新型嘧啶并苦參堿衍生物的合成及抗腫瘤活性

姜文泰, 王興東, 魏世洋, 劉 旭, 江 俊, 王立升*

(1. 廣西大學(xué) a. 化學(xué)化工學(xué)院; b. 醫(yī)學(xué)院，廣西 南寧 530004)

癌癥是導(dǎo)致人類死亡的第二大原因。隨著環(huán)境壓力和社會壓力的不斷增加，因癌癥而死亡的人數(shù)逐年呈增長趨勢。在諸多治療方案中，藥物治療是一種非常重要的治療方式，通過使用合理的藥物進行輔助治療，能夠極大延長患者的生存期和提高患者的生存率。因此，設(shè)計并開發(fā)新型結(jié)構(gòu)的抗癌藥物，以及尋找療效更好副作用更小的藥物，一直是藥物化學(xué)科研工作者的研究熱點。

苦參堿是從苦參中提取、分離得到的主要活性成分之一[1]?？鄥A及其衍生物具有多種活性，如抗癌、抗病毒、抗炎、殺蟲等[2-7]?？鄥A雖然具有一定的抗癌活性，但效果中等，推測這可能是由于它結(jié)合位點較多、選擇性較差所致。因此，提高苦參堿對腫瘤靶點的敏感性和選擇性，將有效提升苦參堿的抗癌活性。此外，苦參堿具有較高的安全性、良好的水溶性，提取純化方便。因此，苦參堿是良好的先導(dǎo)化合物。

嘧啶及其衍生物是一類常見的生物活性成分[8]。嘧啶衍生物具有抗病毒、抗癌、抗炎、抗細菌、抗真菌等生物活性[9-10]。含嘧啶的分子具有獨特的結(jié)構(gòu)和良好的生物相容性，在制藥及農(nóng)用化學(xué)等領(lǐng)域有較高應(yīng)用價值[11-12]。

鑒于部分含嘧啶結(jié)構(gòu)的化合物具有良好的抗癌特性，已廣泛應(yīng)用于新型的抗癌藥物的研發(fā)[13-14]。本文運用藥物拼合原理，創(chuàng)造性的在苦參堿的D環(huán)拼合得到新的帶嘧啶環(huán)結(jié)構(gòu)的苦參堿衍生物(Scheme 1)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR、13C NMR及HR-MS(ESI)表征。采用MTT法測試了目標化合物對人子宮頸癌(HeLa)和人乳腺癌(MCF-7)瘤株的體外抑制活性。

Scheme 1

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

WRS-1B型數(shù)字熔點儀；Bruker 600 MHz型核磁共振儀(DMSO-d6或CDCl3為溶劑，TMS為內(nèi)標)；UPLC I-CLASS-XEVOG2-XSQTOF型超高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀；SpectramaxM5型酶標儀。

三氯氧磷，N，N-二甲基甲酰胺，鹽酸胍，芳香酰氯,薩恩化學(xué)技術(shù)(上海)有限公司；人子宮頸癌細胞(HeLa)和人乳腺癌細胞(MCF-7),深圳柯瑞思托科技有限公司。

1.2 合成

(1)1的合成

取500 mL三口燒瓶，分別加入N，N-二甲基甲酰胺19.2 mL(240 mmol)及干燥的DCM 5 mL，冰浴下滴加POCl336.8 g(240 mmol)，滴畢，攪拌1 h得無色黏稠液體；將苦參堿20 g(80 mmol)的DCM(100 mL)溶液加入到上述混合物中，加畢，撤去冰浴，攪拌下反應(yīng)9 h。濃縮，殘留物加入到碎冰中，攪拌下用20%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至 9～10；于60 ℃水解2 h。靜置，抽濾，濾餅真空干燥得淡黃色固體1，產(chǎn)率91%, m.p.123.9～124.1 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 9.68(s, 1H, CHO-H), 4.26～3.89(m, 2H, 11-H, 5-H), 3.63(t,J=12.8 Hz, 1H, 6-H), 3.00～2.71(m, 2H), 2.42(dtd,J=15.8 Hz, 5.4 Hz, 1.2 Hz, 1H), 2.31(ddd,J=15.6 Hz, 9.8 Hz, 5.1 Hz, 1H), 2.01(tdd,J=12.3 Hz, 9.6 Hz, 3.1 Hz, 2H), 1.95～1.73(m, 5H), 1.73～1.53(m, 5H), 1.52～1.42(m, 2H), 1.37(tt,J=14.0 Hz, 4.3 Hz, 1H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 187.37(C18), 150.78(C15), 107.95(C14), 63.56(C6), 57.18(C11), 49.55(C17), 39.44(2C, C2, C10), 36.77(C5), 27.61(C8), 26.04(C4), 22.37(C7), 21.22(C13), 20.61(C12), 17.80(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C16H23N2OCl{[M+H]+}294.1499, found 295.1580。

