氧化苦參堿對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制

張冬麗,付瑞芳,孫桂霞

（河南大學(xué)淮河醫(yī)院婦科，河南 開(kāi)封475200）

宮頸癌是導(dǎo)致女性死亡的主要惡性腫瘤之一，早期治療以手術(shù)為主，中晚期輔助放化療治療。由于手術(shù)切除創(chuàng)傷較大，嚴(yán)重影響子宮功能，存在生育隱患，放化療費(fèi)用昂貴且常伴有多種并發(fā)癥，治療效果不甚理想［1］。氧化苦參堿（oxymatrine，OMT）是一種從苦豆子、苦參和山豆根等藥用植物中提取的喹嗪啶類(lèi)生物堿，具有抗氧化、抗炎、抗病毒和抗纖維化等廣泛藥理作用，不良反應(yīng)發(fā)生率低，安全性高，可通過(guò)改善細(xì)胞增殖與凋亡之間平 衡，緩 解 疾 病 發(fā) 展［2］。已 有 研 究［3-4］證 實(shí)：OMT具有抗腫瘤作用，對(duì)結(jié)腸癌和肝癌等腫瘤細(xì)胞具有一定殺傷作用，可應(yīng)用于臨床輔助抗癌治療。OMT對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖具有抑制作用［5］，但其具體作用機(jī)制尚不明確。本研究通過(guò)探討OMT對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用及其可能機(jī)制，為臨床開(kāi)發(fā)利用OMT治療宮頸癌奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、主要試劑和儀器 人宮頸癌SiHa細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。OMT（≥98%）購(gòu)自上海禾午生物科技有限公司，噻唑藍(lán)（MTT）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）和Hoechst33258購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，AnnexinⅤ-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司，兔抗人β-連環(huán)蛋白（β-catenin）一抗購(gòu)自美國(guó)Affinity公司，兔抗人細(xì)胞周期蛋白D1（cyclinD1）、B細(xì)胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma 2，Bcl-2）、Bcl-2相 關(guān)X蛋 白（Bcl-2 assaciated X protein，Bax）一抗和HRP偶連的二抗均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。FACSCalibu流式細(xì)胞儀系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)BD公司，ELX800全自動(dòng)酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Biotek公司，DYCP-31DN電泳儀購(gòu)自北京六一儀器廠。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) SiHa細(xì)胞復(fù)蘇后，接種于含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清、100 U·mL－1青霉素和100 mg·L－1鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中，置于體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁90%后進(jìn)行傳代，每2 d更換培養(yǎng)液，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取對(duì)數(shù)增殖期細(xì)胞。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組和干預(yù)方法 DDP用DMSO溶解成0.1 g·L－1濃度，OMT用DMSO稀釋成0.4、0.8和1.6 g·L－1濃度備用。取對(duì)數(shù)增殖期SiHa細(xì)胞，調(diào)整密度為5×103mL－1，接種于96孔板，為確保實(shí)驗(yàn)條件一致，使細(xì)胞處于同一種溶媒條件下，將細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、低劑量OMT組、中劑量OMT組和高劑量OMT組，培養(yǎng)24 h后，分別加入含DMSO和0.4、0.8及1.6 g·L－1OMT的RPMI 1640培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

1.4 Hoechst33258染色法觀察細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn) 培養(yǎng)24 h后，棄去培養(yǎng)基，PBS緩沖液沖洗，每孔加入500μL細(xì)胞固定液，常溫下固定15 min，PBS緩沖液清洗，加入Hoechst33258染色液（5 mg·L－1）500μL，避光染色30 min，PBS緩沖液沖洗，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn)。

1.5 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性 分別培養(yǎng)24、48和72 h后，每 孔 加 入5 g·L－1MTT溶 液0.02 mL，繼續(xù)孵育4 h后，棄去上清，每孔加入150μL DMSO，水平充分振蕩15 min，采用酶標(biāo)儀于570 nm處讀取吸光度（A）值，以A值表示細(xì)胞增殖活性。每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。

