效果優(yōu)于其他PCV2疫苗。
綜上所述,本次實(shí)驗(yàn)不同疫苗組合免疫效果以第1組Mhp疫苗A和PCV2疫苗C組合為最佳,在全部8個(gè)實(shí)驗(yàn)組中,該組頭均日增重排第4位,料肉比排第2位,上市率排第5位,上市正品率、肺部評(píng)分、頭均藥費(fèi)以及頭均毛利均排名第1位,最后的系數(shù)總分也是排名第1(見表10)。
表10 各組最終排名
目前,Mhp和PCV2廣泛存在于全球范圍內(nèi),并給世界各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。國(guó)內(nèi)各地豬場(chǎng)均有Mhp的流行,而感染過Mhp的豬場(chǎng),也很難對(duì)病原進(jìn)行徹底地清除[12]。另一方面,PCV2近年來在我國(guó)的流行情況也是愈發(fā)嚴(yán)重。兩種病原均能對(duì)豬群造成一定程度上的免疫抑制,而且經(jīng)常會(huì)在同一豬群中發(fā)生交叉感染,臨床癥狀又極為相似,這就大大加重了養(yǎng)豬業(yè)對(duì)其進(jìn)行防控的負(fù)擔(dān),也對(duì)預(yù)防兩種病原的疫苗提出了市場(chǎng)需求。
市場(chǎng)上針對(duì)Mhp的疫苗多種多樣,包括滅活疫苗、減毒活疫苗。但Fisch Andressa[13]等人研究發(fā)現(xiàn),這一類常規(guī)疫苗對(duì)刺激豬群產(chǎn)生免疫應(yīng)答的作用不大,接種后豬群對(duì)抗Mhp的免疫應(yīng)答能力并沒有顯著提升。而Moore[14]等人在進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn),表達(dá)文庫(kù)免疫(expression library immunization,ELI)具有良好的免疫效果,通過優(yōu)化表達(dá)文庫(kù)的篩選方法,可進(jìn)一步促進(jìn)ELI在豬支原體肺炎中的應(yīng)用,為Mhp疫苗的發(fā)展提供更廣泛的思路。
目前,對(duì)PCV2疫苗的開發(fā)與研究,已取得了顯著的成果。趙曉云[15]等人利用大腸桿菌表達(dá)PCV2 Cap蛋白生產(chǎn)的病毒樣顆粒(virus-like particles,VLP)疫苗,實(shí)現(xiàn)了PCV2 Cap蛋白在大腸桿菌中的高效可溶性表達(dá),重組的Cap (r Cap)蛋白在體外進(jìn)行自我組裝,形成的VLP具有良好的免疫原性。另外,VLP具有類似于天然病毒的抗原性和免疫原性,能夠進(jìn)行自我組裝[16],可以作為良好的疫苗候選之一。Xiaochen Guo[17]等人研究發(fā)現(xiàn)復(fù)合生物佐劑可大大增強(qiáng)PCV2疫苗的免疫效果。因此,在疫苗接種時(shí),為達(dá)到理想的免疫效果,可適當(dāng)添加合適的復(fù)合生物佐劑。
綜合我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀以及Mhp和PCV2經(jīng)常在同一豬場(chǎng)發(fā)生交叉感染的實(shí)際情況,有研究人員利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功構(gòu)建了針對(duì)Mhp與PCV2兩種病原的基因工程疫苗[18],并在小鼠與仔豬體內(nèi)進(jìn)行免疫效果的評(píng)估,結(jié)果顯示,重組疫苗與混合商業(yè)疫苗的免疫效果相當(dāng)。但同時(shí)針對(duì)兩種病原開發(fā)的基因工程疫苗技術(shù)尚不成熟,尚未惠及到實(shí)踐生產(chǎn)中。因此,本研究選用混合的商業(yè)疫苗進(jìn)行接種,此法在實(shí)踐生產(chǎn)中已有較為穩(wěn)固的平臺(tái),且在大量接種時(shí)往往能達(dá)到理想的效果。
研究采用上市率與上市正品率作為評(píng)估豬群整體狀況的指標(biāo)之一,其中上市率表示豬群銷售數(shù)量占進(jìn)苗數(shù)量的比例,體現(xiàn)出死亡豬的數(shù)量;上市正品率表示銷售的豬群數(shù)量中,符合上市標(biāo)準(zhǔn)的豬群占總銷售豬群的比例,體現(xiàn)出淘汰豬的數(shù)量。國(guó)內(nèi)市場(chǎng)針對(duì)Mhp以及PCV2兩種病原的商用疫苗種類繁多,這就使得選擇合適的疫苗、建立有效的免疫程序顯得尤為重要。有相關(guān)報(bào)道指出[19],與未進(jìn)行疫苗接種的豬群相比,接種疫苗后的豬群日增重以及飼料轉(zhuǎn)化率都有顯著提高,且免疫的豬群育肥上市時(shí)間顯著縮短,臨床癥狀、肺部病變減輕,藥物治療費(fèi)用降低,豬場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益也明顯提高[4]。而在本研究中,藥費(fèi)主要包括豬場(chǎng)日常備用藥物,包括阿莫西林、維生素C、雙黃連、氨基比林、氟苯尼考、頭孢噻吩等。采用不同組合的疫苗對(duì)豬群進(jìn)行免疫接種,豬群的日增重與飼料轉(zhuǎn)化率也有明顯不同,提示選用合適的疫苗組合對(duì)豬群進(jìn)行免疫同樣可以提高產(chǎn)業(yè)利潤(rùn)。
相較于進(jìn)行過免疫的豬群,未免疫的豬群因受病毒以及支原體的侵害,健康狀況不佳,豬群體重會(huì)受到影響。有研究[20-22]同時(shí)采用抗體檢測(cè)與觀察豬群重量變化等多個(gè)指標(biāo)對(duì)疫苗的免疫效果進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果顯示,進(jìn)行免疫的動(dòng)物比未免疫動(dòng)物日增重要高。在臨床上兩種病原體對(duì)豬的主要病理變化部位均在肺部,因此,采用肺部評(píng)分系統(tǒng),同樣可以對(duì)豬群的感染狀況進(jìn)行評(píng)估。綜上所述,通過對(duì)豬群總增重、平均日增重及肺部評(píng)分等指標(biāo)的統(tǒng)計(jì),間接地反映出不同疫苗組合之間免疫效果的差異,并結(jié)合頭均藥費(fèi)、頭均毛利等相關(guān)指標(biāo),直觀地反映出豬群免疫后產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益有所差別,最終得出較為優(yōu)質(zhì)的疫苗組合方案。在臨床生產(chǎn)實(shí)踐中,由于一些限制性條件,如果設(shè)置對(duì)照組,那么對(duì)照組將不能進(jìn)行Mhp和PCV2疫苗的免疫,在兩種病毒流行的大環(huán)境下,會(huì)帶來疫病風(fēng)險(xiǎn),造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。
總之,本研究通過對(duì)Mhp和PCV2兩種病原不同的疫苗進(jìn)行組合,以廣西本地生豬養(yǎng)殖企業(yè)為基礎(chǔ),得到了不同疫苗組合在生產(chǎn)過程中作用效果的高低,結(jié)果顯示,第1組Mhp疫苗A和PCV2疫苗C的組合較其他組合有明顯優(yōu)勢(shì),可指導(dǎo)豬場(chǎng)在制定免疫程序時(shí)有更加具體的方向,同時(shí)也為豬場(chǎng)篩選疫苗提供一定的參考依據(jù),為生豬產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)實(shí)踐提供了一定的理論數(shù)據(jù)與技術(shù)支持。