基于系統(tǒng)藥理學(xué)方法探究荊花胃康膠丸干預(yù)幽門螺桿菌所致炎癥反應(yīng)機(jī)制

洪盛威， 楊 堯， 徐丁林， 曹千千， 印慧琳， 夏澤遠(yuǎn)， 丁 康*

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué) 附屬南京中醫(yī)院，江蘇 南京 210029;2.北京大學(xué)第一醫(yī)院，北京 100034)

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)為革蘭氏陰性微需氧菌，是消化系統(tǒng)的主要致病菌之一。目前,其病因和致病機(jī)制尚未完全闡明，可能的影響因素主要包括社會(huì)心理因素、遺傳、感染、食物、藥物等。致病機(jī)制可能與免疫系統(tǒng)異常、炎癥反應(yīng)激活有關(guān)，其中慢性炎癥被認(rèn)為是Hp感染所致胃腸道疾病過程中的關(guān)鍵因素，Hp和其他細(xì)菌通過激活相關(guān)信號(hào)通路，導(dǎo)致炎癥相關(guān)靶點(diǎn)的高表達(dá)與促炎細(xì)胞因子的釋放。Hp感染可在胃的惡劣條件下持續(xù)數(shù)十年。這是通過獨(dú)特的進(jìn)化適應(yīng)來實(shí)現(xiàn)的，包括使用多種外膜蛋白來粘附胃上皮上的聚糖部分等。

荊花胃康膠丸(JinghuaWeikang capsule，JWC)是國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的用于胃潰瘍、十二指腸潰瘍、慢性胃炎和抑制Hp引起的疾病的專利藥(Z10970067)，由土荊芥和水團(tuán)花中提取的揮發(fā)油按一定比例組成，臨床使用效果良好。既往研究通過臨床療效或動(dòng)物模型方法探討了JWC對(duì)Hp誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的保護(hù)機(jī)制，但其療效的物質(zhì)基礎(chǔ)和分子機(jī)制尚不明晰，單目標(biāo)或單成分的常規(guī)方法難以解決這一復(fù)雜問題。

系統(tǒng)藥理學(xué)方法憑借其整體調(diào)控，多層次、多組分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，為多參數(shù)代謝應(yīng)答提供了工具。該方法由網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、虛擬篩選、生物信息學(xué)等相關(guān)工具組成，近年來在中醫(yī)藥研究中備受青睞。血型抗原結(jié)合粘附素(Blood group antigen binding adhesin，BabA)是第1個(gè)被發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)的Hp粘附素，它包含兩個(gè)域：一個(gè)N端胞外宿主結(jié)合域和一個(gè)C端跨膜外域(圖1)。BabA通過結(jié)合在胃上皮細(xì)胞和粘蛋白上發(fā)現(xiàn)的巖藻糖基化組織血型抗原來介導(dǎo)Hp附著。抑制粘附素即開發(fā)粘附素的抑制劑可阻礙細(xì)菌粘附，基于BabA的空間構(gòu)象尋找抑制Hp粘附的天然物質(zhì)具有重要意義。

圖1 血型抗原結(jié)合粘附素(BabA)的三維結(jié)構(gòu)

本研究旨在以全構(gòu)建的JWC活性成分和巨型分子靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)為基礎(chǔ)，采用系統(tǒng)藥理學(xué)方法，研究JWC對(duì)Hp誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的干預(yù)機(jī)制，并將篩選所得先導(dǎo)化合物與BabA靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)接，從分子水平探討JWC對(duì)Hp粘附的抑制機(jī)制。這種新方法將增強(qiáng)對(duì)JWC干預(yù)Hp所致炎癥反應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)與分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)，并為JWC的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 JWC中活性成分?jǐn)?shù)據(jù)的采集

JWC是由土荊芥(黎科黎屬植物，

Chenopodium

Ambrosioides

L.)及水團(tuán)花(茜草科水楊梅屬植物，

Adina

rubella

Hance)中提取的揮發(fā)油按一定比例組成，目前各大中藥成分?jǐn)?shù)據(jù)庫并未收錄其化學(xué)成分。研究表明，土荊芥、水團(tuán)花揮發(fā)油中主要為萜類成分，故結(jié)合現(xiàn)有文獻(xiàn)資料進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘、整理，收集2味中藥中具有化學(xué)結(jié)構(gòu)的萜類成分。利用Chem Office(2016)軟件繪制JWC所含化合物的分子式，保存為SDF(.sdf)格式文件。采用Schr?dinger(2018)平臺(tái)的QikProp模塊預(yù)測(cè)JWC所含化合物的藥代學(xué)參數(shù)，包含QPPCaco，QPlogKhsa，OB等3個(gè)方面，篩選掉不符合ADME標(biāo)準(zhǔn)的化合物。