1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同細(xì)胞周期細(xì)胞百分率各組細(xì)胞調(diào)整濃度為1×105mL－1，接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)48 h后，0.25%胰酶消化細(xì)胞，1 000 r·min－1離心5 min（離心半徑8 cm），棄上清，4℃、PBS緩沖液漂洗2次，4℃、70%乙醇固定30 min，重復(fù)離心漂洗，RNA酶37℃孵育30 min，加入PI染液避光染色30 min，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同細(xì)胞周期細(xì)胞百分率。每組設(shè)5復(fù)孔。

1.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率各組細(xì)胞于6孔板培養(yǎng)48 h后，胰酶消化，PBS緩沖液沖洗，1 500 r·min－1離心5 min（離心半徑8 cm），棄去上清，加入2 mL PBS緩沖液離心5 min，棄上清，重復(fù)2次，500μL Binding Buffer重懸細(xì)胞，加入AnnexinⅤ-FITC和PI工作液各5μL，避光于室溫條件下染色10 min，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率，重復(fù)3次，取平均值。

1.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）法檢測(cè)細(xì)胞中β-catenin、cyclin D1、Bcl-2和Bax m RNA表達(dá)水平收集各組細(xì)胞，PBS緩沖液沖洗，按照TRIzol試劑盒說(shuō)明書(shū)提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，取逆轉(zhuǎn)錄模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系包括：模板cDNA 2μL，上下游引物各0.5μL，Taq DNA聚合酶10μL，雙蒸水7μL。擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性5 min；94℃變性5 s，60℃退火10 s，72℃延伸60 s，共45個(gè)循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，采用2－△△Ct法 計(jì) 算 各組細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1、Bcl-2和Bax mRNA表達(dá)水平。引物序列：β-catenin，正向5'-AAGCTAGCTTACGCTAACGTACGAA-3'，反向5'-ACCGTTACAGTGCGATCAACGTAAA-3'；cyclinD1，正向5'-AGCTAGCGCATCGTACGCGATGACGTA-3'，反向5'-ACGACGATCGATCGATACGATCGACCA-3'；Bcl-2，正向 5'-AGCTAGCGCATCGTACGCGATGACGTA-3'，反向5'-ACGACGATCGATCGATACGATCGACCA-3'；Bax，正 向5'-AGCTAGCGCATCGTACGCGATGACGTA-3'，反向5'-ACGACGATCGATCGATACGATCGACCA-3'； β-actin，正向5'-AAGCTAGCTTACGCTAACGTACGAA-3'，反向5'-ACCGTTACAGTGCGATCAACGTAAA-3'。

1.9 Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)水平收集各組細(xì)胞，PBS緩沖液沖洗，加入RIPA裂解細(xì)胞，12 000 r·min－1離心10 min（離心半徑12 cm），取上清，按照BCA試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定細(xì)胞蛋白濃度，制膠、上樣，進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，根據(jù)膠體大小裁剪PVDF膜，轉(zhuǎn)膜，晾干后，浸入5%脫脂奶粉，室溫封閉2 h，將PVDF膜浸入1∶1 000稀釋后的β-catenin、cyclinD1、Bcl-2和Bax一抗中，4℃過(guò)夜，取出PVDF膜，清洗后，浸入1∶2 000稀釋的二抗中，室溫孵育1 h，清洗PVDF膜，利用ECL顯色液顯色，采用Image J軟件分析各蛋白條帶灰度值，目的蛋白相對(duì)表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參β-actin蛋白條帶灰度值。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組細(xì)胞增殖活性、不同細(xì)胞周期細(xì)胞百分率、細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1、Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表達(dá)水平采用KS檢驗(yàn)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)均符合正態(tài)分布，以±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間樣本均數(shù)兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組SiHa細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn)熒光顯微鏡下可見(jiàn)：對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)完整，染色均勻，藍(lán)色熒光較弱；低劑量OMT組細(xì)胞形態(tài)較均勻，可見(jiàn)少量發(fā)出較強(qiáng)熒光的細(xì)胞，細(xì)胞發(fā)生解體，可見(jiàn)凋亡小體；中劑量OMT組細(xì)胞數(shù)量減少，形態(tài)皺縮，凋亡小體增多；高劑量OMT組藍(lán)色熒光明顯增多，細(xì)胞解體，核皺縮，凋亡小體數(shù)量明顯增多。見(jiàn)圖1。

