加熱炒制對韭菜子出膏率、粉碎率及6種核苷類物質(zhì)含量動態(tài)影響的研究

吳文輝，劉 霞，郭小紅，李 杰，商思陽

（重慶市中醫(yī)院 藥劑科，重慶 400021）

“逢子必炒”是傳統(tǒng)中藥炮制理論的一部分。其目的是使種子或果實類的藥材經(jīng)過加熱炒制后種殼或果皮破裂，易于粉碎和有效成分煎出，從而更好的發(fā)揮臨床療效。據(jù)學(xué)者考證，此理論起源于明?羅周彥《醫(yī)宗粹言》，曰：“決明子、蘿卜子、芥子、蘇子、韭子、青箱子，凡藥中用子者，俱要炒過，研碎入煎，方得味出，若不碎，如米之在谷，雖煮之終日，米豈能出哉”[1]。然而，加熱炒制雖可利用高溫破壞種殼或果皮，使其產(chǎn)生裂隙，但溫度是否對藥物所含的物質(zhì)基礎(chǔ)有影響，尚缺乏客觀的數(shù)據(jù)證明[2]。故本文以韭菜子為研究對象，以粉碎過篩率、出膏率和主要藥效物質(zhì)含量為指標(biāo)，研究在加熱炒制過程中的動態(tài)變化規(guī)律，擬為“逢子必炒”的傳統(tǒng)中藥炮制理論提供客觀實驗依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260 infinity II型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技公司）；Sartorius SQP型十萬分之一電子天平（德國賽多利斯公司）；New Classic MF MS205DU型萬分之一電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 試劑

甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

1.3 試藥

韭菜子購買于重慶桐君閣股份有限公司，經(jīng)重慶市中醫(yī)研究院中藥制劑研究所楊敏主任中藥師鑒定為百合科植物韭菜Allium tuberosumRottl.的干燥成熟種子。尿嘧啶（中國食品藥品檢定研究院，批號：100469-201302）；尿苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：110887-201803）；肌苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：140669-201606）；鳥苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：111977-201501）；胸苷（上海源葉生物科技有限公司，批號：S18107）；腺苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：110879-201703）

2 方法與結(jié)果

2.1 不同煎煮時間對韭菜子出膏率的動態(tài)影響研究

現(xiàn)行《醫(yī)療機構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》（2009年版）[3]，第四章第十三條明確指出：一般藥物煮沸后再煎煮20 ～ 30 min;解表類、清熱類、芳香類藥物不宜久煎，煮沸后再煎煮15 ～ 20 min；滋補藥物先用武火煮沸后，改用文火慢煎約40 ～ 60 min；藥劑第二煎的煎煮時間應(yīng)當(dāng)比第一煎的時間略縮短。按照此規(guī)定，本實驗對比研究煎煮時間的延長對韭菜子種殼破裂的影響，具體方法和結(jié)果如下：

韭菜子：取原藥材，除去雜質(zhì)，篩去灰屑；

炒韭菜子：取凈韭菜子，置炒制容器內(nèi)，文火加熱，翻炒至有香氣逸出，取出放涼；

出膏率測定：取韭菜子和炒韭菜子各10份，分別 編 號 為10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 min各10組，每份100 g，置圓底燒瓶，加25倍量水，稱定重量，浸泡30 min，按計劃時間加熱回流，放冷，補足失重，過濾，取續(xù)濾液測定出膏率（n= 3，x）。結(jié)果見圖1。

由圖1可知，韭菜子的炒制雖然會增加最大出膏率，但增加并不明顯，增加率約為12.59%。但是炒制品達到最大出膏率的時間卻大大縮短，生品約需要80 min，而炒制以后這一時間可縮短到50 min左右。

圖1 煎煮時間對韭菜子生品與炒品出膏率影響動態(tài)曲線圖Fig.1 The graph for effect of decocting time on paste yield curve in Semen Allii Tuberosi between no processing and stir-frying

2.2 加熱炒制對韭菜子種殼破裂的動態(tài)影響研究

2.2.1加熱炒制對韭菜子出膏率和粉碎過篩率的動態(tài)影響研究 炒韭菜子：取凈韭菜子，置炒制容器內(nèi)，炒制溫度分別為（80 ± 5）、（100 ± 5）、（120 ±5）、（140 ± 5）、（160 ± 5）、（180 ± 5）℃，炒制時間分別為5、10、15、20、25、30 min，取出放涼。

粉碎：取韭菜子和炒韭菜樣品各50 g，小型高速萬能粉碎機粉碎30 s，過藥篩2號（24目），計算過篩率[4]，結(jié)果見圖2、圖3。

由圖2、圖3可知，炒制的溫度和時間與韭菜子的出膏率和粉碎過篩率均成正比，炒制的溫度越高，時間越長，出膏率和粉碎過篩率越高。

圖2 韭菜子加熱炒制出膏率動態(tài)曲線圖Fig.2 The graph for effect of processing by stir-frying on paste yield curve in Semen Allii Tuberosi

圖3 韭菜子加熱炒制24目過篩率動態(tài)曲線圖Fig.3 The graph for effect of processing by stir-frying on crushing sieving rate（24 Pharmacopoeia screen） in Semen Allii Tuberosi

2.2.2加熱炒制對韭菜子中6種核苷類物質(zhì)含量的動態(tài)影響 （1）色譜條件 色譜柱：Waters Symmetry Shield RP18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脫0～40 min，1%～9% A；檢測波長：260 nm，柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min，進樣量：10 μL。

