花菊盆炎顆粒提取工藝研究

唐靖雯 潘梅 張麗艷 梁斌 盧禮平

【摘 要】 目的：確定花菊盆炎顆粒最佳提取工藝。方法：應(yīng)用HPLC測定槲皮素含量，并與正丁醇浸出物總量的綜合評分為考察指標(biāo)，采用正交試驗法L9（34）優(yōu)選提取工藝條件。結(jié)果：最佳提取工藝為處方中頭花蓼、醋延胡索、三七加7倍量60%乙醇提取3次，每次1.5 h，過濾得醇提液;野菊花、夏枯草、茜草炭、粉萆薢加10倍量的水煎煮3次、每次1 h，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.15（60 ℃）的浸膏，放冷，加乙醇使藥液含醇量達(dá)70%，靜置后過濾，得水提醇沉液;合并上述濾液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.20～1.25（60 ℃）。結(jié)論：該工藝簡單、穩(wěn)定可行，對花菊盆炎顆粒的工業(yè)化生產(chǎn)具有一定的參考價值。

【關(guān)鍵詞】 花菊盆炎顆粒;正交實驗法;醇提法;水提醇沉法

【中圖分類號】R284 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2021）12-0025-06

Abstract：Objective To optimum the extraction procedure of Huaju Penyan granules. Methods The content of quercetin was determined by HPLC，and the comprehensive score of the total amount of n-butanol extract was used as the index. The orthogonal test method L9（34） was used to optimize the extraction process conditions. Results The best extraction process was to extract Polygonum capitatum，Rhizoma Corydalis （made by vinegar） and Panax notoginseng with 7 times of 60% ethanol for 3 times，1.5 h each time，and then filtered to obtain the alcohol extract; Chrysanthemum indicum，Prunella vulgaris，cypermethrin and were decocted with 10 times amount of water for 3 times，each time for 1 h. After filtration，the filtrate was concentrated to the extract with a relative density of 1.10～1.15 （60 ℃），cooled，added with ethanol to make the alcohol content of the solution reach 70%. After standing and filtering，water extraction and alcohol precipitation were obtained; The above filtrate was combined，ethanol was recovered and concentrated to a relative density of 1.20～1.25 （60 ℃）. Conclusion The optimum extraction procedure is simple，stable and practical，which has a certain reference value for the industrial production of Huaju Penyan granules.

Keywords：Huaju Penyan Granules; Qrthogonal Test; Alcohol Extraction; Water Extracting-alcohol Precipitating

花菊盆炎顆粒是利用貴州苗藥頭花蓼優(yōu)良的抗菌消炎活性特點，并結(jié)合中醫(yī)藥理論及名老中醫(yī)的臨床治療經(jīng)驗，采用頭花蓼為君藥，配以野菊花、夏枯草、醋延胡索、茜草炭、三七、粉萆薢等六味中藥組成經(jīng)驗方;由貴州威門藥業(yè)股份有限公司自主研發(fā)的一種治療女性慢性盆腔炎的純中藥復(fù)方制劑，屬于國家6類中藥新藥。頭花蓼中主要含有蘆丁、槲皮素等黃酮類成分，溶于乙醇，具有明顯的消炎、抗菌作用[1];野菊花中主要含有萜類化合物、黃酮類化合物等，水提液具有明顯的抗菌、抗病毒、抗抑郁和消炎等作用[2];夏枯草的主要成分為三萜及其苷類、苯丙素類、黃酮類、香豆素等，其水提液具有廣譜抗菌活性，消炎、鎮(zhèn)痛等作用[3];延胡索中主要含異喹啉生物堿[4]，醋延胡索較生品有利于生物堿的溶出，且研究[5]表明60%乙醇提取效果最佳;茜草主要含有蒽醌及其苷類化合物，茜草炭水提取液有消炎、抗菌作用并能縮短小鼠的凝血時間[6];三七中的主要有效成分為三七總皂苷，易溶于乙醇溶液[7];粉萆薢中主要含有皂苷和甾體皂苷類化合物，皂苷和甾體皂苷類的成分易溶于水，且具有抗病原微生物、消炎等作用[8];根據(jù)處方中各味藥物的有效成分及其理化性質(zhì)，結(jié)合實際生產(chǎn)，采用醇提與水提醇沉相結(jié)合的提取工藝。其中，頭花蓼、延胡索、三七采用乙醇提取;野菊花、夏枯草、茜草炭、粉萆薢采用水提醇沉;以槲皮素總量、正丁醇浸出物為綜合考察指標(biāo)，采用正交試驗法對醇提、水提醇沉過程中的主要影響因素進(jìn)行優(yōu)選，確定最佳的提取工藝，為花菊盆炎顆粒的批量生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)，為臨床上治療慢性盆腔炎提供一種療效確切的新藥制劑奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent-1100型高效液相色譜儀（Agilent科技有限公司）;AG135型十萬分之一電子天平（梅特勒托利多科技有限公司）;CH-250型超聲波清洗器（北京創(chuàng)新德超聲電子研究所）;101-5型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海路達(dá)實驗儀器有限公司）;SENCOR○R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申生科技有限公司）;予華牌循環(huán)水式真空泵（鞏義市英峪予華儀器廠）。

