• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉中左旋肉堿含量測(cè)定方法優(yōu)化

    2021-08-10 05:44:36馬曉博張?zhí)m天蓋麗娜
    關(guān)鍵詞:肉堿乳粉透光率

    馬曉博,吳 磊,張 斌,張?zhí)m天,蓋麗娜

    (河北省食品檢驗(yàn)研究院,河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河北 石家莊 050200)

    左旋肉堿又被稱為維生素BT,是一種類維生素營(yíng)養(yǎng)素,其作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑廣泛應(yīng)用于嬰幼兒食品、減肥類保健品、中老年人營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充食品中[1-4]。左旋肉堿通過調(diào)節(jié)線粒體內(nèi)?;谋壤?,促進(jìn)支鏈氨基酸正常代謝,在嬰兒利用脂肪作為能量來源的代謝中起著重要作用,因此左旋肉堿是嬰幼兒必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[5-7]。GB 25596—2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品通則》[8]和GB 29922—2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品通則》[9]規(guī)定,左旋肉堿作為特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品的可選擇性成分,其添加量≥0.3 mg/kJ。特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品作為嬰幼兒早期甚至長(zhǎng)期賴以生存的主要食物來源,其質(zhì)量應(yīng)得到嚴(yán)格控制[5]。

    目前,左旋肉堿的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法、質(zhì)譜法、離子色譜法和分光光度法等[10-18]。GB 29989—2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中左旋肉堿的測(cè)定》[19]中的檢測(cè)方法為分光光度法,該方法較其他方法具有操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn),是目前檢測(cè)機(jī)構(gòu)普遍采用的方法[19-20]。本研究在GB 29989—2013的基礎(chǔ)上,針對(duì)特定基質(zhì)配方的特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉,從標(biāo)準(zhǔn)曲線制作、樣品前處理、乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶配制等幾個(gè)方面進(jìn)行分析優(yōu)化,研究其對(duì)左旋肉堿測(cè)定的影響,為特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉檢測(cè)提供參考[21]。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    市售嬰幼兒配方乳粉、氨基酸配方、乳蛋白深度水解和部分水解配方特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒食品(3 類特殊醫(yī)學(xué)用途乳粉配料均含有麥芽糊精),各10 批次。

    α-淀粉酶(酶活力≥3.7 U/mg) 北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;乙二胺四乙酸二鈉、高氯酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀(均為分析純) 天津永大化學(xué)試劑有限公司;乙酰輔酶A、乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶 美國(guó)Sigma試劑公司;2-硝基苯甲酸、N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸梯希愛(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司;左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)品(純度98.5%) 北京曼哈格生物科技有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    UV2700紫外-可見分光光度計(jì) 日本島津儀器有限公司;MS204S/01電子分析天平 瑞士梅特勒-托利多公司;PHS-3C pH計(jì) 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;CT15RT高速冷凍離心機(jī) 上海天美生化儀器設(shè)備工程有限公司;TWS-24恒溫水浴鍋 上海喆圖科學(xué)儀器有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 試劑配制

    左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(78.8 μg/mL):準(zhǔn)確稱取20 mg于(102±2) ℃烘箱中烘干2 h的左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)品,用去離子水定容至250 mL容量瓶。

    左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別吸取左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00 mL于25 mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,混勻,該系列標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度分別為0.788、1.576、3.152、6.304、9.456、15.760 μg/mL,現(xiàn)用現(xiàn)配。

    乙酰輔酶A溶液:稱取20.0 mg乙酰輔酶A,溶于2.0 mL去離子水中?,F(xiàn)用現(xiàn)配。

    乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液:吸取100 μL乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶懸浮液,6 000 r/min離心10 min,棄去上層清液,沉淀用2 mL去離子水溶解?,F(xiàn)用現(xiàn)配。

    顯色儲(chǔ)備液:分別稱取50 mg 2-硝基苯甲酸、5.96 mgN-2-羥乙基哌嗪-2-乙烷磺酸、185 mg乙二胺四乙酸二鈉,溶于30 mL去離子水中,用10 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.4~7.6,然后用去離子水定容至50 mL。

