人參寡肽抗苯并芘誘發(fā)肺上皮細(xì)胞炎性損傷研究

高 超，劉 杰，趙傳欣

（1.南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院藥劑科，廣東廣州 510000；2.深圳大學(xué)呼吸系統(tǒng)變態(tài)反應(yīng)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東深圳 518060；3.東營市人民醫(yī)院科教科，山東東營 257000）

人參作為一種常用中藥，具有補(bǔ)脾益肺、扶正祛邪、補(bǔ)齊益智的功效，在韓國、中國和日本等國家被廣泛使用。人參富含生物活性成分，如人參皂苷、人參多糖、多肽和黃酮類化合物等[1]。研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷是其主要有效成分，具有抗腫瘤、抗氧化、抗菌抗病毒等多種功效[2]。然而，人參肽類化合物的研究較少。寡肽是多肽的一種分類，一般由4～10個(gè)氨基酸組成，具有易于吸收的特點(diǎn)；現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，多種寡肽具有極強(qiáng)的生物活性，如免疫調(diào)節(jié)功能[3]、抗氧化[4]、抗炎[5]等，因此寡肽是新藥研發(fā)的潛力股。

隨著大氣污染的加劇，哮喘、急性呼吸道感染和肺癌等疾病不斷發(fā)生。研究表明，長期暴露在空氣污染物中會增加哮喘的發(fā)病率[6]。化石燃料燃燒被認(rèn)為是空氣污染中多環(huán)芳烴的主要來源[7]，其中苯并芘（Benzopyrene，Bap）是一種常見的致癌物，與哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病有著密切的關(guān)系[8]。芳香烴受體（Aromatic Hydrocarbon Receptor，AHR）是一種配體激活轉(zhuǎn)錄因子，被激活后AHR從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核，導(dǎo)致靶基因轉(zhuǎn)錄的改變（如CYP1A1、CYP1B1）和誘發(fā)免疫反應(yīng)[9?10]。此外，AHR可通過調(diào)控炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)進(jìn)而影響免疫反應(yīng)[11]。此外，氣道上皮細(xì)胞也可通過產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子對環(huán)境刺激作出反應(yīng)[12]，在哮喘的發(fā)生過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[13]。核因子（NF-κB）在炎癥反應(yīng)的基因調(diào)控和炎癥細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄調(diào)控中都起著重要作用[14]。如在LPS刺激的THP-1細(xì)胞中，c-Jun復(fù)合物與NF-κB蛋白p50/p65相互作用會協(xié)同增強(qiáng)TNF-α啟動子活性[15]。

基于此，本研究將分離人參中的寡肽類活性成分，治療由Bap導(dǎo)致的肺上皮細(xì)胞損傷，檢測肺上皮細(xì)胞中ROS的含量、線粒體膜電位的變化和細(xì)胞凋亡等指標(biāo)，并研究其可能涉及的作用機(jī)制，為人參的功能性產(chǎn)品的開發(fā)甚至是寡肽新藥的研發(fā)提供新的思路和參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮人參 深圳市凱聯(lián)健康生物技術(shù)有限公司（2019年11月，購買于吉林省通化市東昌區(qū)光明路11號同仁堂藥店，經(jīng)暨南大學(xué)藥學(xué)院周光雄教授鑒定為（Panax ginsengC. A.Meyer）是五加科、人參屬多年生草本植物人參根）；IMDM、DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清（FBS）Invitrogen（Termo Fisher Scientifc，MA，USA）；人肺上皮II型細(xì)胞（A549） 中國科學(xué)院細(xì)胞庫（上海）；ELISA試劑盒 碧云天生物科技有限公司（江蘇省碧云天生物技術(shù)研究所）；其他化學(xué)試劑 均為分析純。

Alliance MINIHD6多功能化學(xué)發(fā)光成像儀UVITEC公司；multiskan GO全波長酶標(biāo)儀 賽默飛公司；CytoFLEX小型細(xì)胞信號分析儀 貝克曼公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 人參總蛋白的制備及寡肽的分離篩選