1.2 試藥 頭花蓼、野菊花、夏枯草等藥材購于貴州省藥材公司，所有藥材均符合《中國藥典》2000版（一部）或地方標(biāo)準(zhǔn)項下有關(guān)規(guī)定;花菊盆炎顆粒提取液（批號：040801、040802、040803）;槲皮素對照品（批號：10081-9905，純度：96.5%，中國食品藥品檢定研究院）;甲醇、乙腈為色譜純;水為娃哈哈純凈水;其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 正丁醇浸出物含量測定 取浸膏粉樣品約2g，精密稱定重量，置100 mL的錐形瓶中，精密加入正丁醇50 mL，塞緊，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，稱定重量，用正丁醇補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，計算樣品中浸出物的含量。

2.2 槲皮素含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent TC-C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50，V/V）;流速：1 mL·min-1;檢測波長：360 nm;柱溫：25 ℃;進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取浸膏粉約0.2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-25%鹽酸溶液（4∶1）混合液25 mL，密塞，稱定重量，搖勻，水浴回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇-25%鹽酸溶液（4∶1）混合液補足減失的重量，搖勻，靜置，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

2.3 提取工藝條件的優(yōu)選

2.3.1 頭花蓼、醋延胡索、三七藥材的醇提工藝研究 根據(jù)預(yù)試驗的結(jié)果，以影響提取工藝的主要因素乙醇濃度（A）、乙醇用量（B）、提取時間（C）、提取次數(shù)（D）為考察因素，以測得的君藥頭花蓼中槲皮素總量及浸膏收率為綜合評價指標(biāo)。每個因素3個水平，用正交表L9（34）進(jìn)行優(yōu)選，正交試驗因素水平見表2。優(yōu)選醇提工藝條件，正交試驗結(jié)果見表3。

根據(jù)正交試驗結(jié)果，以槲皮素含量及浸膏收率為評價指標(biāo)，理論上的最佳提出工藝條件為A1B3C2D3，結(jié)合K值，根據(jù)表2方差分析結(jié)果表明，各因素作用的主次為D>A>C>B，并通過表3方差分析可知，A、C、D因素均具有極顯著性差異（P<0.01）。最終確定最佳的提取工藝條件為A1B2C2D3組合為佳，即加7倍量60%乙醇提取1.5 h，共提3次。

2.3.2 野菊花、夏枯草、茜草炭、粉萆薢藥材的水提工藝研究 根據(jù)預(yù)試驗的結(jié)果，以影響提取工藝的主要因素加水量（A）、煎煮時間（B）、煎煮次數(shù)（C）為考察因素，以測得的正丁醇浸出物的總量為評價指標(biāo)。每個因素3個水平，用正交表L9（34）進(jìn)行優(yōu)選，正交試驗因素水平見表4。優(yōu)選水提工藝條件，正交試驗結(jié)果見表5。

結(jié)果表明：由直觀分析可知，各因素作用的主次為C>A>B;并由方差分析結(jié)果可知，A、B因素對結(jié)果沒有顯著性影響（P>0.05）、C因素對結(jié)果具有顯著性影響（P<0.05），結(jié)合生產(chǎn)實際成本考慮，以組合A3B1C3為佳，即加10倍量水提取1 h，共提3次。