1.2 陽性藥與候選活性分子的主成分分析

為探究JWC候選活性分子的類藥性，從Drug Bank數(shù)據(jù)庫中收集整理了FDA已批準(zhǔn)上市的Hp根除三聯(lián)療法藥效分子。利用Schr?dinger(2018)平臺(tái)中Canva 3.9模塊，進(jìn)一步計(jì)算陽性藥與TWC候選活性分子的270個(gè)重要描述符，以此反映小分子的理化性質(zhì)及藥代學(xué)特征。采用R語言factoextra和FactoMineR包進(jìn)行主成分分析(principal component analysis，PCA)，研究土荊芥、水團(tuán)花所含候選活性化合物的類藥性。PCA是簡化分子描述符的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，它能將陽性藥與候選活性分子映射到平面象限中，每一個(gè)坐標(biāo)點(diǎn)表示一個(gè)化合物，坐標(biāo)點(diǎn)之間的間距反映分子的相似性，從而直觀表現(xiàn)JWC中的候選活性分子與陽性藥的近似度。

1.3 陽性藥抗Hp感染靶點(diǎn)獲得與分子對(duì)接驗(yàn)證

通過PharmMapper Server(Http://59.78.96.61/pharmmapper/)，Swiss Target Prediction (Http://www.swisstargetprediction.ch/)平臺(tái)對(duì)三聯(lián)療法治療Hp感染相關(guān)疾病的潛在靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)。通過OMIM(Https://omim.org/)、Genecards(Https://www.genecards.org/)和DisGeNET(Https://www.disgenet.org/)3大數(shù)據(jù)庫收集Hp感染相關(guān)疾病靶點(diǎn)。并將陽性藥物作用靶點(diǎn)與Hp感染相關(guān)靶點(diǎn)取交集，最終獲得三聯(lián)療法對(duì)Hp感染的生物治療靶點(diǎn)，并從PDB數(shù)據(jù)庫中獲取相應(yīng)靶點(diǎn)蛋白晶體結(jié)構(gòu)文件用于下一步實(shí)驗(yàn)。

為了探究JWC活性化合物與Hp感染相關(guān)靶點(diǎn)的關(guān)系，選用Schr?dinger(2018)進(jìn)行JWC藥效分子基于三聯(lián)療法抗Hp感染靶點(diǎn)的計(jì)算機(jī)輔助虛擬篩選。首先，將靶點(diǎn)結(jié)構(gòu)導(dǎo)入Protein Preparation Wizard模塊進(jìn)行蛋白結(jié)構(gòu)優(yōu)化，包括刪除所有的結(jié)晶水分子，糾正帶有缺失原子的側(cè)鏈，添加氫原子，并使用OPLS3力場(chǎng)分配質(zhì)子化態(tài)和部分電荷。將晶體結(jié)構(gòu)能量最小化，直到非氫原子的均方根偏差(RMSD)達(dá)到0.3 ?。之后，采用LigPrep模塊優(yōu)化34個(gè)候選活性分子，在pH 6.8～7.2之間生成小分子的電離和互變異構(gòu)狀態(tài)。使用OPLS3力場(chǎng)使小分子能量最小化，最大立體異構(gòu)體數(shù)目設(shè)置為32。最后，采用Receptor Grid Generation 模塊生成用于對(duì)接的晶格文件。使用Glide模塊進(jìn)行分子對(duì)接，方法精度采用extra precision (XP)。記錄對(duì)接評(píng)分，借助R語言的pheatmap包構(gòu)建分子對(duì)接結(jié)果的聚類分析熱圖，進(jìn)行對(duì)接評(píng)分可視化處理。本研究運(yùn)行系統(tǒng)為Windows 10，并搭載GTX 1050 Ti顯卡，顯存8G。

