• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    胞外聚合物在腐敗希瓦氏菌處理鈾污染地下水中的作用

    2021-08-02 03:31:42黃鳳羽張海玲王永鵬易發(fā)成
    原子能科學(xué)技術(shù) 2021年8期
    關(guān)鍵詞:希瓦氏菌菌體

    黃鳳羽,張海玲,王永鵬,王 哲,*,易發(fā)成,曾 錚

    (1.西南科技大學(xué) 環(huán)境與資源學(xué)院,四川 綿陽 621010;2.中國工程物理研究院 材料研究所,四川 江油 621700)

    鈾礦開采和礦山尾礦會對鄰近地下水造成鈾污染,其鈾含量高達(dá)50 mg/L[1]。由于鈾的重金屬毒性和放射性危害,含鈾地下水的處理一直以來都受到廣泛關(guān)注。傳統(tǒng)的處理方式主要是物理化學(xué)方法(混凝沉淀法[2]、離子交換法[3]、吸附法[4]、膜分離法[5]等),在去除含鈾地下水的同時通常有難以再生或二次污染等缺點(diǎn)[6-7]。微生物原位處理技術(shù)有原料充足、成本低、處理效率高、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn),越來越受到人們的重視[8-10]。微生物對鈾的去除已有廣泛的研究,厭氧顆粒污泥[11]、硫酸鹽還原菌、希瓦氏菌和假單胞菌等[12-14]都被證明對降低地下水中的鈾濃度具有長期有效性。微生物固定鈾的4個基本機(jī)制為:1) 微生物將U(Ⅵ)還原沉淀為U(Ⅳ);2) 細(xì)胞對U(Ⅵ)的吸收和積累;3) 微生物細(xì)胞表面對鈾的吸附;4) 細(xì)胞釋放的無機(jī)磷酸鹽與U(Ⅵ)配位沉淀[15-17]。

    1 實(shí)驗

    1.1 主要試劑與儀器

    腐敗希瓦氏菌(22940),中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心;DOWEX MARATHON C陽離子交換樹脂(CER,20~50目)、乳酸鈉(99.0%),美國Sigma-Aldrich;UO2SO4·3H2O(99.99%),湖北楚盛威化工有限公司,配制成2 200 mg/L U(Ⅵ)儲備液。其他試劑均為市售分析純,所有溶液均采用Milli-Q水制備。

    模擬地下水溶液的配制參照文獻(xiàn)[11],包括礦物元素和微量元素,具體如下:NH4HCO3,5 mg/L;K2HPO4,2 mg/L;MgCl2,2.1 mg/L;Ca(OH)2,1 mg/L;酵母提取物,0.33 mg/L;H3BO3,0.5 μg/L;FeSO4·7H2O,28 μg/L;ZnSO4·7H2O,1.1 μg/L;CuSO4·5H2O,1.6 μg/L;MnSO4·H2O,2.5 μg/L;(NH4)6Mo7O24·4H2O,2.0 μg/L;KAl(SO4)2·12H2O,1.75 μg/L;CoSO4·7H2O,23.6 μg/L;NiSO4·6H2O,1.13 μg/L;Na2SeO3·5H2O,1 μg/L;Na2WO4·2H2O,5.2 μg/L;EDTA,10 μg/L。將模擬地下水溶液壓力滅菌20 min,冷卻至室溫后加入1 g/L NaHCO3溶液,將pH值調(diào)至7.0。U(Ⅵ)在地下水中的絡(luò)合形態(tài)主要是碳酸氫鹽結(jié)合態(tài),因此用NaHCO3溶液作為模擬地下水溶液的緩沖溶液[13],最后充氮?dú)?0 min除去溶解氧。

    NEXION 350電感耦合等離子體質(zhì)譜儀、Nicolet-5700傅里葉變換紅外光譜儀(FT-IR),美國Perkin Elmer公司;D3024臺式高速微量離心機(jī),美國賽洛捷克。

    1.2 腐敗希瓦氏菌培養(yǎng)

    在無菌條件下將保存的腐敗希瓦氏菌液按2%(體積分?jǐn)?shù))的接種量接到盛有培養(yǎng)基(組成為:胰蛋白胨,15 g;酵母提取物,5 g;氯化鈉,5 g;水,1 L)的錐形瓶內(nèi),再置于恒溫振蕩器中(30 ℃,150 r/min)培養(yǎng)18 h,培養(yǎng)好的菌液以8 000 r/min離心5 min,之后用0.1 mol/L NaCl溶液洗滌2次。

