李艷明,王 坤,朱富強(qiáng),高會(huì)蘭
(1.濱州市檢驗(yàn)檢測(cè)中心,山東濱州 256600;2.濱州市職業(yè)學(xué)院,山東濱州 256603)
受體激動(dòng)劑目前主要是指α2-受體激動(dòng)劑和β2-受體激動(dòng)劑,俗稱(chēng)“瘦肉精”。α2-受體激動(dòng)劑中的可樂(lè)定(Clonidine)是一種腎上腺素能,位于中樞神經(jīng)系統(tǒng),其在動(dòng)物上有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。王雷杰等[1]在飼料中添加可樂(lè)定發(fā)現(xiàn),豬的瘦肉率明顯提高,眼肌面積增加,脂肪比率降低,背膘厚度減少。α2-受體激動(dòng)劑除可樂(lè)定還包括替扎尼定、安普樂(lè)定、溴莫尼定、賽拉嗪等物質(zhì)[2]。賽庚啶(Cyproheptadine)屬H1型抗過(guò)敏性藥物,可以用于治療蕁麻疹等疾病,并有抗5-羥色胺及抗膽堿的作用,可以使機(jī)體中樞神經(jīng)興奮,降低飽腹感,增加食量和體重[2]。β2-受體激動(dòng)劑是一種腎上腺素的受體激動(dòng)劑,其主要用途是防治支氣管哮喘。牲畜體使用后,能夠改變其體內(nèi)代謝的方式,促進(jìn)肌肉生長(zhǎng),并且可以快速轉(zhuǎn)化脂肪和分解脂肪,促進(jìn)合成骨骼肌蛋白,最終達(dá)到提高牲畜瘦肉率的目的[3?6]。常見(jiàn)的β2-受體激動(dòng)劑有鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等[7?9]。這些種類(lèi)的“瘦肉精”,進(jìn)入機(jī)體,可能會(huì)導(dǎo)致其出現(xiàn)頭暈心悸等中毒反應(yīng),甚至死亡[10?12],目前已經(jīng)禁止在養(yǎng)殖的食用動(dòng)物中使用受體激動(dòng)劑[13]。
α2-受體激動(dòng)劑因其在動(dòng)物養(yǎng)殖方面的非法添加可能造成安全隱患,我國(guó)農(nóng)業(yè)部的第1519 號(hào)公告[14]中明確規(guī)定,可樂(lè)定與賽庚啶禁止在飼料和動(dòng)物飲用水中使用。我國(guó)農(nóng)業(yè)部公告176 號(hào)[15]、193 號(hào)[16]、1519 號(hào)[14],對(duì)禁止在食用動(dòng)物飼料添加相關(guān)的β2-受體激動(dòng)劑也進(jìn)行了說(shuō)明。目前對(duì)于α2-受體激動(dòng)劑在動(dòng)物組織中的研究較少,F(xiàn)an 等[17]利用QuEChERS的方法,超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的技術(shù),檢測(cè)可樂(lè)定與賽庚啶在豬肉、豬肝和豬腎的殘留。β2-受體激動(dòng)劑研究的比較多也比較成熟,檢測(cè)技術(shù)也得到了飛快發(fā)展[18?20],包括氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[21],液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[22?24],其中液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法應(yīng)用的較多。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 31660.6-2019[25]與GB/T 22286-2008[26]分別規(guī)定了α2-受體激動(dòng)劑和β2-受體激動(dòng)劑的檢測(cè)方法。離子交換固相萃取小柱(SPE)是目前采用的凈化方式,α2-受體激動(dòng)劑和β2-受體激動(dòng)劑是不同的檢驗(yàn)方法,但均采用SPE 進(jìn)行凈化。SPE 需要活化,上樣,淋洗,洗脫4 個(gè)步驟,才能達(dá)到凈化的目的,方法費(fèi)時(shí),操作繁瑣,試劑耗材大量消耗[27?28]。為濃縮樣品及避免溶劑效應(yīng),將SPE 凈化后的樣品旋蒸或者氮吹,一批樣品旋蒸或者氮吹都會(huì)消耗近1 h的時(shí)間,并且氮吹時(shí)可能會(huì)帶來(lái)交叉污染等各種不確定因素,前處理需要花費(fèi)大量的時(shí)間。
