快速溶劑萃取-高效液相色譜法檢測(cè)花生中的克百威殘留量

周宏霞，王 楠，都 穎，張梅超，倪瑞敏

（威海市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，山東威海 264200）

克百威、3-羥基克百威等農(nóng)藥常用于花生的種植和生長(zhǎng)過(guò)程中，它們能防治多種害蟲(chóng)?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）中規(guī)定，花生中克百威的限量為0.2 mg/kg，其中克百威的殘留量包含克百威和3-羥基克百威?？税偻?-羥基克百威是廣譜性殺蟲(chóng)、殺線蟲(chóng)劑，具有觸殺和胃毒作用。它與膽堿酯酶結(jié)合不可逆，因此毒性較高[1]。對(duì)花生中的克百威殘留量進(jìn)行檢測(cè)和監(jiān)控，顯得尤為重要。

目前檢測(cè)克百威的方法有氣相色譜法[2-3]、氣相色譜-質(zhì)譜法[4-5]、熒光檢測(cè)器-高效液相色譜法[6-9]、紫外檢測(cè)器-高效液相色譜法[10-11]、高效液相色譜-質(zhì)譜法[12-15]等。目前比較常用的是熒光檢測(cè)器-高效液相色譜法，該方法靈敏度高，儀器配備要求不高。提取花生中克百威的方法有索氏提取、超聲波輔助提取、振蕩提取等，但過(guò)程煩瑣、周期長(zhǎng)，不利于大批量檢測(cè)?？焖偃軇┹腿∈墙鼛啄臧l(fā)展起來(lái)的一種在高溫、高壓條件下快速提取固體或半固體樣品的前處理方法，具有快速高效的特點(diǎn)，已在多個(gè)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用[16]。本文采用快速溶劑萃取的方法提取花生中的克百威和3-羥基克百威，用高效液相色譜-柱后衍生法檢測(cè)。該方法操作簡(jiǎn)單，自動(dòng)化程度高，適宜于批量檢測(cè)工作。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

花生：市售，硅膠，硅藻土，乙腈（色譜純，thermo），甲醇（色譜純，thermo），丙酮（色譜純，thermo），OPA溶液（美國(guó)Pickering公司），氫氧化鈉溶液（美國(guó)Pickering公司），鄰苯二甲醛（美國(guó)Pickering公司），巰基乙醇（美國(guó)Pickering公司），克百威、3-羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)品（農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)品，濃度100 mg/L），超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

分析天平，玻璃研缽和研杵，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，快速溶劑萃取儀，帶柱后衍生系統(tǒng)的高效液相色譜儀，Mili-Q純水系統(tǒng)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 液相色譜條件

（1）衍生條件。水解試劑流量0.3mL/min，OPA試劑流量0.3mL/min，水解溫度100℃，衍生溫度為室溫。

（2）色譜條件。C18柱（安捷倫Eclipe Pluse 4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫：42 ℃，流量1.0 mL/min進(jìn)樣量：10 μL，流動(dòng)相：A為甲醇，B為水。梯度洗脫程序：0～10 min時(shí)，B由80%降至45%；10～19 min時(shí)，B由45%降至20%，19～20 minB由20%升至80%；20～25 minB為80%。激發(fā)波長(zhǎng)為339 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為445 nm.

1.3.2 快速溶劑萃取條件

溶劑：乙腈；溫度：100 ℃；萃取壓力：10 MPa；加熱時(shí)間：300 s；靜態(tài)時(shí)間：180 s；淋洗體積：40%；吹掃時(shí)間：100 s；循環(huán)次數(shù)：3次。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確移取1 mL的克百威、3-羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度得到10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇水溶液（1+1）逐級(jí)稀釋?zhuān)玫?.02 mg/L、0.04 mg/L、0.10 mg/L、0.20 mg/L、0.40 mg/L和 1.00 mg/L標(biāo)準(zhǔn)的工作液。

1.3.4 樣品前處理

稱(chēng)取粉碎均勻的花生樣品5.0 g和5 g硅膠，放入干凈玻璃研缽種充分混合均勻，然后裝入33 mL萃取池中，加入1 g硅藻土填滿(mǎn)萃取池。裝好萃取池后，放入快速溶劑萃取系統(tǒng)中按照1.3.2的條件進(jìn)行萃取。將萃取液轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，45 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干。用2.5 mL甲醇定容，過(guò)0.22 μm的有機(jī)濾膜，待上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié)果分析

2.1 萃取溶劑的選擇

萃取溶劑是影響萃取效率重要因素之一。本實(shí)驗(yàn)選用丙酮和乙腈兩種有機(jī)試劑比對(duì)回收率的大小。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)丙酮提取時(shí)，能把花生中的油提取出來(lái)，影響定容，并且雜質(zhì)干擾多。乙腈萃取效果好，回收率高，因此選用乙腈為萃取溶劑。

2.2 流動(dòng)相的選擇

流動(dòng)相參考（NY/T 761—2008）中用到的甲醇和水，采用等度洗脫時(shí)，3-羥基克百威的的保留時(shí)間比較靠前，而克百威的保留時(shí)間比較靠后，兩者的保留時(shí)間相差比較大。因此采用梯度洗脫，前期甲醇的比例小，使3-羥基克百威的保留時(shí)間拖后，后期甲醇濃度增大，克百威出峰時(shí)間提前。這樣既能使目標(biāo)物與雜質(zhì)分離開(kāi)來(lái)，又能保證一個(gè)樣品的分析時(shí)間不會(huì)太長(zhǎng)。

2.3 線性范圍和檢出限

按照1.3.3制備的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在優(yōu)化的色譜條件下，以峰面積為縱坐標(biāo)，3-羥基克百威和克百威的含量（質(zhì)量濃度）為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線，在0.02～1.00 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，濃度與色譜峰面積線性關(guān)系良好，且相關(guān)系數(shù)均大于0.999。以信噪比（S/N）的3倍計(jì)算檢出限，在取樣為5 g時(shí)，克百威、3-羥基克百威的檢出限為0.01 mg/kg。校準(zhǔn)曲線方程見(jiàn)表1所示。

表1 2種農(nóng)藥的校準(zhǔn)曲線

2.4 精密度和加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

取空白的花生樣品進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)濃度如表2所示，按照1.3.4樣品前處理方法對(duì)加標(biāo)樣品進(jìn)行前處理，按照1.3.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)加標(biāo)質(zhì)量濃度水平平行測(cè)定6次。添加回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表2。

表2 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本文建立了快速溶劑萃取-高效液相色譜法測(cè)定花生中的克百威，該方法操作簡(jiǎn)單，有機(jī)試劑用量少，自動(dòng)化程度高，適用于批量檢測(cè)工作。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，克百威和3-羥基克百威在0.02～1.0 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系好，相關(guān)系數(shù)在0.999以上，在0.01～0.10mg/kg加標(biāo)水平時(shí)，回收率為86.3%～97.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.22%～4.73%（n=6），方法的檢出限為0.01 mg/kg。該方法適用于花生中克百威殘留量的檢測(cè)。