(2)2的合成

在500 mL干燥三口燒瓶中，依次加入110.0 g(34 mmol)和無水碳酸鉀14.1 g(102 mmol)，加入甲醇100 mL，攪拌使其溶解；緩慢滴加鹽酸胍4.87 g(51 mmol)的甲醇(20 mL)溶液，滴畢，攪拌下于65 ℃反應(yīng)6 h(TLC檢測)。加水溶解剩余的碳酸鉀使反應(yīng)體系均相，用DCM萃取3次，合并有機相，依次用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得黃色固體，用乙醚重結(jié)晶，過濾，濾餅真空干燥得黃色晶體2，產(chǎn)率73%, m.p.128.9～129.7 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 9.50(s, 1H, 18-H), 5.22(s, 2H, NH2-H), 3.60(dd,J=12.8 Hz, 4.4 Hz, 1H, 11-H), 3.41(t,J=12.6 Hz, 1H, 6-H), 2.83(ddt,J=22.7 Hz, 11.3 Hz, 2H), 2.39～2.24(m, 2H), 2.16～1.93(m, 4H), 1.89(td,J=13.3 Hz, 4.5 Hz, 2H), 1.79～1.34(m, 10H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 184.11(C15), 169.40(C20), 168.54(C18), 98.91(C14), 63.56(C6), 57.29(C11), 53.56(C7), 44.97(2C, C2, C10), 36.51(C5), 27.77(C8), 26.29(C4), 23.67(C7), 21.21(C13), 20.64(C12), 16.02(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C17H25N5{[M+H]+}299.2110, found 300.1910。

(3)3a～3k的合成(以3a為例)

氮氣保護、冰浴冷卻下，在100 mL干燥三口燒瓶中，加入21.5 g(5 mmol)，用20 mL無水DCM溶解；加入三乙胺0.7 mL(6 mmol)，緩慢滴加苯甲酰氯0.70 mL(6 mmol)，滴畢，于室溫反應(yīng)9 h(TLC監(jiān)測)。用DCM萃取，有機相依次用飽和NaHCO3溶液和飽和NaCl溶液洗滌，無水Na2SO4干燥，濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(洗脫劑：EA/PE=2/1，V/V)純化，減壓濃縮，殘余物用乙醚重結(jié)晶得3a。

用類似的方法合成3b～3k。

3a: 淡黃色固體，產(chǎn)率87%, m.p.100.1 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.45(s, 1H, 18-H), 8.13(d,J=7.2 Hz, 2H, 2′,6′-H), 7.64(t,J=7.4 Hz, 1H, 4′-H), 7.50(t,J=7.8 Hz, 2H, 3′,5′-H), 4.48(dd,J=12.8 Hz, 4.4 Hz, 1H, 11-H), 4.04～3.92(m, 1H, 5-H), 3.19(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 2.84(ddtd,J=22.8 Hz, 11.6 Hz, 3.9 Hz, 1.7 Hz, 3H), 2.57～2.40(m, 1H), 2.16(d,J=10.0 Hz, 2H), 1.96(dq,J=26.4 Hz, 14.0 Hz, 13.1 Hz, 4H), 1.85～1.74(m, 2H), 1.74～1.61(m, 3H), 1.61～1.53(m, 2H), 1.52～1.42(m, 3H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 163.55(C15), 162.64(C23), 140.66(2C, C18, C20), 133.88(C1′), 130.10(2C, C3′, C5′), 128.70(C4′), 128.65(2C, C2′, C6′), 116.66(C14), 63.79(C6), 57.22(C11), 52.85(C17), 42.34(2C, C2, C10), 35.57(C5), 27.70(C8), 26.49(C4), 24.83(C7), 21.12(C13), 20.75(C12), 19.82(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C24H29N5O{[M+H]+}403.2372, found 404.2023。

