貴州省民族藥飛龍掌血根質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

陳 鳳 程 韜 王影超 鄒轉(zhuǎn)轉(zhuǎn) 舒 柯

貴州省食品藥品檢驗所，貴州 貴陽 550004

本品為蕓香科植物飛龍掌血屬Toddaliaasiatica(L.)Lam.的飛龍掌血根，全株用作草藥，多用其根，具有活血散瘀、祛風(fēng)除濕、消腫止痛之功效，治療感冒風(fēng)寒、胃痛、肋間神經(jīng)痛、風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、咯血等[1]。目前已知飛龍掌血中化學(xué)成分包括呋喃香豆素類、毗喃香豆素類、生物堿類等及其他化學(xué)成分[2]。其中白屈菜紅堿具有具有抗菌、抑菌，清熱解毒、抗菌消炎的作用[3-4]與飛龍掌血根的臨床療效具有相關(guān)性。目前貴州省收載于2003年版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中[5]，僅用其根皮。但是若僅僅使用根皮而不使用根，不僅是對中藥資源的一種巨大浪費，也不利于中藥材的可持續(xù)發(fā)展。因此采用高效液相色譜對飛龍掌血根中白屈菜紅堿進(jìn)行含量測定，以達(dá)到完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及用藥安全有效，質(zhì)量可控穩(wěn)定，為生產(chǎn)、使用、流通等提供科學(xué)合理數(shù)據(jù)參考。飛龍掌血根生境及性狀如圖1所示。

圖1 飛龍掌血生境圖(A)、飛龍掌血根性狀圖(B)

1 材料與儀器

1.1 儀器 Waters 2695-2998高效液相色譜儀(美國)，KQ-500DA超聲清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，MS204TS型(萬分之一)電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)、XP26型(百萬分之一)電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 試劑與試藥 乙腈為色譜純，分析甲醇、分析三乙胺、分析磷酸，水為超純水。飛龍掌血根12批樣品；白屈菜紅堿(批號：111718-201402，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：80.5%)中國食品藥品檢定研究院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈—1%三乙胺(磷酸調(diào) pH 值至 3)(28∶72)；檢測波長為269 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL。

2.2 對照品溶液的制備 取白屈菜紅堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含30 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取飛龍掌血根藥材，粉碎，過三號篩，混勻，取粉末約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補充減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液，照“色譜條件”項下進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果供試品與對照品在相應(yīng)的位置出現(xiàn)色譜峰，色譜圖如圖2所示。

圖2 對照品(A)、供試品(B)的HPLC色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2”項下對照品溶液2 μL、5 μL、8 μL、10 μL、15 μL、20 μL注入高效液相色譜儀器，測定峰面積。計算回歸方程：y=248,901.4450x- 5,802.7829，r=1.0000(n=6),表明白屈菜紅堿在0.059828～0.598276 μg的進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗 取“2.2”項下的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10 μL，測定白屈菜紅堿的峰面積，計算其RSD%為0.66%，結(jié)果表明，儀器精密度好。

2.7 耐用性試驗 取同一樣品，按“2.3”項下方法制備1份供試品溶液，分別于0、2 h、6 h、10 h、14 h、18 h、24 h各進(jìn)樣10 μL，測定白屈菜紅堿的峰面積，計算RSD為0.49%，結(jié)果表明，供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗 取同一批樣品，按“2.3”項下方法制備6份供試品溶液，進(jìn)樣量10μL，測定白屈菜紅堿的峰面積，平均含量0.7987 mg/g，計算RSD為0.18%，表明該方法重復(fù)性好。

2.9 準(zhǔn)確度試驗 取已測定含量的飛龍掌血根藥材樣品(平均含量0.7987 mg/g)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入白屈菜紅堿對照品(0.016261 mg，具體見表1)20 mL，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，并計算白屈菜紅堿的平均回收率99.42%，RSD為1.63%。見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.10 不同色譜柱的考察 取同一樣品，按“2.3”項下方法制備1份供試品溶液，分別以不同品牌C18色譜柱(Waters Xbridge 、Thermo Fisher、Agilent XDB)各進(jìn)樣10 μL，測定白屈菜紅堿的峰面積，計算含量，RSD%為0.88%，結(jié)果表明不同品牌十八烷基硅膠膠合硅膠為填充劑的色譜柱對含量測定無顯著差異。

2.11 樣品含量測定 按上述色譜條件，取不同產(chǎn)地飛龍掌血根“2.3”項下方法制備供試品溶液，測定白屈菜紅堿的含量，結(jié)果見表2。12批飛龍掌血根藥材中白屈菜紅堿含量測定結(jié)果為0.3274～1.5771 mg/g。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

通過實驗結(jié)果可以看出，不同產(chǎn)地的飛龍掌血根中白屈菜紅堿的含量存在著明顯的差異，其次即使是同一產(chǎn)地不同采收季節(jié)的含量之間也存在著較大的差異。本實驗建立的方法可以進(jìn)一步對飛龍掌血根藥材的研究開發(fā)及臨床合理使用，提供一定的實驗依據(jù)。因此在藥用的時候，應(yīng)該根據(jù)其產(chǎn)地及采收季節(jié)來確定其劑量，以免因其量過多或者過少而影響治療效果。

本次實驗還對飛龍掌血根莖藥材和飛龍掌血根皮藥材進(jìn)行定位對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們都含有白屈菜紅堿、血根堿、氯化兩面針堿、茵芋堿和茴芹香豆素、異茴芹香豆素，從實驗來看飛龍掌血根和根皮之間的成分差異并不大，但是由于實驗材料采集局限性，無法更加全面系統(tǒng)的對二者進(jìn)行完整的對比。在本次實驗基礎(chǔ)上，下一步將研究飛龍掌血根莖及根皮中有效成分的含量。

本次實驗考察白屈菜紅堿吸收波長，取白屈菜紅堿對照溶液在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，經(jīng)試驗摸索，以269 nm作為檢測波長時以獲得較高的靈敏度和良好的選擇。故確定白屈菜紅堿的檢測波長為269 nm。研究比較不同流動相的洗脫效果，用乙腈-1%三乙胺(磷酸調(diào)pH值至3)(28∶72)[6]作為流動相。對不同濃度的甲醇進(jìn)行超聲及回流提取對比研究，結(jié)果表明，本法選擇甲醇回流加熱30 min效果最好。本實驗對飛龍掌血根中白屈菜紅堿的含量測定的研究，方法準(zhǔn)確可靠、簡便易行，可用于飛龍掌血根質(zhì)量控制。