    1.3 腐敗希瓦氏菌對U(Ⅵ)的固定

    所有實(shí)驗均在氮?dú)鈼l件下進(jìn)行。具體步驟如下:1) 向50 mL血清瓶中加入20 mL模擬地下水溶液,再加入0.27 mL U(Ⅵ)儲備溶液,使體系U(Ⅵ)最終濃度為30 mg/L;2) 在上述溶液中依次加入腐敗希瓦氏菌和乳酸鈉,濃度分別為6×108mL-1和10 mmol/L;3) 充高純氮驅(qū)氧,用丁基橡膠塞和鋁密封件密封,溫度控制在(30±1) ℃;4) 在厭氧條件下定期用注射器從血清瓶中抽取0.5 mL菌體樣液進(jìn)行分析。反應(yīng)結(jié)束后,取10 mL混合液進(jìn)行EPS提取分析。每組實(shí)驗均進(jìn)行平行實(shí)驗,并設(shè)置不加腐敗希瓦氏菌的空白對照組。

    1.4 分析方法

    反應(yīng)后腐敗希瓦氏菌體中U(Ⅵ)和U(Ⅳ)的含量根據(jù)文獻(xiàn)[24-25]的方法,采用NaHCO3-HNO3連續(xù)萃取法對腐敗希瓦氏菌中固定的鈾進(jìn)行提取,其原理如圖1所示。在該方法中,NaHCO3萃取的是吸附/絡(luò)合的U(Ⅵ),而HNO3萃取的是不溶性U(Ⅳ)沉淀。在厭氧條件下定期用注射器從血清瓶中抽取0.5 mL菌體溶液,8 000 r/min離心分離5 min后,上清液過0.22 μm濾膜,記為U上清。剩余菌體細(xì)胞用厭氧0.1 mol/L NaCl溶液洗滌2次,去除菌體表面殘留的U(Ⅵ)后,再加入0.5 mL 1 mol/L厭氧NaHCO3溶液提取菌體中的U(Ⅵ),厭氧條件下放置過夜后離心分離,上清液記為UNaHCO3。最后,再加入0.5 mL 10% HNO3提取菌體中的U(Ⅳ),放置4 h后離心分離,上清液記為UHNO3。所有樣品均在5%HNO3中酸化保存,然后用ICP-MS測各組分濃度。

    圖1 腐敗希瓦氏菌中U的NaHCO3-HNO3萃取法提取原理Fig.1 Extraction principle of U from Shewanella putrefaciens by NaHCO3-HNO3 fractionation method

    1.5 EPS提取

    采用陽離子交換樹脂(CER)法、超聲波法和離心法3種方法提取EPS。反應(yīng)后的腐敗希瓦氏菌用0.1 mol/L厭氧NaCl溶液(使用前煮沸并通入氮?dú)怛?qū)氧)清洗2次,去除細(xì)胞表面的可溶性殘留物質(zhì),再用0.1 mol/L厭氧NaCl溶液懸浮至10 mL。所有EPS提取過程均在厭氧條件下進(jìn)行。

    CER法:離子交換樹脂可除去EPS和細(xì)胞之間的二價橋接離子,促使EPS從細(xì)胞表面脫附。取4 mL洗滌后的細(xì)胞懸浮液,按照70 g/g 的可揮發(fā)性懸浮物(VSS)標(biāo)準(zhǔn)稱取CER量,600 r/min攪拌提取1 h,以14 510 r/min離心20 min,上清液過0.22 μm濾膜。

    超聲波法:超聲波法提取EPS的原理是利用超聲波產(chǎn)生的壓力沖擊使EPS和細(xì)胞分離。取4 mL洗滌后的細(xì)胞懸浮液,置于超聲清洗器(150 W)中提取10 min,14 510 r/min離心20 min,上清液過0.22 μm濾膜。

    離心法:離心法提取EPS的原理主要是利用高速離心產(chǎn)生的重力場作用,使EPS和細(xì)胞分離。取2 mL洗滌后的細(xì)胞懸浮液,以14 510 r/min的速度離心20 min,上清液過0.22 μm濾膜。