    顯色工作液:吸取5.0 mL顯色儲(chǔ)備液,用去離子水定容至25 mL。

    1.3.2 樣品前處理

    準(zhǔn)確稱取5 g(精確至0.000 1 g)混合均勻的乳粉試樣于燒杯中,用30 mL 40 ℃溫水溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中,準(zhǔn)確加入0.25 gα-淀粉酶,混勻后于50 ℃水浴酶解30 min;取出冷卻,加入10 mL體積分?jǐn)?shù)13%高氯酸溶液,混勻靜置20 min;用蒸餾水定容至刻度,搖勻,用定量快速濾紙過濾。

    待測(cè)液制備:取濾液20 mL于50 mL離心管中,用4 mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH 12.5~13.0,置于40 ℃水浴60 min;取出冷卻后,先用體積分?jǐn)?shù)13%高氯酸溶液調(diào)節(jié)pH 9.5~10.0,再用體積分?jǐn)?shù)5%高氯酸溶液調(diào)節(jié)pH 7.0~7.5;將樣液移入50 mL容量瓶,用去離子水定容,將樣液置于4 ℃冰箱中過夜,取出放置至室溫,用一次性醫(yī)用注射器吸取上清液,通過0.45 μm水基膜過濾于50 mL離心管內(nèi),備用。

    1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及試樣測(cè)定

    分別吸取左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液和試樣待測(cè)液2 mL于1 cm比色皿中,依次加入0.8 mL顯色工作液和0.1 mL乙酰輔酶A溶液,用滴管混勻,置于分光光度計(jì)樣品槽,空白比色皿中放蒸餾水。將波長(zhǎng)設(shè)置為412 nm,5 min后歸零。迅速加入0.1 mL左旋肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液,混勻,反應(yīng)10 min后記錄吸光度。以左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品中左旋肉堿含量按下式計(jì)算。

    式中:ρ為從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣處理液質(zhì)量濃度/(μg/mL);V為濾液體積/mL;m為試樣質(zhì)量/g。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    采用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作曲線優(yōu)化

    與GB 29989—2013相比,本研究增加吸取0.25 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為0.788 μg/mL作為標(biāo)準(zhǔn)曲線第1點(diǎn)。依據(jù)GB 29989—2013,以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度分別為1.576、3.152、6.304、9.456、15.760 μg/mL繪制所得標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.055 3x+0.008 0(R2=999 9);以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度分別為0.788、1.576、3.152、6.304、9.456、15.760 μg/mL繪制所得標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.055 4x+0.005 6(R2=999 9),2 條標(biāo)準(zhǔn)曲線無明顯差異。標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.789~15.776 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。實(shí)際樣品檢測(cè)過程中,部分左旋肉堿含量低于7.5 mg/100 g的特殊醫(yī)學(xué)用途配方乳粉吸光度低于0.092 8(稱樣量5 g,吸光度0.090 9),導(dǎo)致結(jié)果不在第2條標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。質(zhì)量濃度最低點(diǎn)(0.788 μg/mL)吸光度8 次測(cè)定結(jié)果分別為0.046 2、0.046 1、0.046 1、0.045 9、0.046 2、0.046 0、0.045 9、0.046 3,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)為0.32%,表明該點(diǎn)吸光度穩(wěn)定。因此,對(duì)于低含量左旋肉堿樣品,檢測(cè)過程應(yīng)采用第2條標(biāo)準(zhǔn)曲線[21]。

    2.2 乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液制備轉(zhuǎn)速優(yōu)化

    實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶懸浮液經(jīng)1 500 r/min離心10 min,上清液未完全澄清,棄去上清液會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)移酶實(shí)際含量降低。

    研究乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶懸浮液離心轉(zhuǎn)速與上清液透光率的關(guān)系,透光率采用紫外-可見分光光度計(jì)直接測(cè)定。由圖1可知,隨著轉(zhuǎn)速的增加,乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液的透光率明顯增大,轉(zhuǎn)速為5 500 r/min后趨于穩(wěn)定,因此確定6 000 r/min為最佳轉(zhuǎn)速。

    圖1 乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液透光率隨離心轉(zhuǎn)速的變化Fig. 1 Change in transmittance of acetylcarnitine transferase solution with centrifugal speed