2.3.3 野菊花、夏枯草、茜草炭、粉萆薢藥材的醇沉工藝研究 為了最大限度地除去水提液中的無效成分，盡可能地保留有效成分，本工藝采用醇沉的方法對水提液進(jìn)行精制。以浸膏相對密度（A）、醇沉濃度（B）兩個因素，每個因素三個水平進(jìn)行優(yōu)選。按“2.3.2”項下水煎煮最佳工藝A3B1C3條件提取，將所得的濾液平均分為三份，每一份分別濃縮至相應(yīng)的密度后，按正交表L9（34）進(jìn)行正交試驗，正交試驗因素水平見表7，結(jié)果見表8。

由表8極差值大小顯示，各因素作用的主次為A>B;并由表9方差分析結(jié)果可知，A因素對結(jié)果具有極顯著性影響（P<0.01），B因素具有顯著性影響（P<0.05）;以A2B2組合為佳，即浸膏的相對密度在1.10～1.15之間，醇沉?xí)r使藥液含醇量達(dá)70%。

2.4 驗證試驗 按處方稱取頭花蓼、醋延胡索、三七藥材各3份，對上述“2.3.1”項下確定的最佳工藝條件進(jìn)行驗證，結(jié)果見表10;按處方稱取野菊花、夏枯草、茜草炭、粉萆薢藥材各3份，對上述“2.3.2”項下確定的水提工藝條件進(jìn)行驗證，結(jié)果見表11，并在此基礎(chǔ)上，對“2.3.3”項下確定的醇沉工藝進(jìn)一步的驗證，結(jié)果見表12。驗證結(jié)果表明該提取工藝可行，可用于工業(yè)生產(chǎn)。

3 討論

3.1 評價指標(biāo)性的選擇 處方中頭花蓼、醋延胡索、三七以60%乙醇提取，因頭花蓼具有良好抗菌、抗炎作用，與該制劑的功能主治一致，故以君藥頭花蓼中槲皮素作為醇提工藝的評價指標(biāo)，同時，考慮野菊花、夏枯草、茜草炭、粉萆薢中均含苷類成分，此類成分易溶于正丁醇中，因此，選擇正丁醇浸出物的總量作為水提醇沉提取物的評價指標(biāo)。

3.2 流動相的選擇 按君藥頭花蓼現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》[9]項下方法的流動相進(jìn)行測定，其槲皮素出峰時間較長。本研究在該流動相的基礎(chǔ)上改變其比例，經(jīng)摸索選定流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液（60∶40）分離效果較好，出峰時間短，且與其它成分無干擾;經(jīng)樣品峰純度檢查，證明為純峰，故以甲醇-0.4%磷酸溶液（60∶40）為流動相。

3.3 提取工藝驗證試驗 該提取工藝驗證試驗中，分別對醇提、水提、醇沉工藝分別進(jìn)行驗證，從各部分的驗證試驗結(jié)果可發(fā)現(xiàn)該工藝穩(wěn)定、可行，后續(xù)研究將增加整個提取過程的最終驗證試驗，以便進(jìn)一步驗證該工藝。

4 結(jié)論

根據(jù)處方中藥物性質(zhì)，本試驗采用了乙醇提取法、水提醇沉法相結(jié)合的提取工藝。采用正交設(shè)計，以浸膏收率、槲皮素總量為評價指標(biāo)，確定醇提工藝為頭花蓼、醋延胡索、三七加7倍量60%乙醇提取3次，每次1.5 h，過濾得醇提液;以正丁醇浸出物總量、浸膏收率為評價指標(biāo)，確定最佳水提醇沉工藝為野菊花、夏枯草、茜草炭、粉萆薢加10倍量的水煎煮3次、每次1 h，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.15（60 ℃）的浸膏，放冷，加乙醇使藥液含醇量達(dá)70%，靜置后過濾，得水提醇沉液;合并上述濾液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.20～1.25（60 ℃）。

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（收稿日期：2020-12-01 編輯：劉斌）