1.2.1.1 蛋白的提取 所有提取和分離步驟均在低于4℃條件下進(jìn)行。將未做烘干處理的新鮮人參（2.0 kg）用榨汁機(jī)攪碎，100～200目篩過濾，濾液在2500 mL水/異丙醇（1:15 w/v）中攪拌4 h。隨后，抽濾，收集沉淀物（110 g）并溶解在0.20 mol/L磷酸鹽緩沖溶液（PBS，pH7.3）中（5%，w/v）。離心（8000×g，15 min），收集上清液并冷凍干燥，作為總蛋白在?20℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1.2 超濾分餾 以1 k Da分子量（MW）的超濾膜對所得總蛋白進(jìn)行分離，獲得兩種肽組分RSO-A（MW≤1 k Da）和RSO-B（MW>1 k Da）。

疏水色譜：將RSO-A溶解于1.20 mol/L（NH4）2SO4中并上樣于緩沖液（0.20 mol/L PBS，pH7.3）平衡的Sepharose CL-4B疏水色譜柱（3.0 cm×90 cm）。以2.0 mL/min流速的（NH4）2SO4（1.20、0.60和0 mol/L）逐步洗脫。每50 mL收集并280 nm監(jiān)測。共收集到10個(gè)組分，凍干，檢測其增強(qiáng)A549細(xì)胞抗Bap暴露導(dǎo)致細(xì)胞損傷的活性，收集活性最強(qiáng)的部分用于陰離子交換色譜。

1.2.1.3 陰離子交換色譜 將RSO-A-2溶液（3 mL，786 mg/mL）裝入去離子水預(yù)平衡的DEAE-52纖維素陰離子交換柱（2.5 cm×110 cm）中，用蒸餾水、0.10、0.60和1.20 mol/L （NH4）2SO4溶液以2.5 mL/min的流速洗脫，每60 mL收集洗脫液，280 nm監(jiān)測。收集6個(gè)組分（RSO-A-2-1～RSO-A-2-6）凍干，檢測其增強(qiáng)A 549細(xì)胞抗Bap暴露導(dǎo)致的細(xì)胞損傷的活性，收集活性最強(qiáng)的部分用于凝膠過濾色譜。

1.2.1.4 凝膠過濾色譜 在Sephadex G-25柱（2.2 cm×110 cm）上以1.5 mL/min的流速對RSO-A-2-3溶液（2 mL，252 mg/mL）進(jìn)行分餾。280 nm處收集并監(jiān)測，收集4個(gè)組分（RSO-A-2-3-1～RSO-A-2-3-4）并冷凍干燥，檢測其增強(qiáng)A549細(xì)胞抗Bap暴露導(dǎo)致的細(xì)胞損傷的活性。收集活性最強(qiáng)的部分用于反相高效液相色譜（RP-HPLC）。

1.2.1.5 反相高效液相色譜 RSOA-2-3-3最終用RPHPLC（安捷倫1200-HPLC）分離。色譜柱為Zorbax，SB C-18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），洗脫溶劑體系由水/三氟乙酸（溶劑A；100:0.1，v/v）和乙腈/三氟乙酸（溶劑B；100:0.1，v/v）組成。流速：1.0 mL/min，梯度洗脫法（溶劑B 30%～80%），洗脫時(shí)間：60 min，檢測波長：280 nm，柱溫：20℃。RSO-1（tR 3.32 min）、RSO-2（tR 5.54 min）、RSO-3（tR 7.58 min）、RSO-4（tR 9.96 min）、RSO-5（tR 11.3 min）。HPLC法測定RSO-1～5的純度（>97.0%），RSO-1～5溶于PBS（10.0 mmol/L）。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及活性測定A549細(xì)胞于DMEM培養(yǎng)基（10%FBS、100 U/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素和2 mmol/L L-谷氨酰胺）于37°C 5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。A 549細(xì)胞（3×104細(xì)胞/孔）接種于96孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)過夜。Bap（10 nmol/L）處理細(xì)胞3.0 h后，離心，棄上清液，細(xì)胞分別與RSO-1～5（20μmol/L）共培養(yǎng)12 h，CCK8檢測試劑盒檢測細(xì)胞活性。

