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    野蠶豆根總環(huán)烯醚萜苷對非酒精性脂肪肝大鼠肝臟功能的影響

    2021-07-20 18:33李莉單蕊陳燕朱瑛杜冰李海寧姚政
    關(guān)鍵詞:非酒精性脂肪肝

    李莉 單蕊 陳燕 朱瑛 杜冰 李海寧 姚政

    【摘 要】 目的:觀察野蠶豆根中總環(huán)烯醚萜苷對非酒精性脂肪肝大鼠肝臟功能的影響。方法:采用高脂飼料喂養(yǎng)4周建立非酒精性脂肪肝大鼠模型,給藥4周后,全自動(dòng)生化儀檢測大鼠血清生化,HE染色觀察肝臟病理情況。結(jié)果:血清生化結(jié)果顯示,總環(huán)烯醚萜苷可以降低非酒精性脂肪肝大鼠血清甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活性,升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平。病理結(jié)果顯示:總環(huán)烯醚萜苷組脂肪空泡較模型組變小變少。結(jié)論:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明野蠶豆根中的總環(huán)烯醚萜苷成分無肝毒性,且有一定保肝護(hù)肝、降脂作用。

    【關(guān)鍵詞】 野蠶豆根;總環(huán)烯醚萜苷;非酒精性脂肪肝

    【中圖分類號】R285.1 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號】1007-8517(2021)09-0025-04

    Abstract:Objective To observe the effect of total iridoid glycosides in Centranthera grandiflora on liver function in non-alcoholic fatty liver rats. Methods The rats were fed with high-fat diet for 4 weeks to establish a non-alcoholic fatty liverrat model. After 4 weeks of administration, the automatic biochemical analyzer was used to detect the serum biochemistry of the rats, and HE staining was used to observe the liver pathology. Results Total iridoid glycosides reduced the levels of triglyceride (TG), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) and alanine aminotransferase (ALT) activity, and increased the level of high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) in rats with nonalcoholic fatty liver disease.Pathological results showed that fatty vacuoles in total iridoid glycosides group were smaller and less than those in model group. Conclusion The total iridoid glycosides in Centranthera grandiflora had no hepatotoxicity, and had some hepatoprotective and lipid-lowering effects.

    Keywords:Centranthera Grandiflora; Total Iridoid Glycosides; Non-alcoholic Fatty Liver

    野蠶豆根,又名化血丹、小紅藥、金貓頭(廣西)、靈芝草(云南),原植物來源于玄參科(Scrophulariaceae) 胡麻草屬(Centranthera) 植物大花胡麻草Centranthera grandiflora Benth,主要分布于云南、貴州、廣西等地,越南、緬甸、印度也有分布[1]。野蠶豆根主要含有環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷類、類胡蘿卜素類、紫羅蘭酮苷類、單萜苷類等化合物[2],桃葉珊瑚苷是野蠶豆根中含量最高的環(huán)烯醚萜苷類成分[3]。

    環(huán)烯醚萜苷廣泛存在于自然界許多植物種屬中,在車前科、玄參科、杜仲科、忍冬科等植物中均有發(fā)現(xiàn),具有降糖、保肝、抗炎、抗凝血等作用,還可發(fā)揮DNA合成酶抑制劑的作用[1]。

    野蠶豆根在其產(chǎn)地云南省紅河州常被用于防治心腦血管疾病,收效甚好。其主要的化學(xué)成分為環(huán)烯醚萜苷,但有關(guān)野蠶豆根的藥理作用研究卻十分有限,關(guān)于其藥理藥效方面的研究甚少。因此,對野蠶豆根藥物作用效果及其起效機(jī)制進(jìn)行深入研究是很有必要的。課題組前期對野蠶豆根有效藥物成分進(jìn)行了提取,發(fā)現(xiàn)其總環(huán)烯醚萜苷具有抗炎和抗氧化活性[5-6]。本研究取野蠶豆根2年生根,提取其中的總環(huán)烯醚萜苷進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn),觀察其降脂及保肝作用。

    1 材料、儀器與試劑

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠共21只,體重160~200 g,由長沙市天勤生物科技有限公司提供,許可證號:SCXK(湘)2014-0011。分組情況:正常組7只,模型組7只,總環(huán)烯醚萜苷組7只。飼養(yǎng)于云南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心,自由飲食,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房12 h光照12 h黑暗,溫度控制為22~27 ℃,濕度控制為40%~60%。

    1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及飼料 野蠶豆根采自云南省紅河州屏邊縣國云種植有限公司(1號、2號種植基地),經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)李海寧老師鑒定為玄參科胡麻草屬植物大花胡麻草Centranthera grandiflora Benth.的根及根莖。

    總環(huán)烯醚萜苷的制備:取2年生的野蠶豆根藥材(粗粉),用60%的乙醇超聲得到浸膏,分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到正丁醇部分浸膏(總環(huán)烯醚萜苷)。

    普通飼料配方:玉米粉33%、小麥粉10%、麩皮18%、大米10%、豆粕16%、魚粉3%、雞肉粉2%、骨粉3%、脂肪5.8%。

    高脂飼料配方:10%豬油+2%膽固醇+88%普通飼料。

    飼料及墊料均購自江蘇美迪生物醫(yī)藥有限公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司,DZKW-D-4)、YD1508B輪式切片機(jī)(浙江金華益迪醫(yī)療設(shè)備廠)、HI1220烘片機(jī)(德國LEICA公司)、HI1210攤片機(jī)(德國LEICA 公司)、Nikon ECLIPSE E200顯微鏡(日本Nikon公司)、全自動(dòng)生化分析儀cobas c311(瑞士羅氏公司)。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立 正常組給予普通飼料喂養(yǎng),模型組、總環(huán)烯醚萜苷組給予高脂飼料喂養(yǎng),飼養(yǎng)于云南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房,飼養(yǎng)時(shí)間共8周。于第8周末取材。