（2）混合對照品溶液的制備 分別精密稱取尿嘧啶、尿苷、肌苷、鳥苷、胸苷、腺苷對照品適量，純化水定容，制成濃度依次為17.23、76.10、21.38、53.82、22.11、35.75 μg/mL的混合對照品儲備液。

（3）供試品溶液的制備 精密稱取韭菜子粉末（過2號篩）1.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入純化水 20 mL，密塞，稱重，超聲（300 W，40 kHz）提取60 min，放冷，再稱重，用純化水補足減失的重量，搖勻，靜置10 min，取上清液過0.22 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

（4）線性關(guān)系考察 精密吸取混合對照品儲備液適量，制成系列濃度的混合對照品溶液，分別注入液相色譜儀，按“2.2.2（1）”項下色譜條件進樣測定。以對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算回歸方程，結(jié)果見表 1。

表1 韭菜子中6種核苷類成分線性關(guān)系考察結(jié)果Tab. 1 The results of linear relationship of 6 nucleosides in Semen Allii Tuberosi

（5）精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液適量，連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積，計算得到尿嘧啶、尿苷、肌苷、鳥苷、胸苷、腺苷峰面積的RSD依次為1.89%、0.92%、1.74%、0.83%、1.66%、1.02%，表明儀器精密度良好。

（6）重復(fù)性試驗 取同一批生韭菜子適量，按“2.2.2（3）”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.2.2（1）”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，計算得到尿嘧啶、尿苷、肌苷、鳥苷、胸苷、腺苷峰面積的RSD分別為2.11%、0.82%、1.85%、1.39%、2.03%、1.56%，表明該方法重復(fù)性良好。

（7）穩(wěn)定性試驗 上述供試液，分別于0、2、4、6、8、10、12 h按“2.2.2（1）”項下色譜條件測定尿嘧啶、胞苷、鳥嘌呤、尿苷、肌苷、鳥苷、胸苷、腺苷峰面積，計算得到RSD分別為 1.99%、0.92%、2.05%、1.13%、1.87%、1.73%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

（8）加樣回收率試驗 精密稱取已知成分含量的韭菜子供試品6份，每份約0.5 g，分別精密加入“2.2.2（2）”混合對照品3 mL，按“2.2.2（3）”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.2（1）”項下色譜條件進樣測定，計算平均加樣回收率和RSD，結(jié)果尿嘧啶、胞苷、鳥嘌呤、尿苷、肌苷、鳥苷、胸苷、腺苷平均回收率分別為98.57%、97.83%、99.15%、98.05%、98.90%、99.73%，RSD分別為2.81%、1.35%、1.68%、1.22%、1.82%、2.21%，表明供試品溶液制備方法穩(wěn)定可行。

（9）樣品含量測定 精密稱取不同溫度和時間條件下炒制的韭菜子粉末（過2號篩）1.0 g，按“2.2.2（3）”項下制備供試品溶液（n= 3），按“2.2.2（1）”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，計算得到尿嘧啶、尿苷、肌苷、鳥苷、胸苷、腺苷含量，結(jié)果見表2、圖4 ～ 6。

圖4 混合對照品溶液HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatogram of mixed reference solution

圖5 韭菜子樣品溶液HPLC色譜圖Fig.5 HPLC chromatogram of Semen Allii Tuberosi solution

圖 6 不同溫度和時間條件下炒制韭菜子6種核苷類物質(zhì)變化動態(tài)曲線圖Fig.6 The graph for effect of processing by stir-frying on content of 6 nucleosides in Semen Allii Tuberosi under different temperature and time conditions

表2 不同溫度和時間條件下炒制韭菜子6種核苷類物質(zhì)含量（n = 3，x）Tab. 2 Content of 6 nucleosides in fried Semen Allii Tuberosi under different temperature and time conditions（n = 3，x）

韭菜子中尿嘧啶、尿苷、肌苷、鳥苷、胸苷、腺苷6種核苷類物質(zhì)含量隨著時間和溫度的增加逐漸降低。并且當(dāng)溫度達到180℃或者160℃炒制時間超過30 min時，尿嘧啶和肌苷的含量可以忽略不記。

3 討論

傳統(tǒng)中藥炮制“逢子必炒”的“炒”，多為“炒黃”或“微炒”。其操作雖然簡單，但炒制的程度卻較難判定，特別是當(dāng)藥物表面顏色本就為黑色或灰色時，如韭菜子、黑芝麻、青箱子等。炒的炮制工藝雖經(jīng)過歷代醫(yī)家的豐富和發(fā)展，可以從“對比看”“聽爆聲”“聞香氣”“看斷面”等經(jīng)驗的綜合運用，判斷是否種殼或果殼破裂，但仍是以經(jīng)驗為主，并不能完全確定。本研究選用表面為黑色的韭菜子為研究對象，通過系列炒制時間和溫度的因素設(shè)計，證明了韭菜子經(jīng)過加熱炒制以后，最大出膏率和粉碎率得到了明顯增加，煎煮時間明顯縮短，說明了傳統(tǒng)炮制理論的科學(xué)性。但是，也發(fā)現(xiàn)了高溫和長時間的受熱會破壞其所含主要藥效物質(zhì)的含量，甚至尿嘧啶和肌苷的含量已經(jīng)降低到可以忽略不記的程度，可能會影響到其臨床療效，故因引起重視。

4 結(jié)論

加熱炒制可使種子類藥材種殼或果殼破裂，使傳統(tǒng)煎煮溶劑水能夠更快更好的滲透到種仁或果仁，從而更多的提取出有效物質(zhì)。加熱炒制也更利于此類藥材的粉碎，便于入丸劑或散劑。但應(yīng)充分把握炒制的時間和溫度，因高溫和長時間受熱會破壞主要藥效物質(zhì)含量。