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    雞冠花試管內(nèi)開花技術(shù)研究

    2021-07-22 05:36:44李可貴劉揚陳冠銘任杰李宏楊
    熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年6期
    關(guān)鍵詞:山農(nóng)抑菌劑卡拉膠

    李可貴 劉揚 陳冠銘 任杰 李宏楊

    (1三亞市南繁科學(xué)技術(shù)研究院 海南三亞572000;2三亞市熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 海南三亞572000)

    雞冠花(Celosia cristataL.)為莧科青葙屬一年生草本植物,別名老來紅、鳳尾雞冠、紅雞冠等。雞冠花原產(chǎn)于非洲、美洲和亞洲印度,在中國幾乎全國均有分布。雞冠花一般在夏秋季開花,花期長,花多數(shù)為紅色,呈雞冠狀,適于布置花壇、花境或盆栽觀賞等,是當(dāng)前應(yīng)用比較廣泛的觀賞植物品種[1]。

    試管花是利用植物組織培養(yǎng)技術(shù),在人為可控的無菌環(huán)境條件下培養(yǎng)而成,在相對密閉的透明試管瓶里生長與觀賞的微型花卉。試管花卉又被稱為“天使花房”“試管花屋”“手指玫瑰”等?!笆种该倒濉痹陧n國、英國、日本、新加坡等地很流行[2]。目前,國內(nèi)實現(xiàn)試管內(nèi)成花的植物有鐵皮石斛、長筒花、長壽花、鳳仙花、千日紅、大巖桐、春石斛、香石竹等近30種[3-8]。

    有關(guān)雞冠花試管內(nèi)成花技術(shù)的研究已有報道。李廣友等[9]研究不同濃度蔗糖和不同培養(yǎng)空間對雞冠花生長的影響,當(dāng)蔗糖濃度為40 g/L時,花序的長度和寬度最大;容器越小,營養(yǎng)生長時間縮短,開花時間提前;花期最長可以達到60 d以上。孫寧等[10]研究發(fā)現(xiàn),生長激素IAA與NAA對雞冠花的生根和成花有促進作用,IAA 0.5 mg/L、NAA 1.0 mg/L時成花率均可達到100%,且以IAA 0.5 mg/L時單株成花數(shù)最多;KT對植物的分化和開花有促進作用,而6-BA對雞冠花生根與成花有抑制作用。梁艷等[11]研究認為,0.5 mg/L IBA處理的雞冠花生根率和開花率最高。林炳英等[12]認為,MS培養(yǎng)基中加入6-BA 0.6 mg/L和NAA 0.1 mg/L誘導(dǎo)的芽數(shù)量最多,而且芽生長表現(xiàn)較好,有利于芽的增殖培養(yǎng)。但利用該技術(shù)制作成雞冠花試管花卉并應(yīng)用于生產(chǎn)的報道還很少,原因可能在產(chǎn)品易受污染、保鮮期較短、運輸易損等方面。本研究擬解決如何提高產(chǎn)品保鮮效果和觀賞性,并考察了產(chǎn)品在不同環(huán)境下的適應(yīng)性,為產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供基礎(chǔ)資料。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    雞冠花(紅色,普通品種)種植于三亞市南繁科學(xué)技術(shù)研究院種質(zhì)資源圃內(nèi),9月份采收種子后,去雜,挑選黑色飽滿的種子,曬干。種子用塑料封口袋包裝好,置于冰箱冷藏(4℃),備用。山農(nóng)一號為市售廣譜性生物抑菌劑。

    1.2 方法

    1.2.1 外植體消毒與無菌播種

    將雞冠花種子置于三角瓶中,加入洗潔精,蓋上紗布,然后注入自來水,反復(fù)搖動并靜置1 min,透過紗布濾去洗潔精。重復(fù)沖洗3次后,瀝干水備用。在超凈工作臺上,將75%酒精倒入裝雞冠花種子的三角瓶中,浸泡滅菌3 min,倒去酒精,用無菌水沖洗5次。再用20%的次氯酸鈉溶液滅菌10 min,期間不斷搖動,倒去消毒液,用無菌水沖洗5次。

    將種子均勻散播在培養(yǎng)基上,15 d后幼苗株高可達1.6 cm。所用培養(yǎng)基配方[13]為:1/2 MS(其中大量元素減半,其它成分不變)+蔗糖25 g/L+卡拉膠7 g/L;培養(yǎng)基pH值調(diào)至5.8~6.0,在121℃下高壓滅菌20 min,下同。所用培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為(25±2)℃,光照12 h/黑暗12 h,光照強度30~40μmol/(m2·s),下同。

    1.2.2 試管苗增殖培養(yǎng)