    1.6 SP-ICP-MS分析EPS中的U

    用單顆粒ICP-MS(SP-ICP-MS)對過0.22 μm濾膜后的EPS提取液中的可溶性U和顆粒U進(jìn)行定量分析,并對顆粒U的粒徑分布進(jìn)行分析。在單顆粒模式下,可溶性鈾酰離子的信號與含鈾粒子的信號明顯不同。因此,EPS中礦物U的含量為總U濃度與可溶性U濃度的差值。為表征納米級鈾粒子的粒徑分布,用已知粒徑和顆粒濃度的納米銀(nanoComposix公司)作為標(biāo)準(zhǔn)粒子。單個膠體粒子進(jìn)入后會在等離子體焰矩內(nèi)被粒子化為離子簇,以瞬時信號的形式被質(zhì)譜檢測到。其中信號強(qiáng)度反映顆粒粒徑,信號頻率反映顆粒濃度。

    1.7 EPS反應(yīng)前后FT-IR分析

    將反應(yīng)前后的EPS冷凍干燥后進(jìn)行FT-IR分析,采用KBr壓片法,掃描波數(shù)為400~4 000 cm-1,掃描次數(shù)為10,分辨率為4 cm-1。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 腐敗希瓦氏菌對U(Ⅵ)的固定

    在腐敗希瓦氏菌固定U(Ⅵ)反應(yīng)過程中,對上清液中U的濃度(U上清)進(jìn)行測定,并分析實(shí)驗各階段菌體中的U含量(U菌體=UNaHCO3+UHNO3)和系統(tǒng)的物質(zhì)平衡(U系統(tǒng)=U上清+U菌體),結(jié)果示于圖2。UNaHCO3和UHNO3分別為吸附的U(Ⅵ)(如U(Ⅵ)離子、U(Ⅵ)-碳酸鹽礦物)和還原的U(Ⅳ)的濃度。由圖2可知,未加腐敗希瓦氏菌的空白組的U含量沒有明顯變化,說明U在實(shí)驗體系中沒有發(fā)生沉淀。上清液中U(Ⅵ)濃度隨時間的增加不斷下降,在0~28 h內(nèi)腐敗希瓦氏菌對鈾的去除速度最快,之后逐漸趨于平穩(wěn),最終的去除率為90.9%。由圖2還可看出,系統(tǒng)的U含量(U系統(tǒng))在反應(yīng)過程中沒有明顯變化,表明溶液中的U被腐敗希瓦氏菌固定,系統(tǒng)有很好的物質(zhì)平衡。由于碳酸氫鹽是地下水系統(tǒng)中廣泛存在的無機(jī)配體[26],所以本文著重模擬地下水碳酸氫根的體系。體系的初始pH值設(shè)定為7.0,但實(shí)驗中發(fā)現(xiàn),pH值隨反應(yīng)的進(jìn)行因腐敗希瓦氏菌消耗底物而有所下降,從7.0下降至6.2,處于弱酸性。對于酸度更大的環(huán)境(pH<6),這些材料可能也會適用,后續(xù)會進(jìn)行相關(guān)研究。

    圖2 腐敗希瓦氏菌固定U(Ⅵ)過程中U上清、U菌體和U系統(tǒng)隨時間的變化Fig.2 Usupernatant, Ucells and Usystem in U(Ⅵ) immobilization process by Shewanella putrefaciens

    NaHCO3-HNO3連續(xù)提取反應(yīng)過程中腐敗希瓦氏菌體的U(Ⅳ)和U(Ⅵ)含量的變化示于圖3。由圖3可知,UNaHCO3和UHNO3隨時間的增加而增加,說明腐敗希瓦氏菌至少可通過吸附/絡(luò)合和還原兩種方式固定U(Ⅵ)。菌體中的鈾含量由最初的(0.89±0.09) mg/L增加到(20.70±0.71) mg/L,與上清液中U減少的濃度大體一致,表明溶液中的U(Ⅵ)已被腐敗希瓦氏菌固定。在初始厭氧條件下(t<8 h時),UHNO3較低,這是由于腐敗希瓦氏菌在反應(yīng)初期對缺氧體系的適應(yīng)性調(diào)整,還原率較低,而隨著反應(yīng)的進(jìn)行表現(xiàn)出較好還原效果。UHNO3從最初的(0.11±0.03) mg/L增加到反應(yīng)結(jié)束時的(4.02±0.38) mg/L。以上結(jié)果表明,腐敗希瓦氏菌除吸附作用外還具有還原U(Ⅵ)的能力,可有效將地下水中的U(Ⅵ)還原為U(Ⅳ)。