圖1 各組SiHa細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn)（Hoechst33258，×200）Fig.1Morphology of cells in various groups(Hoechst33258,×200)

2.2 各組SiHa細(xì)胞增殖活性與對(duì)照組比較，不同時(shí)間點(diǎn)低、中和高劑量OMT組細(xì)胞增殖活性明顯降低（P＜0.05）；與低劑量OMT組比較，不同時(shí)間點(diǎn)中和高劑量OMT組細(xì)胞增殖活性明顯降低（P＜0.05）；與中劑量OMT組比較，不同時(shí)間點(diǎn)高劑量OMT組細(xì)胞增殖活性明顯降低（P＜0.05）。對(duì)照組細(xì)胞增殖活性隨著時(shí)間延長(zhǎng)而升高（P＜0.05），不同劑量OMT組細(xì)胞增殖活性隨時(shí)間延長(zhǎng)而降低（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞增殖活性Tab.1Proliferation activities of cells in various groups at different time points (n=5,±s)

表1 不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞增殖活性Tab.1Proliferation activities of cells in various groups at different time points (n=5,±s)

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with low dose of OMT group；#P＜0.05 compared with medium dose of OMT group；○P＜0.05 compared with 24 h；▲P＜0.05 compared with 48 h.

Group Control OMT Low dose Mediumdose High dose F P Proliferation activity（t/h）24 0.61±0.07 0.56±0.06*0.43±0.05*△0.32±0.05*△#25.383＜0.01 48 0.76±0.08○0.43±0.07*○0.34±0.06*△○0.23±0.04*△#○63.273＜0.01 72 0.93±0.06○▲0.32±0.04*○▲0.26±0.03*△○▲0.15±0.03*△#○▲350.952＜0.01

2.3 各組不同細(xì)胞周期SiHa細(xì)胞百分率與對(duì)照組比較，不同劑量OMT組G0/G1期細(xì)胞百分率明顯升高（P＜0.05），S期和G2/M期細(xì)胞百分率明顯降低（P＜0.05）；與低劑量OMT組比較，中和高劑量OMT組G0/G1期細(xì)胞百分率明顯升高（P＜0.05），S期和G2/M期細(xì)胞百分率明顯降低（P＜0.05）；與中劑量OMT組比較，高劑量OMT組G0/G1期細(xì)胞百分率明顯升高（P＜0.05），S期和G2/M期細(xì)胞百分率明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組不同細(xì)胞周期SiHa細(xì)胞百分率Tab.2Percentages of SiHa cells at different cell cycles in various groups (n=5,±s,η/%)

表2 各組不同細(xì)胞周期SiHa細(xì)胞百分率Tab.2Percentages of SiHa cells at different cell cycles in various groups (n=5,±s,η/%)

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with low dose of OMT group；#P＜0.05 compared with medium dose of OMT group.

Group Control OMT Low dose Medium dose High dose F P Percentage of SiHa cells G0/G1 51.29±5.86 59.15±6.15*69.26±7.16*△76.33±7.71*△#13.298＜0.01 S 34.25±3.51 29.43±3.23*24.32±2.94*△19.23±2.56*△#22.112＜0.01 G2/M 14.46±1.51 11.42±1.13*6.42±1.01*△4.44±0.82*△#79.984＜0.01

2.4 各組SiHa細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組比較，不同劑量OMT組細(xì)胞凋亡率明顯升高（P＜0.05）；與低劑量OMT組比較，中和高劑量OMT組細(xì)胞凋亡率明顯升高（P＜0.05）；與中劑量OMT組比較，高劑量OMT組細(xì)胞凋亡率明顯升高（P＜0.05）。見(jiàn)圖2和表3。

表3 各組SiHa細(xì)胞凋亡率Tab.3Apoptotic rates of SiHa cells in various groups(n=5,±s,η/%)

表3 各組SiHa細(xì)胞凋亡率Tab.3Apoptotic rates of SiHa cells in various groups(n=5,±s,η/%)

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with low dose of OMT group；#P＜0.05 compared with medium dose of OMT group.

