桉葉油抗金黃地鼠皮脂腺斑增生的研究

魏露　朱明芳

〔摘要〕 目的 觀察桉葉油對(duì)金黃地鼠皮脂腺斑的影響，探討外用桉葉油乳膏治療痤瘡的機(jī)制。方法 將24只雄性金黃地鼠隨機(jī)分為空白組、基質(zhì)組、桉葉油乳膏組、陽(yáng)性對(duì)照組，每組6只，分別于雙側(cè)皮脂腺斑處涂抹蒸餾水、基質(zhì)、桉葉油乳膏、0.025%維A酸乳膏，連續(xù)給藥4周后，觀察各組金黃地鼠皮脂腺斑面積變化及組織病理學(xué)改變。結(jié)果 給藥后，與空白組、基質(zhì)組相比，各治療組金黃地鼠同側(cè)皮脂腺斑面積均減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），同時(shí)皮脂腺厚度減少，腺體萎縮，腺葉數(shù)量減少，排列疏松;與陽(yáng)性對(duì)照組相比，桉油乳膏組右側(cè)皮脂腺斑的面積縮小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），同時(shí)皮脂腺腺體較小，排列松散。結(jié)論 桉葉油能有效抑制皮脂腺增生，可能是其治療痤瘡的作用機(jī)制之一。

〔關(guān)鍵詞〕 皮脂腺斑;痤瘡;桉葉油;金黃地鼠

〔中圖分類號(hào)〕R285.5? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.03.006

〔Abstract〕 Objective To observe the effect of eucalyptus oil on sebaceous gland spots in golden hamsters， and explore the mechanism of external use of eucalyptus oil cream in the treatment of acne. Methods 24 male golden hamsters were randomly divided into blank group， matrix group， eucalyptus oil cream group and positive control group， with 6 rats in each group. Distilled water， matrix， eucalyptus oil cream and 0.025% vitamin A cream were applied to bilateral sebaceous gland spots. After continuous treatment for 4 weeks， the change of sebaceous gland spots area of golden hamster in each group and histopathological changes were observed. Results After administration， compared with blank group and matrix group， the ipsilateral sebaceous plaque area of golden hamsters in each treatment group decreased， and the difference was statistically significant （P<0.05）. At the same time， the thickness of sebaceous gland spots decreased， the gland atrophic， the number of glandular leaves decreased， and the arrangement was loose. Compared with the positive control group， the area of sebaceous spots on the right side of the eucalyptus oil cream group was reduced， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Meanwhile， the sebaceous gland spots were small and loosely arranged. Conclusion Eucalyptus oil can effectively inhibit sebaceous gland spots hyperplasia， which may be one of the mechanisms of acne treatment.

〔Keywords〕 eucalyptus oil; acne; golden hamsters; sebaceous gland spots

痤瘡是多因素介導(dǎo)的毛囊皮脂腺單位的慢性炎癥性皮膚病，多發(fā)生于油性皮膚[1]。由于發(fā)病率高、局部疼痛和永久性疤痕的產(chǎn)生，對(duì)患者的社交、心理健康造成了極大的影響。調(diào)查顯示，痤瘡患者的依從性及治療滿意度并不理想[2]。目前尚無(wú)理想藥物滿足臨床需求，因此，尋找療效確切、安全性高的藥物，是皮膚科同道共同努力的方向。桉葉油是桃金娘科植物藍(lán)桉、樟科植物樟或是上述兩科同屬其他植物經(jīng)水蒸氣蒸餾得到的揮發(fā)油，有特殊的芳香氣味。桉葉油具有抗菌、抗氧化、保濕、修復(fù)皮膚屏障、促滲、殺蟲及防腐等作用[3-6]，在醫(yī)藥、化妝品、食品加工等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。課題組前期研究表明桉葉油對(duì)痤瘡丙酸桿菌（Cutibacterium acnes， C. acnes）具有抑制作用[7]。動(dòng)物皮膚毒理實(shí)驗(yàn)顯示40%桉葉油無(wú)刺激性、急性毒性、過(guò)敏性，安全性高[4]。在此基礎(chǔ)上，課題組成功申請(qǐng)了專利：一種桉葉乳膏及其制備方法（專利號(hào)：ZL201510367377.5）?；诹己玫拇贊B透性，桉葉油在平衡皮脂穩(wěn)態(tài)中極具潛力。皮脂是由皮脂腺脂質(zhì)和細(xì)胞間脂質(zhì)組成的混合物，主要由皮脂腺分泌。本研究以雙側(cè)腹部出現(xiàn)皮脂腺斑的金黃地鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，初步探討桉葉油對(duì)皮脂腺斑組織形態(tài)學(xué)的影響。