1.2.3 活性氧（ROS）定及線粒體膜電位（ΔΨm）檢測5×105細(xì)胞/孔接種于6孔板中培養(yǎng)24 h，Bap（10 nmol/L）處理3.0 h后，離心，棄上清液，細(xì)胞換用新的培養(yǎng)基并加入RSO-1（10、50μmol/L）共培養(yǎng)12 h，ELISA試劑盒檢測ROS含量。

5×105細(xì)胞/孔接種于6孔板中培養(yǎng)24 h，Bap（10 nmol/L）處理3.0 h后，離心，棄上清液，細(xì)胞換用新的培養(yǎng)基并加入RSO-1（10、50 μmol/L）共培養(yǎng)12 h后，收集細(xì)胞，冷PBS洗滌，用1μg/mL JC-1在37℃黑暗中孵育30 min。流式細(xì)胞儀（BD-FACS-Calibur，F(xiàn)ranklin Lakes，USA）分析ΔΨm變化情況。

1.2.4 細(xì)胞凋亡及Western blotting檢測5×105細(xì)胞/孔接種于6孔板中培養(yǎng)24 h，Bap（10 nmol/L）處理3.0 h后，離心棄上清液，細(xì)胞換用新的培養(yǎng)基并加入RSO-1（10、50μmol/L）共培養(yǎng)12 h，收集細(xì)胞用Annexin V-FITC/PI孵育，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。

5×105細(xì)胞/孔接種于6孔板中培養(yǎng)24 h，Bap（10 nmol/L）處理3.0 h后，離心，棄上清液，細(xì)胞換用新的培養(yǎng)基并加入RSO-1（10、50μmol/L）共培養(yǎng)12 h，采集細(xì)胞總蛋白，參考文獻(xiàn)[16]方法測定相關(guān)蛋白表達(dá)變化情況。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用means±SD表示；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS19.0軟件或GraphPad Prism 5.1版軟件（GraphPad）進(jìn)行進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理；正態(tài)分布樣本的統(tǒng)計(jì)顯著性采用獨(dú)立的Studentt檢驗(yàn)或方差分析進(jìn)行評估；所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，P<0.05在所有分析中被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 人參寡肽抗Bap誘導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷作用

肽類化合物通常在ESI-MS/MS條件下質(zhì)子化，由于在如此低的能量下很難打破側(cè)鏈的化學(xué)鍵，因此碎片大多發(fā)生在酰胺鍵上。因此，當(dāng)碰撞能量小于200 ev時(shí)，b和y離子是主要的碎片離子[17]。將分離得到的人參寡肽用高效液相色譜-電噴霧質(zhì)譜（HPLCESI-MS）對其氨基酸序列進(jìn)行鑒定。以對RSO-1進(jìn)行分子質(zhì)量測定和肽結(jié)構(gòu)表征（圖1）為例，離子片段m/z 546.2298為[M+H]+。離子片段m/z 417.1883為b4離子，m/z 382.1508為y4離子，m/z 324.1308為y3離子，m/z 306.1194為[y3-H2O+H]+離子。離子（m/z 278.1248）為[y3-COOH+H]+離子，m/z 195.0872為b3-b1離子，m/z 110.0705為典型片段[His-COOH+H]+。據(jù)此，推斷該肽的氨基酸序列為EGHGF。其余RSO-2～5氨基酸序列鑒定方式參考RSO-1，氨基酸序列見表1。

圖1 RSO-1結(jié)構(gòu)及質(zhì)譜圖Fig.1 Structure and mass spectrum of RSO-1

表1 RSO-1～5增強(qiáng)A549細(xì)胞抗Bap暴露導(dǎo)致的細(xì)胞損傷作用Table 1 RSO-1～5 enhance the effect of A549 cells against cell damage caused by Bap exposure