    2.3 前處理?xiàng)l件優(yōu)化

    在檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)氨基酸配方、乳蛋白深度水解配方和部分水解配方特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉存在如下問題:經(jīng)高氯酸沉淀蛋白質(zhì)后試樣溶液過濾困難,影響實(shí)驗(yàn)效率;制得試樣備用液顏色較深,影響吸光度測(cè)定;加標(biāo)回收率較低等。原因是樣品配料中添加的麥芽糊精黏度較大,會(huì)附著濾紙孔,導(dǎo)致過濾速度較慢和濾液渾濁;同時(shí)高氯酸沉淀劑不能將其沉淀下來,堵塞濾紙孔,導(dǎo)致過濾較慢且濾液渾濁[21-25]。因此,通過向試樣中加入淀粉酶以消除麥芽糊精的影響,本研究通過優(yōu)化確定淀粉酶最優(yōu)添加量及其最佳水解溫度和水解時(shí)間。

    2.3.1 淀粉酶添加量

    5 g(精確至0.000 1 g)混合均勻的乳粉,測(cè)定淀粉酶添加量分別為0、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40 g時(shí)濾液的透光率。由圖2可知,隨著淀粉酶添加量的增加,樣液透光率顯著增大,并于淀粉酶添加量0.20 g之后趨于穩(wěn)定,因此確定0.25 g為最佳淀粉酶添加量。

    圖2 樣液透光率隨淀粉酶添加量的變化Fig. 2 Change in light transmittance of sample solution with the amount of enzyme added

    2.3.2 水解溫度

    測(cè)定水解溫度分別為30、35、40、45、50、60、70、80 ℃時(shí)濾液的透光率。由圖3可知,樣液的透光率隨著水解溫度的增加不斷增大,并且在45 ℃時(shí)基本趨于穩(wěn)定,考慮到特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉復(fù)雜基質(zhì)的影響,確定最佳水解溫度為50 ℃。

    圖3 樣液透光率隨水解溫度的變化Fig. 3 Change in light transmittance of sample solution with hydrolysis temperature

    2.3.3 水解時(shí)間

    測(cè)定水解時(shí)間分別為10、15、20、25、30、40、50、60 min時(shí)樣液的透光率。由圖4可知,隨水解時(shí)間的延長(zhǎng),樣液透光率逐漸增大,并在20 min后逐漸趨于穩(wěn)定??紤]到特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉復(fù)雜基質(zhì)的影響,確定最佳水解時(shí)間為30 min。

    圖4 樣液透光率隨水解時(shí)間的變化Fig. 4 Change in light transmittance of sample solution with hydrolysis time

    因此,特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉最佳實(shí)驗(yàn)條件為:標(biāo)準(zhǔn)曲線以0.25 mL為最低點(diǎn),乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶懸浮液離心轉(zhuǎn)速為6 000 r/min,添加α-淀粉酶0.25 g,在50 ℃時(shí)水解30 min。

    2.4 實(shí)際樣品測(cè)定

    選取普通嬰幼兒配方乳粉、氨基酸配方、乳蛋白深度水解配方和部分水解配方特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉,采用GB 29989—2013方法和本研究?jī)?yōu)化后方法測(cè)定左旋肉堿含量,并計(jì)算RSD。

    由表1可知,對(duì)于普通嬰兒配方乳粉,國(guó)標(biāo)法測(cè)得左旋肉堿平均值為18.925 mg/100 g,RSD為2.36%,優(yōu)化法測(cè)得平均值為19.063 mg/100 g,RSD為2.29%。2 種方法測(cè)得數(shù)值基本一致,且滿足GB 29989—2013規(guī)定要求。對(duì)于氨基酸配方乳粉,國(guó)標(biāo)法測(cè)得左旋肉堿平均值為7.875 mg/100 g,RSD為14.3%;優(yōu)化法測(cè)得平均值為9.213 mg/100 g,RSD為3.71%。對(duì)于乳蛋白深度水解配方乳粉,國(guó)標(biāo)法測(cè)得左旋肉堿平均值為6.275 mg/100 g,RSD為8.57%;優(yōu)化法測(cè)得平均值為7.125 mg/100 g,RSD為2.57%。對(duì)于乳蛋白部分水解配方乳粉,國(guó)標(biāo)法測(cè)得左旋肉堿平均值為9.938 mg/100 g,RSD為14.0%;優(yōu)化法測(cè)得平均值為11.825 mg/100 g,RSD為3.93%。說明對(duì)于此3 種類型特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉,采用優(yōu)化后的方法,樣品測(cè)定精密度才符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的要求[26]。