    在種子播種30 d左右,幼苗長至3~4 cm時,將幼苗切成1 cm左右的莖段,每段帶1個莖節(jié)和葉片,轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上使腋芽萌發(fā)。如此往復(fù),可連續(xù)繼代培養(yǎng)8~10次,每次30~40 d,增殖倍數(shù)2~4倍。培養(yǎng)基配方[13]:MS+蔗糖25 g/L+卡拉膠7 g/L+6-BA 1.0 mg/L+卡拉膠7 g/L。

    1.2.3 花芽誘導(dǎo)培養(yǎng)

    將苗齡為30~50 d的增殖苗切除基部和畸形、褐化部分及黃葉,轉(zhuǎn)接到花芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基配方[13]:MS+蔗糖25 g/L+卡拉膠7 g/L+ABA 1.0 mg/L。

    1.2.4 保鮮培養(yǎng)

    幼苗經(jīng)過15~20 d培養(yǎng),花序陸續(xù)出現(xiàn),但花序還較小且顏色較淺。切除幼苗基部的黃葉及根系,轉(zhuǎn)接到保鮮培養(yǎng)基上。保鮮培養(yǎng)基配方:MS+蔗糖30 g/L+卡拉膠7 g/L+6-BA 0.05 mg/L+NAA 0.05 mg/L+山農(nóng)一號0~3 mL/L。幼苗轉(zhuǎn)接到該培養(yǎng)基上培養(yǎng)7~10 d后,花序增大,顏色明顯轉(zhuǎn)紅。山農(nóng)一號濃度設(shè)置0、1、2和3 mL/L共4個處理,每個處理接種30瓶,重復(fù)3次。轉(zhuǎn)接60 d后分別觀察植株的生長情況,統(tǒng)計污染率。污染率=(受污染的株樹/接種的株樹)×100%。

    1.2.5 成花制作

    將帶有鮮艷花序的單莖轉(zhuǎn)接到透明工藝瓶中。工藝瓶選用大小適宜的透明玻璃瓶,玻璃瓶經(jīng)過高壓滅菌后,在超凈工作臺上及時倒入滅菌后的保鮮培養(yǎng)基,培養(yǎng)基占瓶高的1/5。

    同時進行培養(yǎng)基顏色調(diào)制試驗。配制培養(yǎng)基,配方:(MS+蔗糖30 g/L+卡拉膠7 g/L+6-BA 0.05 mg/L+NAA 0.05mg/L+山農(nóng)一號1 mL/L+食用色素0~0.1 g/L),其中,食用色素添加分3種顏色(紅、藍、綠)及3個濃度(0.02、0.05、0.10 g/L)處理,用玻璃棒攪均勻,再滅菌。每個試驗處理接種30瓶培養(yǎng)基,重復(fù)3次,靜置60 d后記錄和評分。評分標(biāo)準(zhǔn):以培養(yǎng)基的透明度、植株搭配及主觀喜好,按百分制進行綜合評分,同時觀察對植株生長的影響。評分人:隨機邀請50人評分,數(shù)據(jù)取平均值。

    1.2.6 試管花光照培養(yǎng)試驗

    按照成花制作方法,配制培養(yǎng)基(MS+蔗糖30 g/L+卡拉膠7 g/L+6-BA 0.05 mg/L+NAA 0.05 mg/L+山農(nóng)一號1 mL/L+食用色素0.05 g/L)。產(chǎn)品封口后,分別置于3種環(huán)境條件(光照強度)下培養(yǎng),其中培養(yǎng)室為恒溫25℃,大氣溫度為22~28℃。每個試驗處理30瓶,重復(fù)3次,跟蹤記錄植株的生長情況,統(tǒng)計污染率,數(shù)據(jù)取平均值。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同濃度抑菌劑對試管花保鮮培養(yǎng)的影響

    經(jīng)過60 d培養(yǎng),添加抑菌劑山農(nóng)一號的培養(yǎng)基均沒有污染,抑菌效果明顯。不加抑菌劑的培養(yǎng)基污染率較高,分析可能的污染源來自于植株的內(nèi)源菌群或周圍培養(yǎng)環(huán)境。隨著抑菌劑濃度的增加,植株表現(xiàn)出受到不同程度的毒害作用,生長勢減弱,根系發(fā)黑,葉片畸形,甚至死亡,見表1。抑菌劑山農(nóng)一號適宜的添加濃度為1 mL/L。