    2.2 動(dòng)物給藥劑量方法 模型組、總環(huán)烯醚萜苷組于第4周開始灌胃給藥,持續(xù)4周,劑量參考李儀奎主編的《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》,大鼠50 mg/kg·d。正常組灌胃給同等劑量生理鹽水。

    2.3 大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)觀察 大鼠剖殺后,取肝臟樣本在10%福爾馬林溶液中浸泡24 h,使肝臟組織充分固定,切割至2mm×4mm×2 mm大小,流水沖洗2~3 h。脫水后,進(jìn)行石蠟包埋,切片,HE染色,病理圖片拍攝。

    2.4 大鼠血清生化指標(biāo)檢測 提取血清,采用全自動(dòng)生化儀測定血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)含量。

    3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

    所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多組比較采用單因素方差分析;兩兩比較,組間方差齊采用LSD檢驗(yàn)法,若方差不齊,用Dunnett-t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    4.1 各組大鼠體重變化 正常組大鼠體重增長趨勢較為平穩(wěn),模型組大鼠體重整體增長最快,總環(huán)烯醚萜苷組體重整體增長較模型組慢。

    4.2 肝體指數(shù) 肝體指數(shù)(%)=(肝臟濕重/體重)×100%。模型組與正常組肝體指數(shù)相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)??偔h(huán)烯醚萜苷組與模型組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    4.3 大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)觀察 從HE染色結(jié)果可以看出:正常組肝細(xì)胞大小正常,肝索分布清晰,肝細(xì)胞細(xì)胞核大小正常,無細(xì)胞脂肪變性;模型組出現(xiàn)較多脂肪空泡,肝索、肝細(xì)胞排列開始紊亂,表明NAFLD大鼠模型復(fù)制成功。總環(huán)烯醚萜苷組存在小脂肪空泡,與模型組相比空泡變小變少。

    4.4 各組大鼠血清生化指標(biāo)檢測 生化分析儀檢測各組大鼠8周末血清生化指標(biāo):模型組與正常組比較,血清LDL-C、ALT升高,HDL-C降低,差異有顯著性(P<0.05);總環(huán)烯醚萜苷組與模型組比較,血清TG、LDL-C、ALT均降低,HDL-C升高,差異有顯著性(P<0.05)??偔h(huán)烯醚萜苷組ALT和TBIL接近正常組水平。

    5 討論

    野蠶豆根在云南省紅河州一帶資源豐富,是當(dāng)?shù)孛缱迕耖g常用植物藥,常用于心血管系統(tǒng)疾病的防治。野蠶豆根具有抗氧化、抗炎、保肝、抗菌、抗糖尿病、神經(jīng)保護(hù)、抗腫瘤、保護(hù)心血管、促進(jìn)傷口愈合等作用[7]?!吨腥A本草》記載:味酸、微辛,性溫;具有消腫止痛、散瘀止血的功效。主要治療咳血、咯血、吐血、風(fēng)濕痹痛、跌打骨折、內(nèi)傷瘀血[8]?,F(xiàn)代藥理研究[9-10]表明:野蠶豆根用藥安全,無明顯毒性反應(yīng);對大鼠急性缺血模型所致心肌損傷有保護(hù)作用,此外,還有抗凝血及抗炎活性。

    野蠶豆根主要化學(xué)活性物質(zhì)為以桃葉珊瑚苷為主的環(huán)烯醚萜苷類化合物。桃葉珊瑚苷味甘、淡,性溫,具有消腫止痛、散瘀止血的功效,是一類特殊的具有縮醛或半縮醛結(jié)構(gòu)的單萜化合物[11]。有研究[12-16]顯示,桃葉珊瑚苷可抗凝血、抗炎、抗氧化、抗凋亡,同時(shí)可調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬水平,具有抗腫瘤、保肝、降糖、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等作用。桃葉珊瑚苷還具有抑制肝細(xì)胞中Ⅰ型膠原纖維、Ⅲ型膠原纖維和基質(zhì)金屬蛋白酶-2( MMP-2)的表達(dá),減輕肝纖維化的作用[20]。本實(shí)驗(yàn)所用藥物為2年生野蠶豆根中制備的總環(huán)烯醚萜苷,其中有較高含量的桃葉珊瑚苷。在成功制備了非酒精性脂肪肝大鼠的基礎(chǔ)上進(jìn)行給藥觀察,病理結(jié)果顯示,總環(huán)烯醚萜苷可使脂肪肝大鼠肝細(xì)胞中的脂滴減少;血清生化結(jié)果顯示,總環(huán)烯醚萜苷可以降低非酒精性脂肪肝大鼠血清TG、ALT、HDL-C、LDL-C、TBIL水平??煽闯?,總環(huán)烯醚萜苷可有效改善非酒精性脂肪肝大鼠肝功能,減輕肝細(xì)胞中的脂質(zhì)沉積,降低血脂水平,起到一定的降脂、保肝作用。

    本研究結(jié)果顯示野蠶豆根在降脂、保肝方面具有較好的藥用價(jià)值,可作為防治脂肪肝及心腦血管類疾病的候選新藥。本研究可對野蠶豆根的藥物開發(fā)利用提供一定指導(dǎo),并為民族民間藥物的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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    (收稿日期:2010-10-11 編輯:劉 斌)

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