為了避免RSO寡肽本身可能存在的細(xì)胞毒性，檢測了RSO寡肽對A 549細(xì)胞活性的影響。此外，RSO-1～5對A 549細(xì)胞的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)采用CCK8方法檢測，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示RSO-1～5在0～1.18 mmol/L（24 h）范圍內(nèi)對A549細(xì)胞活性無影響。

研究發(fā)現(xiàn)，Bap暴露會誘發(fā)氧化應(yīng)激、炎性因子分泌進(jìn)而導(dǎo)致呼吸道上皮細(xì)胞損傷[18]。如表1所示，將正常對照組細(xì)胞活性設(shè)為100%，與正常對照組相比，Bap組細(xì)胞活力降低20.7%，說明Bap暴露使A 549細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷。RSO-1～5處理提高了細(xì)胞活性，如經(jīng)RSO-5使細(xì)胞活力提高了7.90%，而RSO-1組的細(xì)胞活力提高了13.0%（P<0.05），說明RSO-1具有增強(qiáng)A 549細(xì)胞抗Bap暴露誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激、炎性損傷的功能。

2.2 RSO-1增強(qiáng)A549細(xì)胞抗Bap暴露導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡，細(xì)胞凋亡過程中會出現(xiàn)細(xì)胞收縮、核碎裂和染色質(zhì)濃縮等細(xì)胞形態(tài)的特征性變化[19]。流式檢測結(jié)果顯示，與Control組相比，Bap組細(xì)胞總凋亡上升5.60%。而與Bap組相比，RSO-1（10、50μmol/L）治療組細(xì)胞總凋亡率分別降低2.77%和5.28%，說明RSO-1可增強(qiáng)細(xì)胞抗Bap誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡能力。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)為RSO-1抗Bap誘導(dǎo)A 549細(xì)胞損傷的保護(hù)作用提供了直觀的證據(jù)。

2.3 RSO-1減輕Bap暴露誘導(dǎo)的A549細(xì)胞氧化應(yīng)激

自由基過量產(chǎn)生或抗氧化能力下降將導(dǎo)致DNA損傷并誘發(fā)細(xì)胞凋亡[20]。在炎癥細(xì)胞中，Bap可通過誘導(dǎo)活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）產(chǎn)生和線粒體膜電位（ΔΨm）降低，誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)進(jìn)而損傷細(xì)胞[21]。因此，可通過檢測細(xì)胞ROS變化情況以研究RSO-1是否能抑制Bap暴露誘導(dǎo)的細(xì)胞ROS產(chǎn)生，結(jié)果如圖3A所示。將正常對照組ROS含量設(shè)為1，與Control組相比，Bap組的ROS含量上升了2.73倍（P<0.05）。當(dāng)RSO-1治療后，Bap誘導(dǎo)的ROS生成明顯減少。經(jīng)不同濃度的RSO-1處理后，A549細(xì)胞中ROS含量分別下降31.6%（P<0.05）和56.8%（P<0.05）。

線粒體依賴通路在細(xì)胞受到氧化損傷時(shí)起著重要作用[22]。為探討RSO-1抗Bap誘導(dǎo)A549細(xì)胞氧化損傷的機(jī)制，檢測了細(xì)胞線粒體膜電位（ΔΨm）變化情況。如圖3A所示，Bap暴露使ΔΨm降低的A 549細(xì)胞比例從4.05%（對照組）下降到17.6%（P<0.05）。而經(jīng)RSO-1處理后，ΔΨm下降的A549細(xì)胞比例分別減少了6.42%和11.7%。說明，RSO-1減少了細(xì)胞ROS的積累，減少了A549細(xì)胞的ΔΨm下降，說明RSO-1能減輕Bap暴露導(dǎo)致的A 549細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。

線粒體功能障礙會導(dǎo)致細(xì)胞色素c（Cytochrome C,Cyt c）從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)[23]。因此，用Western blotting方法檢測細(xì)胞質(zhì)和線粒體Cyt c水平。結(jié)果表明，與Control組相比，Bap暴露導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)Cyt c含量增加和線粒體Cyt c含量減少（圖3B）。然而，RSO-1處理逆轉(zhuǎn)了Bap暴露導(dǎo)致的細(xì)胞質(zhì)和線粒體Cyt c的變化。

