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    Gsk-3β、CD82和Axin1在乳房和乳房外Paget病中的表達(dá)

    2021-09-02 07:53:56魏麗萍周文文王皓敏張士發(fā)
    中國麻風(fēng)皮膚病雜志 2021年10期
    關(guān)鍵詞:免疫組化乳房染色

    魏麗萍 周文文 王皓敏 張士發(fā)

    1錦州醫(yī)科大學(xué)北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院研究生培養(yǎng)基地,遼寧沈陽,110016;2大連醫(yī)科大學(xué)北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院研究生培養(yǎng)基地,遼寧沈陽,110016;3東北國際醫(yī)院皮膚科,遼寧沈陽,110623

    Paget病(Paget’s disease)又稱為濕疹樣癌(eczematoid carcinoma),是一種少見的皮損表現(xiàn)為濕疹樣外觀的低度惡性表皮內(nèi)腺癌,其組織病理特點(diǎn)是在表皮內(nèi)發(fā)現(xiàn)Paget細(xì)胞,臨床上可分為乳房Paget病(mammary Paget’s disease,MPD)和乳房外Paget病(extramammary Paget’s disease,EMPD)。Gsk-3β可以調(diào)節(jié)多種類型腫瘤細(xì)胞的代謝、增殖與凋亡,對腫瘤的發(fā)生具有雙重調(diào)節(jié)作用。CD82具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。Axin1發(fā)揮抑制腫瘤的功能。目前Gsk-3β、CD82和Axin1已被證明參與乳腺癌、惡性黑素細(xì)胞瘤、皮膚鱗癌等多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展,但其在MPD和EMPD中的作用國內(nèi)外尚未有報道,為探究其在MPD和EMPD中的作用,本研究通過免疫組化方法檢測Gsk-3β、CD82和Axin1在MPD和EMPD中的表達(dá)情況,分析其相關(guān)性,從而探討它們在MPD和EMPD發(fā)生、發(fā)展中的作用。

    1 材料與方法

    1.1 臨床資料 收集北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院皮膚科2007年4月至2019年8月病理診斷為MPD和EMPD患者的蠟塊和病歷資料各20例,并且患者確診前均未行放療或化療治療。另收集本科室就診的良性皮膚病患者的正常皮膚組織蠟塊10例為對照組。

    1.2 主要試劑 兔抗人Gsk-3β單抗(bs-0028R)、兔抗人CD82單抗(bs-1470R)、兔抗人Axin1單抗(bs-2439R)、免疫組化染色試劑盒(SP-0023)、DAB 試劑盒(CO2-04001)均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

    1.3 免疫組化染色 石蠟塊切片(5 μm厚)、烤片、脫蠟、水化,高壓修復(fù)抗原(100×檸檬酸鈉修復(fù)液與蒸餾水按照1∶100稀釋,高壓鍋上汽后修復(fù)4 min),按免疫組化染色試劑盒操作說明書進(jìn)行染色(PAP筆在組織片周圍2~3 mm畫一閉合圓圈,滴加3%H2O2,37℃孵育20 min,PBS液洗5 min×3次,滴加試劑A,37℃孵育20 min,傾去,勿洗,滴加1∶500稀釋一抗,4℃過夜,37℃復(fù)溫1 h,PBS液洗5 min×3次,滴加試劑B,37℃孵育20 min,PBS 液洗5 min×3次,滴加試劑C,37℃孵育20 min,PBS 液洗5 min×3次),DAB顯色,蘇木素復(fù)染,脫水、透明、中性樹膠封片。PBS液作陰性對照。

    1.4 結(jié)果判定 由我科兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的皮膚病理醫(yī)師采用雙盲法鏡檢閱片,每張切片在顯微鏡下隨機(jī)選取5個視野,放大400倍觀察評估。在細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜呈黃色或棕色顆粒狀沉積視為陽性染色。染色強(qiáng)度評分:無染色計(jì)0分,弱染色(淡黃色)計(jì)1分,中度染色(棕黃色)計(jì)2分,強(qiáng)染色(棕褐色)計(jì)3分。陽性細(xì)胞百分比評分:<5%計(jì)0分,5%~25%計(jì)1分,26%~50%計(jì)2分,51%~75%計(jì)3分,>75%計(jì)4分。免疫組化評分=陽性細(xì)胞百分比×染色強(qiáng)度積分。0~4分為陰性或低表達(dá),5~8分為中度表達(dá),9~12分為高表達(dá)[1]。