3b: 淡黃色固體，產(chǎn)率80%, m.p.146.5～146.6 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.44(s, 1H, 18-H), 8.13～7.82(d, 2H, 2′,6′-H), 7.30(d, 2H, 3′,5′-H), 4.48(dd,J=12.7 Hz, 4.5 Hz, 1H, 11-H), 3.97(ddd,J=10.9 Hz, 7.7 Hz, 5.1 Hz, 1H, 5-H), 3.19(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 2.84(ddtd,J=24.2 Hz, 12.7 Hz, 3.9 Hz, 1.7 Hz, 3H), 2.53～2.37(m, 4H), 2.20～2.11(m, 2H), 2.04～1.95(m, 2H), 1.94～1.89 (m, 1H), 1.85～ 1.74(m, 3H), 1.74～1.62(m, 3H), 1.57(dtd,J=13.6 Hz, 10.3 Hz, 9.1 Hz, 4.2 Hz, 2H), 1.53～1.43(m, 3H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 163.59(C15), 162.67(C23), 144.81(C4′), 140.72(2C, C18, C20), 130.14(2C, C3′, C5′), 129.36(2C, C2′, C6′), 125.92(C1′), 116.39(C14), 63.79(C6), 57.29(C11), 52.87(C17), 42.33(2C, C2, C10), 35.60(C6), 27.75(C8), 26.55(C4), 24.81(C7), 21.79(-CH3), 21.20(C13), 20.82(C12), 19.82(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C25H31N5O {[M+H]+}417.2529, found 418.2191。

3c: 白色晶體，產(chǎn)率88%, m.p.159.0～159.5 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.43(s, 1H, 18-H), 8.21～7.95(m, 2H, 2′,6′-H), 7.12～6.84(m, 2H, 3′,5′-H), 4.48(dd,J=12.8 Hz, 4.4 Hz, 1H, 11-H), 3.97(ddd,J=11.0 Hz, 7.6 Hz, 5.1 Hz, 1H, 5-H), 3.90(s, 3H, OCH3-H), 3.18(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 2.92～2.75(m, 3H), 2.46(dddd,J=15.0 Hz, 10.2 Hz, 4.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 2.23～2.10(m, 2H), 2.07～1.87(m, 3H), 1.87～1.72(m, 4H), 1.72～1.60(m, 3H), 1.60～1.52(m, 2H), 1.50～1.42(m, 3H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 164.12(C15), 163.66(C23), 162.31(C4′), 140.79(2C, C18, C20), 132.25(2C, C2′, C6′), 120.93(C1′), 116.12(C14), 113.94(2C, C3′, C5′), 63.79(C6), 57.30(C11), 55.54(-O-CH3), 52.86(C17), 42.35(2C, C2, C10), 35.60(C5), 27.75(C8), 26.55(C4), 24.83(C7), 21.20(C13), 20.82(C12), 19.80(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C25H31N5O2{[M+H]+} 433.2478, found 434.2123。