1.4 “藥效分子-疾病靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將篩選獲得的JWC藥效分子連同其各自對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)上載至Cytoscape 3.7.1軟件，構(gòu)建“藥效分子-疾病靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，從整體水平上表現(xiàn)JWC治療Hp感染的作用機(jī)制。借助插件Network Analyzer對(duì)網(wǎng)絡(luò)圖的拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)進(jìn)行分析，涉及度中心度(Degree Centrality，DC)、接近中心度(Closeness Centrality,CC)、中介中心度(Betweenness Centrality,BC)等多項(xiàng)參數(shù)。結(jié)合研究特點(diǎn)，將關(guān)鍵目標(biāo)評(píng)價(jià)指標(biāo)定義為“目標(biāo)重要性(TI)”，可以根據(jù)以下公式計(jì)算。其中，DCi、CCi和BCi分別表示目標(biāo)i的度中心度、接近中心度和中介中心度。DCmax、CCmax和BCmax分別是模塊各指標(biāo)的度中心度、接近中心度和中介中心度之間的最大值。更大的TI值表明節(jié)點(diǎn)在拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)中更重要。

1.5 KEGG通路富集分析

借助Cytoscape 3.7.1軟件中的CluoGO插件，把網(wǎng)絡(luò)圖中的關(guān)鍵靶點(diǎn)映射到生物學(xué)通路中，在通路水平上闡釋關(guān)鍵靶點(diǎn)與JWC抗Hp作用機(jī)制的潛在聯(lián)系。除物種類別設(shè)置為人源性選項(xiàng)之外，其余參數(shù)選項(xiàng)值均為默認(rèn)值。借助Omicshare云平臺(tái)(Https://www.omicshare.com/)，進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化處理。

1.6 水團(tuán)花化合物的分子對(duì)接分析

為證實(shí)水團(tuán)花所含化合物對(duì)黏附素BabA的競爭性抑制作用，將Lewisb結(jié)合在BabA中的位置設(shè)置為待對(duì)接分子的結(jié)合位點(diǎn)，探究水團(tuán)花所含化合物與BabA的結(jié)合效應(yīng)。將BabA(PDB ID:4ZH7)靶點(diǎn)結(jié)構(gòu)導(dǎo)入Protein Preparation Wizard模塊，對(duì)接步驟參照1.3節(jié)，并構(gòu)建活性化合物與BabA的相互作用圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 活性成分的ADME篩選與主成分分析

通過對(duì)JWC中活性成分的數(shù)據(jù)挖掘，從2味中藥土荊芥、水團(tuán)花中分別得到23、37個(gè)萜類化合物。以QPPCaco≥25，QPlogKhsa介于±1.5之間，OB≥25%作為篩選標(biāo)準(zhǔn)，最終獲得土荊芥成分23個(gè)，水團(tuán)花成分11個(gè)，作為JWC的候選活性化合物。收集FDA批準(zhǔn)的Hp根除三聯(lián)療法陽性藥(表1)，之后34個(gè)活性成分和12個(gè)陽性藥物被裝載到Schr?dinger(2018)平臺(tái)中Canvas模塊，計(jì)算出大約270個(gè)分子描述符，涉及物理化學(xué)、拓?fù)鋵W(xué)等多個(gè)方面的信息，并進(jìn)行PCA可視化分析，比較JWC候選活性分子與Hp根除三聯(lián)療法陽性藥的空間分布差異(圖2)。X和Y軸分別代表兩個(gè)主成分，包含90%的化學(xué)描述符信息。結(jié)果表明土荊芥分子集合與三聯(lián)療法陽性藥在空間位置的重疊性較高，而水團(tuán)花分子集合與陽性藥差異則較大，提示土荊芥分子較水團(tuán)花具有更好的類藥性。

表1 FDA批準(zhǔn)的12種治療Hp的藥物

圖2 主成分分析的Dim2-Dim1圖

2.2 藥效成分潛在靶點(diǎn)預(yù)測(cè)與分子對(duì)接驗(yàn)證

通過PharmMapper、DrugBank和SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫共鑒定950個(gè)陽性藥反向匹配靶點(diǎn)，如Tumor necrosis factor(TNF，P01375)，Mitogen-activated protein kinase 14(MAPK14，Q16539)，Mitogen-activated protein kinase 8(JNK1，P45983)等。另外，根據(jù)OMIM、Genecards和DisGeNET數(shù)據(jù)庫獲得了1 914個(gè)Hp感染相關(guān)基因。將陽性藥反向匹配所得靶點(diǎn)與Hp感染相關(guān)靶點(diǎn)取交集，獲得映射靶點(diǎn)251個(gè)，取基于相關(guān)性評(píng)分大于30的靶點(diǎn)作為三聯(lián)療法對(duì)Hp感染的生物治療靶點(diǎn)，共計(jì)22個(gè)。