    圖3 腐敗希瓦氏菌固定U(Ⅵ)過程中UNaHCO3和UHNO3隨時間的變化Fig.3 UNaHCO3 and UHNO3 in U(Ⅵ) immobilization process by Shewanella putrefaciens

    反應(yīng)過程菌體中U(Ⅳ)/U(Ⅵ)比的變化示于圖4。U(Ⅳ)/U(Ⅵ)比隨時間的推移逐漸增加,表明隨著反應(yīng)的進(jìn)行,腐敗希瓦氏菌對U的還原活性逐步被激發(fā)。此外,還說明大多數(shù)U(Ⅵ)在還原成U(Ⅳ)之前先與腐敗希瓦氏菌發(fā)生吸附反應(yīng),U(Ⅵ)與腐敗希瓦氏菌的吸附反應(yīng)較生物還原反應(yīng)快得多。

    圖4 腐敗希瓦氏菌固定U(Ⅵ)過程中U(Ⅳ)/U(Ⅵ)比的變化Fig.4 Variation of ratio of U(Ⅳ)/U(Ⅵ) in U(Ⅵ) immobilization process by Shewanella putrefaciens

    2.2 EPS中的鈾含量

    從腐敗希瓦氏菌中提取的EPS中U的含量在很大程度上取決于提取過程中EPS的提取效率和不溶性U(Ⅳ)的再溶解程度。采用CER法、超聲波法和離心法3種方法提取的EPS中U的含量和UEPS/TUcells比示于圖5。從圖5可看出,離心法和超聲法所得EPS中鈾含量(UEPS)較低,離心法中UEPS為(0.42±0.09) mg/L,超聲法中UEPS為(0.85±0.15) mg/L,這一結(jié)果與EPS提取效率[27]一致,由于其對EPS提取效率較低導(dǎo)致UEPS的含量低。對于CER法,UEPS在很大程度上取決于萃取時間。但隨著萃取時間的延長,不溶性U(Ⅵ)的再溶解也變得嚴(yán)重,在本研究小組之前的研究中,當(dāng)萃取時間為1 h、轉(zhuǎn)速為600 r/min時,U(Ⅵ)再溶解的程度是可接受的[24],CER法中UEPS為(2.91±0.22) mg/L,占腐敗希瓦氏菌固定總鈾量(TUcells=(20.7±0.71) mg/L)的(14.0±1.0)%。對比3種方法,離心法和超聲法的鈾提取效率低,不適用于EPS中鈾的種類和含量的測定,CER法得到的結(jié)果可能更接近EPS中的實(shí)際鈾含量。以上結(jié)果表明,用腐敗希瓦氏菌固定鈾時,EPS具有很強(qiáng)的富集能力,EPS中的鈾含量不可忽略。

    圖5 從腐敗希瓦氏菌中提取的EPS中的鈾含量和UEPS/TUcells比Fig.5 UEPS and UEPS/TUcells ratio of EPS solution extracted from Shewanella putrefaciens

    2.3 EPS中的顆粒鈾

    CER法適合用于表征EPS中的鈾含量及形態(tài)。EPS中可溶性鈾和顆粒鈾的百分比,以及顆粒鈾的粒徑分布列于表1。EPS中可溶性鈾的百分比在初始階段(t=8 h)明顯上升,然后隨著鈾固定反應(yīng)的進(jìn)行逐步下降,說明初始階段EPS中主要發(fā)生鈾酰離子的吸附,然后溶解態(tài)粒子逐步發(fā)生生物還原或生物礦化轉(zhuǎn)化為鈾顆粒。當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行到44 h時,顆粒鈾占EPS中固定總鈾量的66.6%,表明反應(yīng)結(jié)束時顆粒鈾是EPS中鈾的主要形式。這一結(jié)果與William等[28]的研究結(jié)果一致,ShewanellaoneidensisMR-1的EPS與U(Ⅵ)反應(yīng)形成了約3.0 nm的鈾礦。CER法提取的EPS中顆粒鈾較超聲法和離心法多,進(jìn)一步說明CER法對鈾的萃取效率較高。

    表1 EPS中可溶性鈾和顆粒鈾的百分比及顆粒鈾的粒徑Table 1 Fraction of soluble and particulate U and size of particulate U in EPS