3d: 白色固體，產(chǎn)率77%, m.p.127.6 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.42(s, 1H, 18-H), 7.93(dt,J=7.8 Hz, 1.3 Hz, 1H, 2′-H), 7.79(ddd,J=9.1 Hz, 2.7 Hz, 1.5 Hz, 1H, 6′-H), 7.49(td,J=8.0 Hz, 5.5 Hz, 1H, 3′-H), 7.34(tdd,J=8.3 Hz, 2.7 Hz, 1.0 Hz, 1H, 4′-H), 4.47(dd,J=12.7 Hz, 4.5 Hz, 1H, 11-H), 3.98(ddd,J=10.9 Hz, 7.6 Hz, 5.1 Hz, 1H, 5-H), 3.19(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 3.00～2.67(m, 3H), 2.47(dddd,J=15.0 Hz, 10.3 Hz, 4.1 Hz, 2.0 Hz, 1H), 2.24～2.09(m, 2H), 2.05～1.84(m, 4H), 1.82～1.61(m, 5H), 1.61～1.52(m, 2H), 1.52～1.42(m, 3H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 163.54(C15), 163.29(C23), 161.57(C5′), 140.37(2C,C18,C20), 130.32(C1′), 125.86(C3′), 120.91(C2′), 117.14(C4′), 116.98(C6′), 116.79(C14), 63.74(C6), 57.23(C11), 52.86(C17), 42.34(2C, C2, C10), 35.59(C5), 27.73(C8), 26.53(C4), 24.75(C7), 21.18(C13), 20.80(C12), 19.85(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C24H28FN5O{[M+H]+}421.2278, found 422.1913。

3e: 淡黃色晶體，產(chǎn)率71%, m.p.139.8 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.42(s, 1H, 18-H), 8.06～7.89(m, 1H, 5′-H), 7.60～7.44(m, 2H, 4′,3′-H), 7.38(ddd,J=8.4 Hz, 6.3 Hz, 2.3 Hz, 1H, 2′-H), 4.47(dd,J=12.8 Hz, 4.4 Hz, 1H, 11-H), 3.96(ddd,J=10.9 Hz, 7.7 Hz, 5.1 Hz, 1H, 5-H), 3.18(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 2.96～2.70(m, 3H), 2.43(dddd,J=15.1 Hz, 10.4 Hz, 4.1 Hz, 2.1 Hz, 1H), 2.23～2.06(m, 2H), 1.99(qd,J=12.3 Hz, 2.8 Hz, 2H), 1.94～1.83(m, 3H), 1.83～1.66(m, 4H), 1.65～1.49(m, 4H), 1.50～1.40(m, 3H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 163.37(C15), 161.62(C23), 140.45(2C, C18, C20), 134.55(C6′), 133.52(C4′), 132.20(C1′), 131.49(C5′), 128.34(C2′), 126.76(C3′), 117.27(C14), 63.74(C6), 57.27(C11), 52.90(C17), 42.36(2C, C2, C10), 35.59(C5), 27.73(C8), 26.52(C4), 24.79(C7), 21.18(C13), 20.79(C12), 19.96(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C24H28N5OCl{[M+H]+}437.1982, found 438.1568。

3f: 白色固體，產(chǎn)率82%, m.p.149.3～149.4 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.42(s, 1H, 18-H), 8.15～8.02(m, 2H, 2′,6′-H), 7.56～7.42(m, 2H, 3′,5′-H), 4.47(dd,J=12.8 Hz, 4.5 Hz, 1H, 11-H), 3.98(ddd,J=10.8 Hz, 7.7 Hz, 5.1 Hz, 1H, 5-H), 3.19(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 2.92～2.73(m, 3H), 2.46(dddd,J=14.9 Hz, 10.3 Hz, 4.2 Hz, 2.1 Hz, 1H), 2.24～2.08(m, 2H), 2.07～1.87(m, 3H), 1.87～1.49(m, 8H), 1.45(qd,J=9.6 Hz, 4.3 Hz, 3H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 163.32(C15), 161.83(C23), 140.46(2C, C18, C20), 140.43(C4′), 131.42(2C, C2′, C6′), 129.05(2C, C5′, C3′), 127.16(C1′), 111.97(C14), 63.75(C6), 57.24(C11), 52.86(C17), 42.34(2C, C2, C10), 35.59(C5), 27.74(C8), 26.54(C4), 24.76(C7), 21.18(C13), 20.81(C12), 19.86(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C24H28ClN5O{[M+H]+}437.1982, found 438.1585。