1 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1? 動(dòng)物? 雄性SPF級(jí)金黃地鼠24只[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0011]，體質(zhì)量110～130 g，由中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.1.2? 主要藥物與試劑? 桉葉油（批號(hào)：20190612，吉安市青原區(qū)惜緣香料油有限公司）;自制桉葉油乳膏，其制作方法及步驟參考課題組的前期研究[7]。10%水合氯醛（分析純，上海山浦化工有限公司）;蘇木素-伊紅染色液（貨號(hào)：3201121，2 500 mL，廣州維格斯生物科技有限公司）;0.025%維A酸乳膏（商品名：迪維，規(guī)格：15 g/支，重慶華邦制藥有限公司）

1.1.3? 主要儀器? JK-6生物組織攤烤片機(jī)（武漢俊杰電子有限公司）;輪轉(zhuǎn)石蠟切片機(jī)[型號(hào)：RM2235，徠卡顯微系統(tǒng)（上海）貿(mào)易有限公司];冰箱（型號(hào)：BCD-226SKA，青島海爾股份有限公司）;顯微鏡（型號(hào)：DM2000 LED，德國(guó)Leica公司）。

1.2? 分組與給藥

受試動(dòng)物按隨機(jī)數(shù)字表分為空白組、基質(zhì)組、桉葉油乳膏組[0.65 g生藥/（kg·d）]、陽(yáng)性對(duì)照組[0.025%維A酸乳膏，5.24 g/（kg·d）]，給藥方法為外用，給藥部位為雙側(cè)皮脂腺斑處，2次/d，連續(xù)用藥4周?？瞻捉M不予任何藥物處理。《中藥大辭典》中桉葉的用法用量：“內(nèi)服：煎湯，6～15 g;或研末，每次1 g，每日4次。”根據(jù)人和金黃地鼠的等效劑量換算公式[8-9]：

非標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量劑量（Db）=標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量劑量（Da）×換算系數(shù)（Rab）×校正系數(shù)（Sb）。

得金黃地鼠桉葉油乳膏的等效劑量為0.65 g/kg。

1.3? 皮脂腺斑大小測(cè)量

給藥前及末次給藥24 h后，用剃須刀剔除金黃地鼠雙側(cè)側(cè)腹部毛發(fā)，使皮脂腺斑充分暴露，金黃地鼠取俯臥位，在強(qiáng)光照射下，用照相機(jī)以同一焦距記錄皮脂腺斑大體照片，并用游標(biāo)卡尺測(cè)量并記錄皮脂腺斑的最大橫徑（DT）、最大縱徑（DL），計(jì)算DT×DL。

1.4? 組織病理學(xué)

末次用藥24 h后，剪下每組鼠左側(cè)腹部皮脂腺斑，放入10%甲醛固定液中固定，經(jīng)脫水、石蠟包埋、切片、HE染色后，光鏡下觀察組織病理學(xué)變化。

1.5? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用“x±s”表示，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布及方差齊性時(shí)，組間多重比較采用單因素方差分析，并以LSD法進(jìn)行兩兩比較，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 皮脂腺斑面積比較

治療前，空白組、基質(zhì)組、桉葉油乳膏組、陽(yáng)性對(duì)照組4組皮脂腺斑大小比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。治療后，各組皮脂腺斑大小較治療前均增大，考慮與飼養(yǎng)致體表面積增大有關(guān)。治療后，與空白組相比，陽(yáng)性對(duì)照組和桉葉油乳膏組同側(cè)皮脂腺斑面積均明顯縮小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與陽(yáng)性對(duì)照組相比，桉葉油乳膏組右側(cè)皮脂腺斑的面積縮小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。詳見(jiàn)表1、圖1。