    CER法提取的EPS中鈾顆粒的粒徑分布示于圖6。由圖6可見,鈾粒子隨時間的推移逐漸形成鈾顆粒并增大,顆粒數(shù)從3 144 mL-1增加到87 460 mL-1,平均粒徑從13.5 nm增加到126.9 nm。在腐敗希瓦氏菌固定U(Ⅵ)的初期,EPS中鈾顆粒的數(shù)量減少,平均粒徑增大,但EPS中鈾含量略有增加,表明較小的鈾粒子聚集并長大,在EPS中隨時間積累。需要注意的是,ICP-MS得到的鈾粒子的直徑以鈾原子計,不是含鈾粒子的真實(shí)直徑。然而由于鈾原子遠(yuǎn)大于磷、氧等原子,所以該直徑非常接近實(shí)際粒子的真實(shí)尺寸。

    圖6 CER法提取的EPS中鈾顆粒的粒徑分布Fig.6 Size distribution of nano-sized U particles in EPS extracts by CER method

    上述結(jié)果表明,腐敗希瓦氏菌的EPS在與U(Ⅵ)反應(yīng)后,含有鈾酰離子和鈾礦物,說明EPS固定U(Ⅵ)過程中發(fā)生了生物吸附和生物礦化作用。

    2.4 EPS對U(Ⅵ)的吸附機(jī)理

    圖7 EPS與鈾作用前后的紅外光譜Fig.7 FT-IR spectra of EPS before and after reaction with U(Ⅵ)

    3 結(jié)論

    1) 在處理過含鈾地下水的腐敗希瓦氏菌EPS中發(fā)現(xiàn)大量鈾,占腐敗希瓦氏菌固定鈾總量的(14.0±1.0)%(CER提取法)。

    2) SP-ICP-MS分析表明,EPS結(jié)合的鈾有兩種形態(tài):溶解態(tài)和顆粒態(tài)。除生物吸附外,生物礦化也有助于腐敗希瓦氏菌的EPS固定鈾。