Trx系統(tǒng)在維持細(xì)胞氧化還原穩(wěn)態(tài)中起著至關(guān)重要的作用[24]，鑒于Bap暴露會導(dǎo)致ΔΨm降低，ROS含量升高，進(jìn)一步檢測A549細(xì)胞中Trx和TrxR的變化。如圖3B所示，Bap暴露導(dǎo)致Trx和TrxR的表達(dá)減少，而RSO-1使Trx和TrxR的表達(dá)均增加。

圖2 RSO-1抑制Bap暴露誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡Fig.2 RSO-1 inhibits A549 cell apoptosis induced by Bap exposure

圖3 RSO-1抑制Bap誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)Fig.3 RSO-1 inhibits Bap-induced oxidative stress

2.4 RSO-1對NF-κB和MAPKs信號通路的影響

NF-κB信號通路在許多炎癥性疾病中會被激活，可以調(diào)控TNF-α和IL-1β等炎癥介質(zhì)的表達(dá)[25]。研究表明，巨噬細(xì)胞通過有絲分裂原激活蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPKs）和NF-κB信號途徑上調(diào)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的表達(dá)，從而產(chǎn)生一氧化氮（Nitric Oxide, NO）[26]。因此，檢測了RSO-1是否通過MAPK和NF-κB信號途徑調(diào)控A 549細(xì)胞以抗Bap誘導(dǎo)的損傷。如圖4A所示，Bap暴露激活NFκB信號途徑相關(guān)蛋白的表達(dá)。而與Bap暴露不同，RSO-1作用后A 549細(xì)胞NF-κB信號通路的蛋白表達(dá)被抑制。如圖4A所示，50μmol/L RSO-1作用后顯著降低了A549細(xì)胞IκBα、IKKα及p65的磷酸化。

MAPKs與NF-κB信號通路類似，與Bap誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥介質(zhì)調(diào)節(jié)有關(guān)。為進(jìn)一步探討RSO-1抗Bap暴露誘導(dǎo)的炎性損傷機(jī)制，檢測了JNK和p38在Bap暴露及RSO-1干預(yù)后的表達(dá)變化情況。如圖4B所示，Bap使JNK和p38磷酸化表達(dá)增加并抑制了JNK和p38的表達(dá)，而RSO-1下調(diào)了JNK和p38的磷酸化，使JNK和p38的表達(dá)上升。推測RSO-1的保護(hù)作用是通過調(diào)節(jié)p38和JNK-MAPK，抑制NF-κB的活化發(fā)揮作用的。

圖4 RSO-1抑制Bap暴露誘導(dǎo)的NF-κB和MAPKs信號通路激活Fig.4 RSO-1 inhibits the activation of NF-κB and MAPKs signaling pathways induced by Bap exposure

2.5 RSO-1抑制Bap暴露誘導(dǎo)的AHR活化及AP-1因子的表達(dá)

激活蛋白-1（activator protein-1, AP-1）是調(diào)節(jié)細(xì)胞生存和死亡途徑關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子。AP-1是一種二聚體復(fù)合物，由原癌基因編碼的Jun家族和Fos家族蛋白質(zhì)組成。AP-1是由堿性亮氨酸拉鏈（basic leucine-zipper, bZIP）結(jié)構(gòu)的Jun蛋白質(zhì)（c-Jun、v-Jun、JunB和JunD）、Fos蛋白質(zhì)（c-Fos、v-Fos、FosB、Fra1和Fra2）、激活轉(zhuǎn)錄因子（activating transcription factor，ATF，包括ATF2、ATF3/LRF1、B-ATF、JDP1和JDP2）和肌肉腱膜纖維肉瘤（musculoaponeurotic fibrosarcoma，MAF，包括C-Maf、Maf B、Maf A、Maf G/F/K和Nrl）家族形成高度保守的同源或異源二聚體，可激活下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。作為啟動基因轉(zhuǎn)錄的分子開關(guān)，通過細(xì)胞應(yīng)激刺激等各種條件調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，參與增殖、凋亡、轉(zhuǎn)化和炎癥等多種細(xì)胞過程[27]。