在確定蛋白靶點(diǎn)的結(jié)合位點(diǎn)后，首先選擇每個(gè)靶點(diǎn)與其自帶陽性配體進(jìn)行對(duì)接，以驗(yàn)證對(duì)接篩選的科學(xué)性。完成全部的對(duì)接模擬后，記錄JWC中34個(gè)候選活性分子與22個(gè)疾病靶點(diǎn)互作的對(duì)接打分。由于版面有限，本研究省略了詳細(xì)的對(duì)接結(jié)果，僅提供了34個(gè)候選活性分子與22個(gè)疾病靶點(diǎn)的聚類分析熱圖(圖3)。對(duì)接打分顯示在色塊中央，得分絕對(duì)值越高，色塊顏色越深，代表分子與靶點(diǎn)的結(jié)合效應(yīng)越好。絕大多數(shù)候選活性分子與疾病靶點(diǎn)形成較好相互作用，這些靶點(diǎn)可能是JWC治療Hp感染的關(guān)鍵靶點(diǎn)。Hp感染引起的各類胃腸道疾病并非單個(gè)靶點(diǎn)表達(dá)的引起，而是復(fù)雜過程作用的結(jié)果，因此本研究的模擬結(jié)果將有助于解釋JWC對(duì)Hp感染有良好臨床療效的原因。

圖3 分子對(duì)接的聚類分析熱圖

2.3 “藥效分子-疾病靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

選取2.2節(jié)對(duì)接結(jié)果中具有較高的結(jié)合能(Docking score<-6 kcal/mol)的JWC候選活性成分與靶點(diǎn)，借助Cytoscape軟件構(gòu)建“藥效分子-疾病靶點(diǎn)”拓?fù)鋵W(xué)網(wǎng)絡(luò)，并計(jì)算網(wǎng)絡(luò)模型的拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)，獲得網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)的BC，DC及CC，確定各節(jié)點(diǎn)的TI值(表 2)。節(jié)點(diǎn)的面積、顏色與TI值呈正相關(guān)，節(jié)點(diǎn)的面積越大，顏色越深，表明此靶點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)關(guān)系中越重要；節(jié)點(diǎn)間連線的粗細(xì)與Docking score比例固定，連線越粗則表示靶點(diǎn)與小分子結(jié)合能越高(圖 4)。模型顯示JWC所含13個(gè)藥效分子與8個(gè)靶點(diǎn)之間存在著復(fù)雜關(guān)系，這個(gè)復(fù)雜關(guān)系網(wǎng)絡(luò)同樣印證了JWC通過“多分子、多靶點(diǎn)”來發(fā)揮其效用的論斷。將8個(gè)疾病靶點(diǎn)定義為JWC治療Hp核心靶點(diǎn)，分別為TAK1、TAB1、RELB、MAPK14、MAPK11、JNK1、IKKB和ERK1，主要與炎癥過程有關(guān)。分析結(jié)果篩選出13種關(guān)鍵藥效分子主要來自于土荊芥，均有不同程度的抗炎、殺菌作用，依次為19. Bornylene；20. P-Cymene；21. Alpha-Terpinene；22. Menthol；24. Trans-pinocarveol；27. Carvacrol；28. 3-Carene；29. Benzene,(2-Methyl-1-propenyl)；31. Diosphenol；33. Pinocamphone；34. Thymol；49. Quinovic acid-3β-O-(3',4'-O-isopropylidene)-β-D-fucopyranoside；70. Pyrocincholic acid 3β O-β-D-fucopyranoside。

表2 8個(gè)主要靶點(diǎn)的節(jié)點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)特性

圖4 JWC治療HP的“藥效分子-疾病靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)

2.4 KEGG通路富集分析

基于2.2節(jié)獲得的22個(gè)三聯(lián)療法對(duì)Hp感染的生物治療靶點(diǎn)，本節(jié)使用Cytoscape 3.4.0的插件ClueGO進(jìn)行KEGG通路富集分析，映射KEGG通路28條(