2.2? 組織病理學(xué)觀察

空白組：金黃地鼠皮脂腺呈多層分葉狀，腺體體積大，排列緊密;基質(zhì)組：部分皮脂腺較大，排列較厚;桉葉油乳膏組：皮脂腺腺體萎縮，較空白組數(shù)量減少，排列疏松，出現(xiàn)液化小囊;陽(yáng)性對(duì)照組：皮脂腺腺葉小，排列松散。詳見(jiàn)圖2。

3 討論

痤瘡病因復(fù)雜，傳統(tǒng)觀念認(rèn)為其發(fā)病與痤瘡丙酸桿菌感染引起的炎癥反應(yīng)、雄激素誘導(dǎo)的皮脂分泌過(guò)量、毛囊角化過(guò)度、遺傳等因素有關(guān)[11-12]。隨著生活水平的提高，國(guó)人的飲食習(xí)慣正在向西方飲食轉(zhuǎn)變，其特點(diǎn)是紅肉、含糖飲料的攝入增加，同時(shí)，谷類、蔬菜的攝入減少[13]。最新研究[14-16]表明，痤瘡是一種發(fā)生于毛囊皮脂腺的代謝綜合征。皮脂含量增加、皮脂成分改變等皮脂穩(wěn)態(tài)失衡與痤瘡發(fā)病密切相關(guān)[17-18]。皮脂腺是痤瘡的主要靶器官，其結(jié)構(gòu)變化對(duì)皮脂分泌功能的影響巨大。課題組前期研究表明桉葉油對(duì)C. acnes有良好的抑菌活性[7]，根據(jù)痤瘡的發(fā)病機(jī)制，現(xiàn)進(jìn)一步研究其對(duì)皮脂腺斑組織形態(tài)學(xué)的影響。

桉葉別名桉樹(shù)葉、藍(lán)桉葉、羊草果葉，其味辛、涼，《中華本草》謂“疏風(fēng)解表、清熱解毒;化痰理氣、殺蟲止癢”。Lin等[19]通過(guò)芳香療法，發(fā)現(xiàn)桉葉油可以抗疲勞、抗氧化、抗炎。同時(shí)，Alam等[20]研究表明在大鼠燒傷模型中桉葉油納米乳具有促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)的優(yōu)勢(shì)。為了防止皮脂分泌過(guò)量堵塞毛孔、影響皮膚屏障，Isoda等[21]研發(fā)了含有外源神經(jīng)酰胺及桉葉提取物的弱酸性溫和泡沫潔面乳用于痤瘡患者的護(hù)理，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，痤瘡患者經(jīng)皮水分丟失量顯著下降，神經(jīng)酰胺水平顯著增加，癥狀改善明顯。

金黃地鼠側(cè)腹部皮脂腺斑的生物學(xué)特征與人相似，是國(guó)內(nèi)外學(xué)者公認(rèn)的研究藥物抗雄激素及皮脂腺增生活性的動(dòng)物模型[22-23]。金黃地鼠皮腺腺斑面積與雄激素含量有關(guān)，可以反應(yīng)藥物作用強(qiáng)弱。本研究結(jié)果顯示，與空白組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、桉葉油乳膏能使皮脂腺斑面積縮小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，與陽(yáng)性對(duì)照組相比，桉葉油乳膏減少金黃地鼠皮脂腺斑大小的作用更強(qiáng)。組織病理學(xué)結(jié)果顯示，桉葉油乳膏能使皮脂腺體積、厚度、腺層、數(shù)目減少，腺體萎縮，組織結(jié)構(gòu)改變明顯。因此，桉葉油具有抑制皮脂腺增生的作用，使皮脂腺斑萎縮，進(jìn)而發(fā)揮防治痤瘡的作用。

本研究以金黃地鼠皮脂腺斑面積及組織病理學(xué)變化直觀地反映了桉葉油對(duì)痤瘡的治療作用，結(jié)果表明桉葉油其能夠有效抗皮脂腺斑增生，然而其對(duì)皮脂分泌的影響及防治痤瘡的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)。

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