3g: 淡黃色固體， 產(chǎn)率75%, m.p.109.0 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.41(t,J=1.8 Hz, 1H, 18-H), 8.24(t,J=1.8 Hz, 1H, 6′-H), 8.06(dt,J=7.8 Hz, 1.4 Hz, 1H, 4′-H), 7.76(dt,J=8.0 Hz, 1.4 Hz, 1H, 2′-H), 7.39(t,J=7.9 Hz, 1H, 3′-H), 4.47(dd,J=12.8 Hz, 4.4 Hz, 1H, 11-H), 3.98(ddd,J=10.8 Hz, 7.6 Hz, 5.1 Hz, 1H, 5-H), 3.19(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 2.98～2.71(m, 3H), 2.47(dddd,J=15.0 Hz, 10.4 Hz, 4.2 Hz, 2.1 Hz, 1H), 2.25～2.10(m, 2H), 1.99(tdd,J=13.5 Hz, 11.8 Hz, 2.8 Hz, 2H), 1.86(s, 2H), 1.82～1.62(m, 5H), 1.61～1.53(m, 2H), 1.52～1.42(m, 3H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 163.29(C15), 161.40(C23), 140.37(2C, C18, C20), 136.81(C1′), 132.94(C4′), 130.64(C3′), 130.23(C6′), 128.68(C2′), 122.70(C5′), 117.22(C14), 63.74(C6), 57.27(C11), 52.88(C17), 42.34(2C, C2, C10), 35.59(C5), 27.73(C8), 26.53(C4), 24.74(C7), 21.17(C13), 20.79(C12), 19.87(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C24H28N5OBr{[M+H]+}481.1477, found 482.1094。

3h: 淡黃色固體， 產(chǎn)率66%, m.p.119.8 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.43(t,J=1.8 Hz, 1H, 18-H), 8.37(s,J=1.8 Hz, 1H, 2′-H), 8.32(d,J=7.8 Hz, 1.4 Hz, 1H, 4′-H), 7.95～7.86(d, 1H, 6′-H), 7.66(t,J=7.8 Hz, 1H, 5′-H), 4.48(dd,J=12.8 Hz, 4.5 Hz, 1H, 11-H), 3.99(ddd,J=10.8 Hz, 7.7 Hz, 5.1 Hz, 1H, 5-H), 3.20(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 2.95～2.76(m, 3H), 2.49(dddd,J=15.0 Hz, 10.3 Hz, 4.1 Hz, 2.1 Hz, 1H), 2.24～2.12(m, 2H), 2.00(tdd,J=13.4 Hz, 11.8 Hz, 2.9 Hz, 2H), 1.92(ddq,J=13.7 Hz, 4.6 Hz, 2.1 Hz, 1H), 1.83～1.73(m, 3H), 1.72～1.60(m, 3H), 1.60～1.51(m, 2H), 1.47(ddt,J=15.1 Hz, 8.9 Hz, 3.7 Hz, 3H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 163.23(C15), 161.46(C23), 140.29(2C,C18,C20), 133.26(C1′), 130.37(C3′), 130.34(C6′), 129.64(C5′), 129.41(C4′), 126.90(C2′), 122.40(-CF3), 117.43(C14), 63.73(C6), 57.22(C11), 52.88(C17), 42.35(2C, C2, C10), 35.59(C5), 27.72(C8), 26.53(C4), 24.74(C7), 21.16(C13), 20.78(C12), 19.88(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C25H28N5OF3{[M+H]+}471.2246, found 472.1869。

3i: 淡黃色固體，產(chǎn)率78%, m.p.163.1 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.42(s, 1H, 18-H), 8.14～7.89(m, 2H, 2′,6′-H), 7.72～7.50(m, 2H, 3′,5′-H), 4.48(dd,J=12.8 Hz, 4.5 Hz, 1H, 11-H), 3.99(ddd,J=10.8 Hz, 7.6 Hz, 5.0 Hz, 1H, 5-H), 3.20(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 2.98～2.75(m, 3H), 2.46(dddd,J=15.0 Hz, 10.3 Hz, 4.2 Hz, 2.1 Hz, 1H), 2.17(tq,J=8.1 Hz, 4.6 Hz, 2H), 2.00(qd,J=12.7 Hz, 2.8 Hz, 2H), 1.95～1.73(m, 4H), 1.73～1.61(m, 3H), 1.61～1.53(m, 2H), 1.45(m,J=9.5 Hz, 4.9 Hz, 3H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 163.32(C15), 161.99(C23), 140.43(2C, C18, C20), 132.06(2C, C2′, C6′), 131.52(2C, C5′, C3′), 129.19(C4′), 127.62(C1′), 117.00(C14), 63.76(C6), 57.22(C11), 52.84(C17), 42.34(2C, C2, C10), 35.58(C5), 27.72(C8), 26.53(C4), 24.78(C7), 21.16(C13), 20.79(C12), 19.87(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C24H28N5OBr{[M+H]+}481.1477, found 482.1073。