    3) FT-IR分析結(jié)果說明,EPS吸附U(Ⅵ)時主要與EPS中的羧基官能團(tuán)結(jié)合。

    猜你喜歡
    希瓦氏菌菌體
    我國華東與華南地區(qū)養(yǎng)殖魚類遲緩愛德華氏菌分離株的多樣性分析
    希瓦古城模型為何成中國國禮
    華聲文萃(2022年11期)2022-06-10 05:13:44
    希瓦古城模型為何成中國國禮
    菌體蛋白精養(yǎng)花鰱高產(chǎn)技術(shù)探析
    海藻希瓦菌相關(guān)性感染的研究進(jìn)展
    東北酸菜發(fā)酵過程中菌體的分離與鑒定
    菌體蛋白水解液應(yīng)用于谷氨酸發(fā)酵的研究
    黃芩苷對一株產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌體內(nèi)外抗菌作用的研究
    飼料維生素C含量對半滑舌鰨抵抗遲緩愛德華氏菌感染的影響
    Tn7轉(zhuǎn)座子在大腸桿菌、遲鈍愛德華氏菌及鰻弧菌中的應(yīng)用
    女人久久www免费人成看片| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 欧美精品一区二区免费开放| 欧美精品av麻豆av| 色老头精品视频在线观看| 91字幕亚洲| 99国产精品免费福利视频| 精品福利永久在线观看| 国产麻豆69| 看免费av毛片| 老汉色∧v一级毛片| 久久亚洲精品不卡| 男女边摸边吃奶| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲国产欧美网| 999久久久精品免费观看国产| 一个人免费看片子| 国产一区二区激情短视频 | av线在线观看网站| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲人成电影免费在线| 免费在线观看日本一区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 岛国毛片在线播放| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久久久久久精品精品| 飞空精品影院首页| 女性生殖器流出的白浆| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 人妻一区二区av| 黄色视频,在线免费观看| 国产一区二区在线观看av| 国产1区2区3区精品| 麻豆乱淫一区二区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 黄片小视频在线播放| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 9色porny在线观看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 视频区欧美日本亚洲| 久久精品成人免费网站| 黄色a级毛片大全视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| kizo精华| 制服诱惑二区| 国产成人a∨麻豆精品| 男人舔女人的私密视频| 国产精品九九99| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美另类一区| 动漫黄色视频在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 女人精品久久久久毛片| 一区二区三区乱码不卡18| 国产精品影院久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产男女内射视频| 丝袜脚勾引网站| 久久狼人影院| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 精品国内亚洲2022精品成人 | 窝窝影院91人妻| 老司机靠b影院| 99精品欧美一区二区三区四区| 欧美日韩成人在线一区二区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 老司机靠b影院| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美日韩一级在线毛片| 精品卡一卡二卡四卡免费| 自线自在国产av| 免费高清在线观看日韩| 婷婷丁香在线五月| 日韩免费高清中文字幕av| videos熟女内射| 国产有黄有色有爽视频| 婷婷丁香在线五月| 丝袜脚勾引网站| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 国产主播在线观看一区二区| 男女下面插进去视频免费观看| 高清av免费在线| 9热在线视频观看99| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 日韩大码丰满熟妇| 国产av国产精品国产| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久久国产精品麻豆| 人人妻人人澡人人看| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲第一av免费看| 欧美精品一区二区大全| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久精品国产a三级三级三级| 午夜福利免费观看在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 在线观看免费高清a一片| 午夜免费成人在线视频| av网站免费在线观看视频| 精品一区在线观看国产| 久久人人97超碰香蕉20202| 90打野战视频偷拍视频| av网站在线播放免费| 一级a爱视频在线免费观看| 另类亚洲欧美激情| 美女主播在线视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 成人免费观看视频高清| 亚洲美女黄色视频免费看| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久ye,这里只有精品| 国产亚洲精品一区二区www | 久久久久视频综合| av国产精品久久久久影院| a级毛片黄视频| 嫩草影视91久久| 黄片小视频在线播放| 男女下面插进去视频免费观看| 国产麻豆69| 免费在线观看日本一区| 久久国产精品影院| 免费黄频网站在线观看国产| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 精品人妻1区二区| 51午夜福利影视在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 97精品久久久久久久久久精品| 国产不卡av网站在线观看| 中文欧美无线码| 国产成人a∨麻豆精品| 午夜福利视频在线观看免费| 午夜福利在线观看吧| 青春草亚洲视频在线观看| 婷婷色av中文字幕| 国产一区二区激情短视频 | 国产精品国产av在线观看| 91国产中文字幕| 日日夜夜操网爽| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产成人精品久久二区二区91| 国产精品偷伦视频观看了| svipshipincom国产片| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产又爽黄色视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 91国产中文字幕| 久久久精品94久久精品| 无限看片的www在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产又色又爽无遮挡免| 中国国产av一级| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 久久久久久久久久久久大奶| 欧美另类亚洲清纯唯美| 丁香六月欧美| 热re99久久精品国产66热6| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美日韩成人在线一区二区| av电影中文网址| 考比视频在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 咕卡用的链子| 久久久久久久大尺度免费视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 精品高清国产在线一区| 午夜福利视频精品| 丰满少妇做爰视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲精品成人av观看孕妇| 99久久人妻综合| 1024香蕉在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 女性被躁到高潮视频| 亚洲,欧美精品.| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 麻豆乱淫一区二区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美 日韩 精品 国产| 久久人妻熟女aⅴ| 久久影院123| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 男男h啪啪无遮挡| 久久亚洲精品不卡| 十分钟在线观看高清视频www| 狂野欧美激情性bbbbbb| 黄片小视频在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| tocl精华| 精品卡一卡二卡四卡免费| 人妻 亚洲 视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产主播在线观看一区二区| 最新在线观看一区二区三区| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产成人免费无遮挡视频| 啦啦啦免费观看视频1| 国产欧美日韩一区二区精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美激情极品国产一区二区三区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 免费高清在线观看视频在线观看| 在线观看舔阴道视频| 精品人妻在线不人妻| 国产极品粉嫩免费观看在线| 一二三四在线观看免费中文在| 一个人免费在线观看的高清视频 | 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 欧美xxⅹ黑人| 精品高清国产在线一区| 亚洲精品一二三| 欧美日韩福利视频一区二区| 少妇 在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频 | 在线观看一区二区三区激情| 日本一区二区免费在线视频| 韩国高清视频一区二区三区| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 欧美精品av麻豆av| 男人添女人高潮全过程视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 美女视频免费永久观看网站| 男女边摸边吃奶| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜福利,免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 老司机靠b影院| 天天操日日干夜夜撸| 日日爽夜夜爽网站| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲精品国产区一区二| 欧美xxⅹ黑人| av电影中文网址| 十八禁网站网址无遮挡| 中国国产av一级| 国产成人系列免费观看| 亚洲国产av新网站| 久久久久久人人人人人| 两性夫妻黄色片| 男人爽女人下面视频在线观看| 岛国毛片在线播放| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 男女边摸边吃奶| 一本久久精品| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 午夜福利一区二区在线看| 日韩制服骚丝袜av| 18禁观看日本| 大香蕉久久成人网| 国产精品99久久99久久久不卡| 大陆偷拍与自拍| 久久久久久久精品精品| 国产不卡av网站在线观看| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲精品在线美女| 亚洲精品自拍成人| 9热在线视频观看99| 大陆偷拍与自拍| 一级毛片女人18水好多| 蜜桃在线观看..| 亚洲精品乱久久久久久| videos熟女内射| 欧美日韩福利视频一区二区| 999精品在线视频| 交换朋友夫妻互换小说| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | av又黄又爽大尺度在线免费看| 999久久久国产精品视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 黄色毛片三级朝国网站| 精品少妇黑人巨大在线播放| 91大片在线观看| 免费少妇av软件| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 999久久久精品免费观看国产| 久久免费观看电影| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 性色av乱码一区二区三区2| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲视频免费观看视频| 多毛熟女@视频| 亚洲第一av免费看| 老司机午夜福利在线观看视频 | 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲精品国产一区二区精华液| 97在线人人人人妻| 午夜老司机福利片| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 欧美亚洲日本最大视频资源| 男女下面插进去视频免费观看| 一本综合久久免费| 黑丝袜美女国产一区| 久久 成人 亚洲| 91精品三级在线观看| av天堂久久9| 久热这里只有精品99| 精品欧美一区二区三区在线| 国产xxxxx性猛交| 欧美黄色淫秽网站| av在线老鸭窝| 操美女的视频在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美性长视频在线观看| 午夜福利,免费看| 成人国产av品久久久| 国产国语露脸激情在线看| 我的亚洲天堂| 黄色 视频免费看| 黄色视频,在线免费观看| 国产片内射在线| 国产深夜福利视频在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 中国国产av一级| 丁香六月天网| 欧美精品一区二区大全| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产真人三级小视频在线观看| 日韩大码丰满熟妇| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久狼人影院| 女警被强在线播放| 久久久久国产精品人妻一区二区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 老司机福利观看| 老司机靠b影院| 天堂中文最新版在线下载| 欧美大码av| 十八禁高潮呻吟视频| 一个人免费在线观看的高清视频 | 热99久久久久精品小说推荐| 制服人妻中文乱码| av欧美777| 欧美另类亚洲清纯唯美| 80岁老熟妇乱子伦牲交| svipshipincom国产片| 日韩精品免费视频一区二区三区| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产xxxxx性猛交| 91麻豆av在线| 久热这里只有精品99| 欧美中文综合在线视频| 国产不卡av网站在线观看| 正在播放国产对白刺激| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产av国产精品国产| 在线天堂中文资源库| av国产精品久久久久影院| 十八禁网站免费在线| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 岛国毛片在线播放| 国产99久久九九免费精品| 久久狼人影院| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲国产精品一区三区| 黄片小视频在线播放| 久久热在线av| 亚洲国产日韩一区二区| 午夜日韩欧美国产| 国产精品av久久久久免费| 美国免费a级毛片| 中文字幕人妻丝袜制服| 9热在线视频观看99| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 不卡av一区二区三区| 久久99一区二区三区| 丝袜脚勾引网站| 日韩人妻精品一区2区三区| 一二三四在线观看免费中文在| 视频在线观看一区二区三区| 久久久精品区二区三区| av福利片在线| videos熟女内射| 久久久久视频综合| 精品人妻在线不人妻| 正在播放国产对白刺激| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲国产欧美网| 