    表1 2 種前處理方法測(cè)得的左旋肉堿含量(n=8)Table 1 Contents of L-carnitine in infant formula samples determined by traditional and optimized methods (n = 8)

    2.5 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

    選取普通嬰兒配方乳粉、氨基酸配方、乳蛋白深度水解配方、乳蛋白部分水解配方特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)定。

    由表2可知,在3 個(gè)不同的加標(biāo)水平下,對(duì)于普通嬰兒配方乳粉,國(guó)標(biāo)法平均加標(biāo)回收率為92.475%~99.800%,RSD為1.11%~3.43%,優(yōu)化法平均加標(biāo)回收率為93.813%~99.900%,RSD為1.36%~2.78%。說明對(duì)于普通嬰兒配方乳粉,國(guó)標(biāo)法樣品加標(biāo)回收率和RSD符合實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制要求[26]。對(duì)于氨基酸配方乳粉,國(guó)標(biāo)法平均加標(biāo)回收率為81.138%~84.175%,RSD為7.78%~8.69%;優(yōu)化法平均加標(biāo)回收率為94.138%~100.100%,RSD為3.27%~4.12%。對(duì)于乳蛋白深度水解配方乳粉,國(guó)標(biāo)法平均加標(biāo)回收率為83.850%~86.975%,RSD為6.68%~7.97%;優(yōu)化法平均加標(biāo)回收率為100.288%~102.263%,RSD為2.68%~3.07%。對(duì)于乳蛋白部分水解配方乳粉,國(guó)標(biāo)法平均加標(biāo)回收率為73.950%~79.775%,RSD為4.06%~6.55%;優(yōu)化法平均加標(biāo)回收率為89.412%~92.088%,RSD為1.71%~3.50%。說明對(duì)于特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉,經(jīng)優(yōu)化法處理樣品的加標(biāo)回收率和RSD符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制要求[26]。

    表2 2 種前處理方法測(cè)得的加標(biāo)回收率(n=8)Table 2 Spiked recoveries of traditional and optimized methods (n = 8)

    3 結(jié) 論

    優(yōu)化一種特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉中左旋肉堿含量的測(cè)定方法。通過增加標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)、增大酶提取離心轉(zhuǎn)速、優(yōu)化前處理過程等手段,解決了氨基酸配方、乳蛋白深度水解配方和部分水解配方特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉試樣溶液過濾困難、測(cè)定液顏色較深影響吸光度測(cè)定和加標(biāo)回收率較低的問題。該方法可以縮短前處理時(shí)間,提高檢測(cè)效率,滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的要求。對(duì)于其他基質(zhì)配方的特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方乳粉,該方法的適用性還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

    猜你喜歡
    肉堿乳粉透光率
    牛、羊乳粉的DSC熱學(xué)性質(zhì)比較及摻假分析
    不同透光率果袋對(duì)黃冠梨雞爪病發(fā)生的影響
    河北果樹(2022年1期)2022-02-16 00:41:04
    光照強(qiáng)度對(duì)溫室栽培蒲公英風(fēng)味品質(zhì)的影響
    微生物法測(cè)定嬰幼兒乳粉葉酸含量的不確定度評(píng)估
    新疆伊犁馬乳粉脂肪酸組成和含量分析
    金屬光子晶體的可見光光譜特性
    肉堿為寶寶健康造福
    L-肉堿對(duì)熱應(yīng)激大鼠機(jī)體脂質(zhì)代謝的影響
    光線入射角及光照強(qiáng)度對(duì)日光溫室棚膜透光率的影響
    乳粉常見的質(zhì)量缺陷及其原因分析
    石屏县| 阿克| 炎陵县| 静海县| 绍兴市| 新蔡县| 凌源市| 平凉市| 蓬安县| 浮山县| 宾阳县| 馆陶县| 监利县| 镇宁| 日照市| 贵德县| 宜春市| 遵义县| 阳城县| 文山县| 湘阴县| 社旗县| 孟村| 南汇区| 交口县| 织金县| 饶河县| 永定县| 明溪县| 吉水县| 丹凤县| 永宁县| 宁夏| 襄垣县| 固安县| 鄂托克前旗| 武穴市| 上栗县| 阿鲁科尔沁旗| 张家口市| 峨边|