    2 結(jié)果

    2.1 Gsk-3β在MPD、EMPD及正常皮膚組織中的表達(dá) 三組間的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),但MPD與EMPD相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    2.2 CD82在MPD、EMPD及正常皮膚組織中的表達(dá) 三組間的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),且MPD與EMPD相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.3 Axin1在MPD、EMPD及正常皮膚組織中的表達(dá) 三組間的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),但MPD與EMPD相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1和圖1。

    表1 Gsk-3β、CD82和Axin1在MPD、EMPD及正常皮膚組織中的表達(dá)

    2.4 Gsk-3β、CD82和Axin1在MPD中表達(dá)的相關(guān)性 Gsk-3β和CD82在MPD中的表達(dá)無相關(guān)性(r=-0.291,P=0.212),Gsk-3β和Axin1在MPD中的表達(dá)無相關(guān)性(r=0.236,P=0.316)。CD82和Axin1在MPD中的表達(dá)無相關(guān)性(r=0.039,P=0.869)。

    2.5 Gsk-3β、CD82和Axin1在EMPD中表達(dá)的相關(guān)性 Gsk-3β和CD82在EMPD中的表達(dá)無相關(guān)性(r=0.261,P=0.266),Gsk-3β和Axin1在EMPD中的表達(dá)無相關(guān)性(r=0.392,P=0.088)。CD82和Axin1在EMPD中的表達(dá)無相關(guān)性(r=0.362,P=0.117)。

    1a: Gsk-3β在MPD中低表達(dá);1b: Gsk-3β在EMPD中低表達(dá);1c: Gsk-3β在正常皮膚組織中中度表達(dá);1d:CD82在MPD中中度表達(dá);1e:CD82在EMPD中低表達(dá);1f:CD82在正常皮膚組織中高表達(dá);1g:Axin1在MPD中低表達(dá);1h:Axin1在EMPD中低表達(dá);1i:Axin1在正常皮膚組織中中度表達(dá);1a~1i均主要表達(dá)于細(xì)胞胞質(zhì)、胞膜

    3 討論

    Gsk-3β是一種多功能的絲氨酸/蘇氨酸激酶,通過調(diào)控Wnt/β-catenin、PI3K/PTEN/Akt/mTOR、Ras/Raf/MEK/ERK、Hedgehog、Notch、NF-κB等通路,參與細(xì)胞代謝、增殖、分化、凋亡等多種細(xì)胞過程[2]。有報道在近端胃癌患者中,Gsk-3β陽性表達(dá)明顯低于胃正常組織,且Gsk-3β陽性表達(dá)的降低與胃癌的分期、分化、浸潤及淋巴轉(zhuǎn)移呈明顯負(fù)相關(guān),其在近端胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤及淋巴轉(zhuǎn)移等方面起到重要的抑制作用[3]。在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中,Gsk-3β過表達(dá)可抑制Wnt/β-catenin和mTOR/p70S6K1信號通路,使HIF-1和VEGF低表達(dá),抑制了腫瘤的血管生成及生長,從而抑制了神經(jīng)膠質(zhì)瘤的進(jìn)展[4]。在鼻咽癌中,Gsk-3β失活可增加EZH2蛋白的穩(wěn)定,導(dǎo)致EZH2過度表達(dá),促進(jìn)腫瘤遷移和增強(qiáng)其侵襲能力,從而促進(jìn)鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展,可能是鼻咽癌治療的未來潛在靶標(biāo)[5]。本研究首次發(fā)現(xiàn)Gsk-3β在MPD、EMPD中的表達(dá)顯著低于正常皮膚組織,三者表達(dá)強(qiáng)度具有顯著性差異,且MPD與EMPD相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),Gsk-3β在MPD、EMPD中的低表達(dá),與上述相關(guān)研究結(jié)果一致[3-5],提示Gsk-3β可能通過同種信號通路對乳房和乳房外Paget病的發(fā)生及發(fā)展起抑制作用。Gsk-3β在上述癌癥中的低表達(dá)對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展起促進(jìn)作用,因此Gsk-3β可能為腫瘤的診斷、進(jìn)展及治療提供新的作用靶點(diǎn)和思路。