Group Control OMT Low dose Medium dose High dose F P Apoptotic rate 1.12±0.37 9.53±0.85*16.37±1.52*△26.25±1.87*△#339.690＜0.01

2.5 各組SiHa細(xì)胞中β-catenin、cyclin D1、Bcl-2和Bax m RNA表達(dá)水平與對(duì)照組比較，不同劑量OMT組細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1和Bcl-2 mRNA表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），Bax mRNA表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；與低劑量OMT組比較，中和高劑量OMT組細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1、Bcl-2 mRNA表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），Bax mRNA表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；與中劑量OMT組比較，高劑量OMT組細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1和Bcl-2 mRNA表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），Bax mRNA表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

2.6 各組SiHa細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較，不同劑量OMT組細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1和Bcl-2蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），Bax蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；與低劑量OMT組比較，中和高劑量OMT組細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1和Bcl-2蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），Bax蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；與中劑量OMT組比較，高劑量OMT組細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1和Bcl-2蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），Bax蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。見(jiàn)表5和圖3。

3 討 論

宮頸癌患者早期無(wú)明顯臨床癥狀，進(jìn)入晚期后，病灶侵犯盆腔，患者表現(xiàn)為尿急和尿頻等癥狀，可累及輸卵管導(dǎo)致梗阻，甚至引起尿毒癥，伴隨腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖，患者出現(xiàn)全身衰竭，危及生命［6-7］。宮頸癌發(fā)展過(guò)程復(fù)雜，由宮頸上皮內(nèi)瘤病變逐漸發(fā)展成浸潤(rùn)癌，與人乳頭瘤狀病毒、感染和不潔性生活史等因素有關(guān)，并可發(fā)生盆腔臟器浸潤(rùn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，增加患者死亡率［8-9］。中藥及其有效成分在保證治療效果前體下，用量及不良反應(yīng)均較小，在抗腫瘤方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)［10-12］。OMT抗腫瘤作用已被證實(shí)，本研究采用不同劑量OMT干預(yù)SiHa細(xì)胞，Hoechst33258染色結(jié)果顯示：SiHa細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，凋亡小體增加，證實(shí)OMT對(duì)SiHa細(xì)胞具有抑制作用。

腫瘤細(xì)胞異常無(wú)限增殖是其主要惡性生物學(xué)行為之一，細(xì)胞過(guò)度增殖，導(dǎo)致生長(zhǎng)失控，形成腫瘤，并快速惡性生長(zhǎng)向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究采用MTT法檢測(cè)OMT對(duì)SiHa細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果顯示：不同劑量OMT干預(yù)后，細(xì)胞增殖率均明顯降低，且呈現(xiàn)時(shí)間-劑量依賴(lài)性，與LIU等［13］對(duì)胃癌細(xì)胞和JUNG等［14］對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞研究結(jié)果一致，表明OMT可抑制SiHa細(xì)胞增殖。

表4 各組SiHa細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1、Bcl-2和Bax m RNA表達(dá)水平Tab.4Expression levels ofβ-catenin,cyclinD1,Bcl-2 and Bax mRNA in SiHa cells in various groups (n=5，±s）

表4 各組SiHa細(xì)胞中β-catenin、cyclinD1、Bcl-2和Bax m RNA表達(dá)水平Tab.4Expression levels ofβ-catenin,cyclinD1,Bcl-2 and Bax mRNA in SiHa cells in various groups (n=5，±s）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with low dose of OMT group；#P＜0.05 compared with medium dose of OMT group.

Group Control OMT Low dose Medium dose High dose F P β-catenin mRNA 1.63±0.15 1.25±0.13*0.86±0.11*△0.65±0.09*△#63.029＜0.01 CyclinD1 mRNA 1.47±0.13 1.16±0.12*0.81±0.10*△0.63±0.09*△#56.447＜0.01 Bcl-2 mRNA 1.76±0.17 1.49±0.14*1.13±0.13*△0.84±0.12*△#40.777＜0.01 Bax mRNA 1.06±0.13 1.38±0.15*1.62±0.16*△1.87±0.16*△#26.348＜0.01

表5 各組SiHa細(xì)胞中β-catenin、cyclin D1、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)水平T ab.5Expression levels ofβ-catenin,cyclinD1,Bcl-2 and Bax proteins in SiHa cells in various groups (n=5，±s）

表5 各組SiHa細(xì)胞中β-catenin、cyclin D1、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)水平T ab.5Expression levels ofβ-catenin,cyclinD1,Bcl-2 and Bax proteins in SiHa cells in various groups (n=5，±s）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with low dose of OMT group；#P＜0.05 compared with medium dose of OMT group.