国产精品av久久久久免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 窝窝影院91人妻| videosex国产| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 在线观看免费高清a一片| 老司机影院毛片| 高清欧美精品videossex| 51午夜福利影视在线观看| 手机成人av网站| 1024视频免费在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 香蕉国产在线看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产一区二区在线观看av| av在线老鸭窝| 高清在线国产一区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 男男h啪啪无遮挡| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 十八禁人妻一区二区| 国产成人欧美| 亚洲国产av影院在线观看| 日本91视频免费播放| 2018国产大陆天天弄谢| 宅男免费午夜| 黄色毛片三级朝国网站| 久久人妻熟女aⅴ| 精品福利观看| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲全国av大片| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲av国产av综合av卡| 欧美激情久久久久久爽电影 | videos熟女内射| 国产男人的电影天堂91| 热99久久久久精品小说推荐| 国精品久久久久久国模美| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久久久网色| 嫁个100分男人电影在线观看| 悠悠久久av| 日本vs欧美在线观看视频| 国产成人系列免费观看| 搡老乐熟女国产| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲专区字幕在线| 日韩人妻精品一区2区三区| 热re99久久精品国产66热6| 99久久国产精品久久久| 欧美97在线视频| 91大片在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 十八禁人妻一区二区| 欧美日韩亚洲高清精品| 狂野欧美激情性xxxx| 国产精品久久久人人做人人爽| 黄色怎么调成土黄色| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 日韩 亚洲 欧美在线| 91成人精品电影| 少妇的丰满在线观看| av视频免费观看在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 纯流量卡能插随身wifi吗| 最新在线观看一区二区三区| 他把我摸到了高潮在线观看 | 成年av动漫网址| 夜夜夜夜夜久久久久| 香蕉丝袜av| 亚洲专区国产一区二区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| svipshipincom国产片| 国产在线视频一区二区| 亚洲欧美清纯卡通| 午夜福利在线观看吧| 久久久久久人人人人人| 婷婷丁香在线五月| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 午夜福利影视在线免费观看| 最新的欧美精品一区二区| 飞空精品影院首页| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品99久久99久久久不卡| 久9热在线精品视频| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 曰老女人黄片| av福利片在线| 国产淫语在线视频| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 国产精品一二三区在线看| 成人黄色视频免费在线看| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 成人免费观看视频高清| 精品福利观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 男女无遮挡免费网站观看| 精品少妇久久久久久888优播| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 又大又爽又粗| 国产在线一区二区三区精| av网站在线播放免费| 国产在线视频一区二区| www日本在线高清视频| 青草久久国产| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲国产精品一区三区| 香蕉丝袜av| 国产精品一二三区在线看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 他把我摸到了高潮在线观看 | 91成人精品电影| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲九九香蕉| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲av男天堂| 欧美黄色片欧美黄色片| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 十八禁人妻一区二区| av在线app专区| 欧美少妇被猛烈插入视频| videosex国产| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久中文看片网| 一本久久精品| 欧美成狂野欧美在线观看| 丝袜喷水一区| 久久久久久久精品精品| 99国产精品一区二区蜜桃av | 激情视频va一区二区三区| 女人精品久久久久毛片| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲精品国产av成人精品| 中文欧美无线码| 午夜影院在线不卡| av在线播放精品| 久久99一区二区三区| 亚洲三区欧美一区| 夜夜夜夜夜久久久久| 人妻一区二区av| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 99精品久久久久人妻精品| 青春草视频在线免费观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 69av精品久久久久久 | 午夜福利在线免费观看网站| 欧美成人午夜精品| 各种免费的搞黄视频| 久久久久精品人妻al黑| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日韩中文字幕视频在线看片| 黄色视频不卡| 少妇 在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 99re6热这里在线精品视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 黑人操中国人逼视频| a在线观看视频网站| 少妇精品久久久久久久| av在线播放精品| 最近最新免费中文字幕在线| 极品少妇高潮喷水抽搐| 午夜免费鲁丝| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲伊人色综图| av天堂久久9| 天堂中文最新版在线下载| 国产高清视频在线播放一区 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 最新在线观看一区二区三区| 日本黄色日本黄色录像| 狂野欧美激情性bbbbbb| 日韩大片免费观看网站| 日韩三级视频一区二区三区| 97人妻天天添夜夜摸| 久久这里只有精品19| 人妻一区二区av| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 热99re8久久精品国产| 热99久久久久精品小说推荐| 国产精品久久久久成人av| 免费在线观看黄色视频的| 考比视频在线观看| 无限看片的www在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| kizo精华| 岛国在线观看网站| 亚洲国产av新网站| 日本精品一区二区三区蜜桃| 丝袜脚勾引网站| 女人精品久久久久毛片| 啦啦啦 在线观看视频| 99热全是精品| 亚洲精品乱久久久久久| 国产精品九九99| 国产精品一二三区在线看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产av精品麻豆| 欧美日韩黄片免| 欧美另类一区|