    表1 山農(nóng)一號不同濃度抑菌劑對試管花保鮮培養(yǎng)的影響

    2.2 不同食用色素對試管花觀賞性的影響

    培養(yǎng)基從滅菌到放冷凝固,直至60 d后顏色均未發(fā)生明顯改變,食用色素化學(xué)穩(wěn)定性較好。顏色評分發(fā)現(xiàn),向培養(yǎng)基中分別添加0.02~0.05 g/L的藍色素和綠色素,觀賞效果最好,與對照均有顯著性差異,濃度范圍之間差異不明顯;而紅色素不同濃度處理與對照沒有顯著性差異,這可能是因為與紅色的花序?qū)Ρ榷炔蛔?,見?。較適宜的顏色調(diào)配方案是向培養(yǎng)基中添加0.02~0.05 g/L的藍色素或綠色素。

    表2 各色素試管花觀賞性綜合評分

    2.3 不同培養(yǎng)環(huán)境對試管花的影響

    試管花在不同環(huán)境條件下,經(jīng)過90 d培養(yǎng),生長表現(xiàn)差異較大。在潔凈的培養(yǎng)室中培養(yǎng),污染率為0,表現(xiàn)為株高明顯增加,葉片增多,顏色淺綠,試管花還保持較好的觀賞性;在開放、光照強度較低、溫度較高的環(huán)境下培養(yǎng),表現(xiàn)為株高明顯增加,葉片開始變黃,葉片增多;在開放且光照強度較大的環(huán)境下培養(yǎng),污染率偏高,影響產(chǎn)品的觀賞性(表3)。研究表明,向培養(yǎng)基中添加抑菌劑山農(nóng)一號,在室內(nèi)環(huán)境下,產(chǎn)品的污染率能得到有效控制;在普通的室內(nèi)環(huán)境下,由于光照強度較低,植株生長代謝較慢,保持良好觀賞性的時間更長。產(chǎn)品在溫度22~28℃、光照強度較低的普通室內(nèi)環(huán)境下可以擺放90 d左右。

    3 討論與結(jié)論

    綜上,適宜雞冠花試管花制作的培養(yǎng)基為:無菌播種培養(yǎng)階段用1/2 MS(其中大量元素減半,其它成分不變)+蔗糖25 g/L+卡拉膠7 g/L,增殖培養(yǎng)階段用MS+蔗糖25 g/L+卡拉膠7 g/L+6-BA 1.0 mg/L+卡拉膠7 g/L,花芽誘導(dǎo)培養(yǎng)階段用MS+蔗糖25 g/L+卡拉膠7 g/L+ABA 1.0 mg/L,試管花保鮮培養(yǎng):MS+蔗糖30 g/L+卡拉膠7 g/L+6-BA 0.05 mg/L+NAA 0.05 mg/L+山農(nóng)一號1 mL/L+食用色素0.05 g/L。產(chǎn)品在溫度較低、光照強度較弱的普通室內(nèi)環(huán)境下可以擺放90 d左右,且污染率低至2.22%。

    表3 培養(yǎng)環(huán)境對試管花的影響

    山農(nóng)一號是一種廣譜生物殺滅劑,能夠殺死各種細菌和真菌細胞,阻止孢子萌發(fā),在較高濃度下,能夠消除外植體的內(nèi)生菌污染。研究表明,較高濃度的山農(nóng)一號對植株有毒害作用,較適宜的添加濃度為1 mL/L。推測高濃度的抑菌劑也同時影響了植物細胞新陳代謝循環(huán)的主要酶類活性,阻礙了營養(yǎng)物質(zhì)傳輸從而產(chǎn)生毒害。不同植物對山農(nóng)一號的耐受力不同,一般添加濃度0.5~1 mL/L[14-16]。

    首次嘗試向培養(yǎng)基中添加食用色素進行保鮮培養(yǎng),取得了較為理想的效果,產(chǎn)品的觀賞價值明顯提高。食用色素為天然或人工合成的可用于食品的一類色素,化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定,耐高溫高壓滅菌操作,且對試管苗生長沒有產(chǎn)生不良影響。還首次探討了試管花產(chǎn)品在室內(nèi)外不同環(huán)境下的保鮮效果。結(jié)果表明,試管花不適宜存放于開放且光照強度較大的環(huán)境下,適宜存放于普通的室內(nèi)環(huán)境下,從而確定了商品定位,適宜應(yīng)用于產(chǎn)品生產(chǎn)。

    試管花不同于傳統(tǒng)花卉的生長模式,它不受光照、溫度和土壤的制約,可以周年生產(chǎn)與觀賞,而且具有攜帶方便、觀賞期長、清潔環(huán)保等優(yōu)點。本研究通過在保鮮培養(yǎng)階段添加抑菌劑、食用色素,考察試管花產(chǎn)品在不同環(huán)境下的適應(yīng)性,結(jié)果顯示,所制作的試管花產(chǎn)品污染率低、觀賞期更長,觀賞價值更高,為其商品產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供了技術(shù)支持。

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