Group Control OMT Low dose Medium dose High dose F P β-catenin protein 1.13±0.11 0.75±0.09*0.61±0.08*△0.43±0.06**△58.455＜0.01 CyclinD1 protein 1.02±0.10 0.78±0.08*0.65±0.07*△0.45±0.07*△#43.588＜0.01 Bcl-2 protein 0.93±0.10 0.75±0.08*0.62±0.07*△0.45±0.07*△#31.469＜0.01 Bax protein 0.61±0.06 0.72±0.07*0.85±0.08*△1.03±0.09*△#28.370＜0.01

圖3 各組SiHa細(xì)胞中β-catenin、cyclin D1、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)電泳圖Fig.3Electrophoregramofexpressionsβ-catenin,cyclin D1,Bcl-2 and Bax proteins in various groups

細(xì)胞周期調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和死亡過(guò)程，細(xì)胞周期改變影響細(xì)胞增殖和分裂。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞自主性死亡方式之一，通過(guò)基因調(diào)控實(shí)現(xiàn)自主性和程序性死亡。細(xì)胞發(fā)生凋亡失去生命力，被機(jī)體有效清除，維持細(xì)胞生成與破壞之間動(dòng)態(tài)平衡。腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖與細(xì)胞凋亡減少有關(guān)，通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，是藥物實(shí)現(xiàn)抗腫瘤的重要機(jī)制之一［15］。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SiHa細(xì)胞周期變化及凋亡情況的結(jié)果顯示：G0/G1期細(xì)胞百分率和細(xì)胞凋亡率隨著OMT濃度增加而升高，表明OMT可將SiHa細(xì)胞阻滯于G1期，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

Wnt/β-catenin通路參與調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移、黏附和凋亡等過(guò)程，正常情況下處于關(guān)閉狀態(tài)，β-catenin是通路主要信號(hào)分子，其水平下降，通路關(guān)閉，反之通路開(kāi)啟，癌基因或β-catenin突變均可導(dǎo)致Wnt通路激活，參與腫瘤發(fā)生發(fā)展［16-17］。cyclinD1是β-catenin下游主要靶基因，β-catenin激活后，可誘導(dǎo)cyclinD1表達(dá)增加，縮短細(xì)胞G1期，促進(jìn)細(xì)胞不斷增殖［18］。Bcl-2和Bax同屬于Bcl-2家族，兩者形成同源二聚體可誘導(dǎo)凋亡，形成異源二聚體可抑制細(xì)胞凋亡，參與調(diào)控細(xì)胞凋亡。Wnt/β-catenin通路在卵巢癌、乳腺腺癌等婦科惡性腫瘤中被過(guò)度激活，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展［19-20］。為明確OMT誘導(dǎo)SiHa細(xì)胞凋亡的機(jī)制，本研究進(jìn)一步采用RT-qPCR和Western blotting法檢測(cè)Wnt/β-catenin通路及凋亡相關(guān)因子mRNA和蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示：對(duì)照組Wnt通路激活，不同濃度OMT干預(yù)后，Wnt通路受到不同程度抑制，同時(shí)Bcl-2表達(dá)水平明顯降低，Bax表達(dá)水平明顯升高，提示OMT抑制SiHa細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡，可能是通過(guò)阻斷Wnt/β-catenin通路發(fā)揮作用。以Wnt通路關(guān)鍵分子β-catenin和cyclinD1等作為抗腫瘤治療靶點(diǎn)，從不同水平阻滯Wnt/β-catenin通路，對(duì)于抗腫瘤藥物的研發(fā)及設(shè)計(jì)具有積極意義［21］。

綜上所述，OMT可抑制人宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖，可將細(xì)胞阻滯在G1期，并能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與抑制Wnt/β-catenin通路有關(guān)。本研究結(jié)果為臨床開(kāi)發(fā)OMT相關(guān)產(chǎn)品治療宮頸癌提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但其確切機(jī)制尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。