P

<0.01)，包括NF-kappa B信號(hào)通路(NF-kappa B signaling pathway)，MAPK信號(hào)通路(MAPK signaling pathway)，癌癥相關(guān)通路(Pathways in cancer)，TNF信號(hào)通路(TNF signaling pathway)，HIF-1信號(hào)通路(HIF-1 signaling pathway)等(圖5)。將28條信號(hào)通路按照富集靶點(diǎn)數(shù)進(jìn)行排序，其中NF-kappa B信號(hào)通路和MAPK信號(hào)通路富集靶點(diǎn)數(shù)最多，分別為14、12個(gè)，推斷JWC藥效分子可能主要通過作用于NF-kB/MAPK信號(hào)合成或轉(zhuǎn)運(yùn)通路干預(yù)Hp所致炎癥反應(yīng)。

圖5 22個(gè)主要疾病靶點(diǎn)的KEGG通路富集分析

2.5 水團(tuán)花成分與BabA的分子對(duì)接

對(duì)接結(jié)果顯示，化合物70，71，41與BabA有較高的預(yù)測(cè)結(jié)合自由能(Docking score<-6 kcal/mol)。相互作用分析發(fā)現(xiàn)，化合物70與BabA的氨基酸C189，N194，N195，Q207和T246形成氫鍵相互作用(圖6)；化合物71與BabA的氨基酸C189，G191，N194，N195，Q207和T246之間存在氫鍵相互作用(圖7)；化合物41與BabA的氨基酸G191存在兩個(gè)氫鍵相互作用，與K208和T246分別形成一個(gè)氫鍵相互作用(圖8)。其中氨基酸C189，N194，T246，G191為70，71，41號(hào)化合物與Lewisb作用于BabA的共同氨基酸。

圖6 70號(hào)化合物和BabA的對(duì)接示結(jié)果

圖7 71號(hào)化合物和BabA的對(duì)接示結(jié)果

圖8 41號(hào)化合物和BabA的對(duì)接示結(jié)果

3 結(jié)論與討論

JWC由土荊芥和水團(tuán)花組成，其主要作用是理氣散寒、清熱化瘀、和胃止痛，臨床用于治療胃、十二指腸潰瘍，見于寒熱夾雜證型。由于JWC成藥主要為其原料藥提取揮發(fā)油中的萜類成分，故本研究基于系統(tǒng)藥理學(xué)對(duì)JWC萜類成分進(jìn)行了虛擬篩選，并對(duì)其干預(yù)炎癥反應(yīng)的藥理機(jī)制進(jìn)行了初步探討。

萜類廣泛分布于植物、昆蟲、真菌和海洋生物中，因表現(xiàn)出諸多生物活性而受到了廣泛關(guān)注，成為了治療重大疾病的天然藥物，例如抗癌藥物紫杉醇、抗瘧疾藥物青蒿素以及抗生素類藥物穿心蓮內(nèi)酯等。本研究從土荊芥、水團(tuán)花所含萜類成分中篩選得到13個(gè)關(guān)鍵藥效分子，包括19. Bornylene；20. P-Cymene；21. Alpha-Terpinene；22. Menthol；24. Trans-pinocarveol；27. Carvacrol；28. 3-Carene；29. Benzene,(2-Methyl-1-propenyl)；31. Diosphenol；33. Pinocamphone；34. Thymol；49. Quinovic acid-3β-O-(3',4'-O-isopropylidene)-β-D-fucopyranoside；70. Pyrocincholic acid 3β O-β-D-fucopyranoside。其中多數(shù)藥效分子來自土荊芥，占較大權(quán)重(11/13)。究其原因，只因JWC中主要成分水團(tuán)花對(duì)Hp菌株的抑菌作用并不明顯，其主要具有抑菌藥效的成分為土荊芥。張恩恩等通過建立體外Hp的生物膜模型，證實(shí)土荊芥提取物在體外對(duì)于Hp菌株的生物膜形成具有抑制作用。此次篩選出的11個(gè)土荊芥中萜類分子在中草藥及天然產(chǎn)物中分布廣泛，如20.P-傘花烴(P-Cymene)、香芹酚(27. Carvacrol)就很有代表性。香芹酚是精油的主成分及香料的原料，對(duì)Hp具有抗菌效果。P-傘花烴本身對(duì)革蘭氏陰性菌并無抑制作用，其藥效作用體現(xiàn)在與抑菌劑的協(xié)同作用上。研究表明，P-傘花烴與香芹酚同時(shí)存在可提高揮發(fā)油的抑菌活性。本研究運(yùn)用計(jì)算機(jī)輔助虛擬篩選，分析得到土荊芥為JWC抑菌作用的主要中藥，這與相關(guān)藥理學(xué)研究結(jié)果基本吻合。但并不能因此否定水團(tuán)花治療Hp感染的臨床療效，其藥效作用的實(shí)現(xiàn)可能通過其他途徑。