因此，檢測了RSO-1對A 549細(xì)胞AP-1因子表達(dá)的影響，結(jié)果如圖5A所示。與Control組相比，Bap暴露使c-Jun、Jun-B、c-Fos和Fra-1表達(dá)增加298%、351%、252%和287%，而RSO-1處理降低了Bap暴露誘導(dǎo)的c-Jun、Jun-B、c-Fos和Fra-1表達(dá)。經(jīng)50μmol/L RSO-1干預(yù)后，Bap暴露誘導(dǎo)的c-Jun、Jun-B、c-Fos和Fra-1表達(dá)分別下調(diào)46.2%、33.9%、49.4%和48.1%。據(jù)此推測，RSO-1抗Bap暴露誘導(dǎo)的炎性損傷作用可能是通過調(diào)控AP-1因子的表達(dá)發(fā)揮作用的。

圖5 RSO-1抑制Bap暴露誘導(dǎo)的AHR通路激活和AP-1因子表達(dá)Fig.5 RSO-1 inhibits AHR pathway activation and AP-1 factor expression induced by Bap exposure

AHR的激活在哮喘和炎癥性疾病的重要誘發(fā)因素[28]。為探討RSO-1對Bap暴露誘導(dǎo)A549細(xì)胞AHR活化的抑制作用，本研究檢測了AHR及其下游CYP1A 1蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果如圖5B所示，Bap暴露使AHR表達(dá)顯著（P<0.05）增加；同樣，CYP1A1的表達(dá)也顯著增加。本研究表明RSO-1干預(yù)抑制AHR信號通路的激活。

3 討論與結(jié)論

研究顯示環(huán)境污染物苯并芘與哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病有著密切的關(guān)系[28]。人參作為傳統(tǒng)中藥已經(jīng)使用歷史已達(dá)上千年，本課題研究了人參中含有的活性寡肽抗Bap暴露導(dǎo)致的人肺上皮細(xì)胞炎性損傷的活性及機(jī)制。

炎癥反應(yīng)涉及多條信號通路，其中NF-κB是炎癥反應(yīng)的中樞分子，是抗炎藥物的重要靶點(diǎn)[29]。研究發(fā)現(xiàn)，RSO-1可抑制暴露Bap誘導(dǎo)的IκBα、IKKα和p65磷酸化。AP-1復(fù)合物在調(diào)節(jié)炎癥和炎癥介質(zhì)釋放中發(fā)揮著重要作用。Bap誘導(dǎo)了c-Jun、Jun-B、Fra-1和c-Fos的表達(dá)，而RSO-1抑制Bap暴露誘導(dǎo)的c-Jun、Jun-B、Fra-1和c-Fos的表達(dá)。據(jù)此推測AP-1可能是RSO-1的重要靶點(diǎn)。AHR是一種受體和轉(zhuǎn)錄因子，結(jié)果表明Bap暴露誘導(dǎo)AHR信號的激活，而經(jīng)RSO-1干預(yù)后，Bap誘導(dǎo)AHR和CYP1A1在A 549中的表達(dá)顯著降低，提示AP-1和AHR可能在RSO-1的抗炎作用中起重要作用。推測RSO-1的抗炎作用是通過調(diào)節(jié)AP-1、NF-κB和AHR通路，抑制Bap誘發(fā)的氧化應(yīng)激反應(yīng)而發(fā)揮作用的。本研究的人參寡肽抗Bap誘發(fā)的肺上皮細(xì)胞炎性損傷的活性僅為細(xì)胞層面的體外實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)周期短、費(fèi)用低，可以一次性檢測多種寡肽的抗炎活性，后續(xù)實(shí)驗(yàn)可構(gòu)建動物模型，針對一種或多種活性較好的寡肽進(jìn)行深入研究。本文為人參功能性產(chǎn)品的進(jìn)一步開發(fā)和抗炎新藥的開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。