    CD82是KAI1編碼的能抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的細(xì)胞膜糖蛋白,可與其他四跨膜蛋白、非四跨膜蛋白形成四跨膜蛋白網(wǎng)絡(luò)發(fā)揮生理功能,影響腫瘤細(xì)胞的增殖、黏附、運(yùn)動和侵襲,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和衰老[6]。研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌患者中,KAI1/CD82陽性表達(dá)顯著低于乳腺正常組織,且CD82表達(dá)強(qiáng)度與乳腺癌分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān),其在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等方面有重要的抑制作用[7]。在子宮內(nèi)膜癌患者中,CD82陽性表達(dá)顯著低于正常子宮內(nèi)膜組織,且表達(dá)強(qiáng)度與子宮內(nèi)膜癌的分期、分化、浸潤程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯負(fù)相關(guān),CD82的低表達(dá)促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移,其表達(dá)異常可協(xié)助判斷腫瘤轉(zhuǎn)移、評估預(yù)后和指導(dǎo)治療[8]。本研究首次發(fā)現(xiàn)CD82在EMPD中的表達(dá)低于MPD,且兩者顯著低于正常皮膚組織,三組間的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,MPD與EMPD相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),CD82在MPD和EMPD中的低表達(dá),與已有研究結(jié)果一致[7,8],提示CD82可能通過不同信號通路對乳房和乳房外Paget病的發(fā)病過程起抑制作用。CD82的低表達(dá)或下調(diào)與許多惡性腫瘤的不良預(yù)后密切相關(guān),因此CD82可作為預(yù)測腫瘤患者疾病進(jìn)展及預(yù)后的參考。

    Axin1是一種包含多結(jié)構(gòu)域的支架蛋白,可以與多種不同的蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)合,參與Wnt、p53、TGF-β、PI3K/AKT/mTOR和JNK/SAPK等多種信號通路,從而抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,是一種腫瘤抑制因子[9]。據(jù)報道在肝癌組織中,Axin1低表達(dá)與miR-650的高表達(dá)呈負(fù)相關(guān),Axin1的過表達(dá)顯著抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和EMT,而用miR650處理后則消除了Axin1對腫瘤的抑制能力,因此Axin1和miR-650可以協(xié)助腫瘤的早期診斷、治療和預(yù)后[10]。在肺癌中,野生型Zbed3與Axin結(jié)合,可通過抑制Axin/TPC/GSK-3β復(fù)合物的降解來上調(diào)β-catenin表達(dá)和Wnt信號活性來促進(jìn)肺癌增殖和侵襲,而在缺少Axin結(jié)合位點(diǎn)的Zbed3突變體中卻未能增強(qiáng)β-catenin的表達(dá),其過程依賴Axin[11]。本研究首次發(fā)現(xiàn),Axin1在MPD、EMPD中的表達(dá)顯著低于正常皮膚組織,三者表達(dá)強(qiáng)度具有顯著性差異,且MPD與EMPD相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),Axin1在MPD、EMPD中的低表達(dá),與現(xiàn)有研究結(jié)果一致[10,11],提示Axin1可能通過同種信號通路對乳房外和乳房Paget病的發(fā)病過程發(fā)揮抑制作用。Axin1是腫瘤發(fā)生和進(jìn)展的抑制因子,穩(wěn)定或上調(diào)Axin1的表達(dá)可抑制腫瘤的增殖和侵襲,可成為腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)。

    既往未見Gsk-3β、CD82和Axin1在MPD和EMPD中表達(dá)相關(guān)性的研究。本研究發(fā)現(xiàn),Gsk-3β、CD82和Axin1在MPD和EMPD中的表達(dá)并無協(xié)同作用,雖然Axin1和Gsk-3β均可通過經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號通路影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[3,9],而CD82可以減少β-catenin的磷酸化和核內(nèi)聚集,對Wnt/β-catenin信號通路有抑制作用[6],但Gsk-3β還可通過Ras/Raf/MEK/ERK、Hedgehog、Notch、NF-κB等信號通路對腫瘤產(chǎn)生影響,Axin1也可通過與Gsk-3β不同的信號通路發(fā)揮抑制腫瘤的作用,如p53、TGF-β、PI3K/AKT/mTOR和JNK/SAPK等信號通路,至于它們的表達(dá)調(diào)控是否有相互作用及其機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

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