3j: 淡黃色固體，產(chǎn)率83%, m.p.152.1～152.2 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 9.01(dd,J=8.7 Hz, 1.0 Hz, 1H, 3′-H), 8.57(s, 1H, 18-H), 8.34(dd,J=7.3 Hz, 1.3 Hz, 1H, 6′-H), 8.11(dt,J=8.3 Hz, 1.0 Hz, 1H, 8′-H), 7.93(dd,J=8.1 Hz, 1.3 Hz, 1H, 10′-H), 7.67(ddd,J=8.5 Hz, 6.8 Hz, 1.5 Hz, 1H, 4′-H), 7.62～7.52(m, 2H, 5′,9′-H), 4.51(dd,J=12.8 Hz, 4.4 Hz, 1H, 11-H), 3.99(ddd,J=10.8 Hz, 7.7 Hz, 5.1 Hz, 1H, 5-H), 3.21(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 2.95～2.75(m, 3H), 2.49(dddd,J=14.9 Hz, 10.3 Hz, 4.1 Hz, 2.1 Hz, 1H), 2.22～2.11(m, 2H), 2.00(qd,J=12.3 Hz, 2.8 Hz, 2H), 1.95～1.68(m, 5H), 1.67～1.51(m, 4H), 1.51～1.40(m, 3H);13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 163.59(C15), 162.97(C23), 140.78(2C, C18, C20), 134.61(C8′), 133.88(C4′), 131.67(C1′), 131.07(C6′), 128.69(C5′), 128.36(C10′), 126.55(C2′), 125.70(C3′), 125.06(C7′), 124.41(C9′), 116.53(C14), 63.79(C6), 57.26(C11), 52.89(C17), 42.36(2C, C2, C10), 35.62(C5), 27.77(C8), 26.55(C4), 24.85(C7), 21.21(C13), 20.82(C12), 19.98(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C28H31N5O{[M+H]+} 453.2529, found 454.2163。

3k: 淡黃色固體，產(chǎn)率74%, m.p.115.3 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.42(s, 1H, 18-H), 7.99～7.84(m, 1H, 6′-H), 7.83～7.66(m, 1H, 3′-H), 7.50～7.37(m, 2H, 4′,5′-H), 4.48(dd,J=12.8 Hz, 4.5 Hz, 1H, 11-H), 3.98(ddd,J=10.9 Hz, 7.7 Hz, 5.1 Hz, 1H, 5-H), 3.20(t,J=12.7 Hz, 1H, 6-H), 2.97～2.72(m, 3H), 2.44(dddd,J=15.0 Hz, 10.4 Hz, 4.1 Hz, 2.0 Hz, 1H), 2.22～2.10(m, 2H), 2.01(qd,J=12.1 Hz, 3.0 Hz, 2H), 1.94～1.76(m, 3H), 1.76～1.61(m, 3H), 1.61～1.51(m, 3H), 1.51～1.42(m, 3H).;13C NMR(151 MHz, CDCl3)δ: 163.33(C15), 162.05(C23), 140.45(2C, C18, C20), 134.79(C1′), 133.45(C3′), 132.12(C5′), 130.47(C4′), 127.32(C6′), 122.41(C2′), 117.32(C14), 63.77(C6), 57.23(C11), 52.86(C17), 42.37(2C, C2, C10), 35.56(C5), 27.70(C8), 26.48(C4), 24.85(C7), 21.13(C13), 20.74(C12), 20.01(2C, C3, C9); HR-MS(ESI)m/z: calcd for C24H28N5OBr{[M+H]+}481.1477, found 482.1093。