PCA結(jié)果顯示，水團(tuán)花所含化學(xué)成分類藥性不高，且分子對(duì)接顯示其未與Hp感染潛在治療靶點(diǎn)形成較強(qiáng)相互作用。研究表明，粘附素BabA在Hp致病過程中起關(guān)鍵作用，易與多糖發(fā)生結(jié)合從而抑制BabA黏附在胃壁上，而水團(tuán)花所含化合物中富含多糖。因此，我們推測(cè)水團(tuán)花所含化合物可能通過抑制Hp黏附作用發(fā)揮抗Hp療效。2015年Franco等研究了BabA結(jié)合Lewisb抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)(PDB ID:4ZH7)，基于此研究將Lewisb結(jié)合在BabA中的位置設(shè)置為待對(duì)接分子的結(jié)合位點(diǎn)，將水團(tuán)花所含的主要化合物成分與BabA進(jìn)行了分子對(duì)接研究。結(jié)果顯示，化合物70、71、41所含多糖可競爭性地與BabA位點(diǎn)形成穩(wěn)定結(jié)合，從而阻止Hp粘附在胃壁上。由此推測(cè)70、71、41號(hào)化合物有望成為BabA的競爭性抑制劑，水團(tuán)花可能通過競爭性抑制黏附素BabA發(fā)揮抗Hp療效。

KEGG通路富集分析表明，22個(gè)三聯(lián)療法對(duì)Hp感染的生物治療靶點(diǎn)共映射至28個(gè)通路，其中NF-kappa B和MAPK信號(hào)通路富集靶點(diǎn)數(shù)最多，提示這兩條通路在JWC治療Hp感染中占有重要地位。現(xiàn)有研究表明，NF-kappa B和MAPK信號(hào)通路參與Hp感染誘導(dǎo)的基因表達(dá)和宿主應(yīng)答。Hp感染者幾乎均存在不同程度的胃黏膜炎性反應(yīng)，NF-kappa B作為重要的多功能核轉(zhuǎn)錄因子，在Hp感染者的胃黏膜組織中表達(dá)明顯上調(diào)。Shi等通過構(gòu)建Hp感染小鼠模型，證實(shí)了JWC可能通過NF-kappa B信號(hào)通路干預(yù)Hp誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。MAPK信號(hào)通路目前已經(jīng)成為多種炎癥疾病研究靶點(diǎn)，p38MAPK是MAPK通路中至關(guān)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，Hp等多種應(yīng)激原通過激活p38MAPK啟動(dòng)機(jī)體的一系列分子反應(yīng)，促使p38MAPK蛋白磷酸化后入核，經(jīng)過一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)最終加劇炎癥的發(fā)生。張夢(mèng)薇證實(shí)頭花蓼可通過抑制p38MAPK磷酸化水平，緩解炎癥的發(fā)生從而達(dá)到治療Hp感染胃炎的目的。因此，從KEGG生物學(xué)通路富集分析中可以看出，JWC的藥效分子可能主要通過作用于MAPK/NF-kB信號(hào)合成或轉(zhuǎn)運(yùn)通路來干預(yù)Hp感染引起的炎癥反應(yīng)，土荊芥在這一作用中占主導(dǎo)地位。

綜上所述，本研究借助ADME篩選、PCA、計(jì)算機(jī)輔助虛擬篩選等手段，對(duì)JWC的主要成分土荊芥、水團(tuán)花的藥理機(jī)制進(jìn)行了初步探析。結(jié)果表明，土荊芥可能通過干預(yù)MAPK/NF-kB信號(hào)通路發(fā)揮抗Hp作用，而水團(tuán)花的藥效作用體現(xiàn)在競爭性抑制黏附素BabA從而阻止Hp黏附在胃壁上。JWC可通過調(diào)控黏附素-MAPK/NF-kB信號(hào)通路干預(yù)Hp感染所致炎癥反應(yīng)。此外，本研究篩選出14個(gè)關(guān)鍵藥效分子，可憑借藥物化學(xué)手段進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾或改造，最終為單用或聯(lián)合用藥提供更多的藥物來源。但由于虛擬篩選的的局限性，例如未能考慮中藥濃度與小分子代謝對(duì)藥效的影響，后續(xù)仍需開展更多的實(shí)體藥效學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)。