1.3 體外抗腫瘤活性測試

將待測化合物用二甲基亞砜溶解后，稀釋成5個濃度梯度，取對數(shù)生長期的HeLa或MCF-7細胞，按每孔5000個細胞(100 μL培養(yǎng)基)接種于無菌96孔板；同時設(shè)置空白組、對照組、給藥組，每組設(shè)3個平行孔，置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育24 h，移除舊培養(yǎng)基，加入含不同濃度待測化合物的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48 h，再每孔加入5 mg/mL MTT培養(yǎng)液20 μL染色4 h。棄除MTT和培養(yǎng)基，每孔加入DMSO 150 μL，振搖10 min，用酶標儀在波長490 nm處測定吸光值(OD)，并計算細胞增殖抑制率(IC50)。實驗結(jié)果為至少兩次以上獨立重復(fù)實驗所得的平均值。

2 結(jié)果與討論

2.1 合成

在酰氯與氨基化合物反應(yīng)中，生成的氯化氫所造成的酸性環(huán)境會抑制反應(yīng)的正向進行，因此應(yīng)預(yù)先加入適量的縛酸劑，縛酸劑的用量和種類的選擇對反應(yīng)的影響較大。反應(yīng)需要在干燥的條件下進行，如有水進入反應(yīng)體系將直接影響反應(yīng)產(chǎn)率。此外，用酰氯合成酰胺的反應(yīng)為放熱反應(yīng)，需要在冰浴下進行，控制反應(yīng)體系為0 ℃左右時方可滴加酰氯，實驗結(jié)果表明反應(yīng)溫度較高會顯著降低產(chǎn)率。因此，酰氯的滴加速度也會對反應(yīng)的產(chǎn)率產(chǎn)生較大影響，在加料中應(yīng)該嚴格控制滴加速度。

2.2 體外抗腫瘤活性

采用MTT法測定了化合物2和化合物3a～3k對人宮頸癌(HeLa)和人乳腺癌(MCF-7)瘤株的體外抑制活性并計算IC50，以順鉑(cisplatin)作為陽性對照，結(jié)果見表1。由表1可知，化合物3e、3f和3i的活性較差，IC50值均大于50 μmol·L-1；3b和3d對HeLa的抑制活性較好，IC50值小于50 μmol·L-1；3a、3c、3g、3j和3k對MCF-7抑制活性較高，IC50值已接近或小于50 μmol·L-1；化合物2對HeLa的IC50為4.571 μmol·L-1，對MCF-7的IC50大于50 μmol·L-1；化合物3h對MCF-7的IC50為3.650 μmol·L-1，對HaLa的IC50大于50 μmol·L-1，說明化合物2和3h的抗腫瘤活性有選擇性。

表1 化合物的體外抗腫瘤活性

2.3 構(gòu)效關(guān)系初步分析

通過分析化合物結(jié)構(gòu)可知，在2的氨基位引入鄰氯苯甲?；?3e)、對氯苯甲?；?3f)、對溴苯甲?；?3i)未見活性提升；引入苯甲?；?3a)、對甲氧基苯甲?；?3c)、間溴苯甲?；?3g)、1-萘甲?；?3j)和鄰溴苯甲?；?3k)一定程度上提高了化合物對MCF-7的抑制活性，但降低了其對HeLa的活性；化合物2結(jié)構(gòu)本身對HeLa具有較高的活性，但對MCF-7活性較低，而引入間三氟甲基苯甲?；?3h)對MCF-7具有較強的活性，但卻顯著降低了其對HeLa的活性。初步分析結(jié)果為苯環(huán)上的取代基的位置和種類，均可影響化合物對特定腫瘤的抑制活性。

合成了12個新型的嘧啶并苦生堿衍生物，并選用人子宮頸癌(HeLa)和人乳腺癌(MCF-7)瘤株考察其體外抗腫瘤活性。其中，化合物2對HeLa具有較強的活性，3h對MCF-7的抑制活性最好，且對腫瘤細胞的抑制具有選擇性。