通過(guò)式固相萃取小柱,無(wú)需活化,直接上樣并接收,即可達(dá)到去除基質(zhì)的目的,凈化效果顯著。目前沒(méi)有將通過(guò)式固相萃取小柱運(yùn)用到多種類(lèi)受體激動(dòng)劑的同時(shí)檢測(cè)當(dāng)中的相關(guān)報(bào)道。本文采用通過(guò)式固相萃取小柱,對(duì)豬肉中的α2型、β2型、H1型等11 種受體激動(dòng)劑進(jìn)行同時(shí)檢測(cè),該方法可以運(yùn)用到豬肉受體激動(dòng)劑的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)樣品及突發(fā)事件的及時(shí)處置當(dāng)中。
豬肉 在本市隨機(jī)選取小型市場(chǎng)與市集10 個(gè),每個(gè)市場(chǎng)選取3 個(gè)豬肉攤位,共計(jì)30 份樣品;乙腈、甲醇 色譜純,美國(guó)TEDIA 公司;甲酸 色譜純,美國(guó)ACS 恩科化學(xué);乙酸 分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;乙酸銨 色譜純,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶>100.000 units/mL 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司;乙酸銨緩沖溶液0.2 mol/L:稱(chēng)取15.4 g 乙酸銨,超純水溶解之后,定容至1 L,用適量乙酸調(diào)節(jié)pH 至5.2;85%乙腈水溶液(含0.2%甲酸):量取850 mL 乙腈,加入2 mL 甲酸,超純水定容至1 L;11 種受體激動(dòng)劑標(biāo)準(zhǔn)品:替扎尼定(99.9%,CAS 號(hào)64461-82-1)、賽拉嗪(99.6%,CAS 號(hào)23076-35-9)、溴莫尼定(99.0%,CAS 號(hào)59803-98-4)、安普樂(lè)定(97.0%,CAS 號(hào)73218-79-8)、可樂(lè)定(98.3%,CAS號(hào)4205-91-8) Stanford Chemicals 公司;鹽酸賽庚啶(液體,濃度100 μg/mL,CAS 號(hào)969-33-5) First Standard 公司;鹽酸克倫特羅(99.3%,CAS 號(hào)21898-19-1)、沙丁胺醇半硫酸鹽(99.4%,CAS 號(hào)23031-32-5)、萊克多巴胺鹽酸鹽(95.0%,CAS 號(hào)90274-24-1)、硫酸特布他林(99.6%,CAS 號(hào)23031-32-5)
Dr.Ehrenstorfer 公司;西馬特羅(液體,濃度100 μg/mL,CAS 號(hào)54239-37-1) 農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所;Wates Oasis PRIME HLB 固相萃取小柱 6cc 200 mg,沃特世科技公司;Bond Elut EMRLipid 分散SPE1g/管、EMR-Lipid Bond Elut Polish反萃管2 g/管,安捷倫科技有限公司。
Agilent1290II-6470QQQ 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀(UPLC-MS/MS) 配有ESI 電噴霧離子源并裝有MassHunter B.08.00 數(shù)據(jù)處理軟件,美國(guó)Agilent 公司;ACQUITY UPLC I-Class 超高效液相色譜儀、XevoTQ-XS 三重四極桿質(zhì)譜儀 美國(guó)Waters 公司;ME204T 電子天平 精度0.0001 g,上海梅特勒—托利多儀器有限公司;MILLI-Q ADWANTAGE A10 超純水機(jī) 美國(guó)密理博公司;SB25-12 DTD 超聲波清洗機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司;SGLMultis-100 多管渦旋混合儀 島津(上海)實(shí)驗(yàn)器材有限公司;3k15 高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Sigma 公司。
1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品替扎尼定、賽拉嗪、溴莫尼定、安普樂(lè)定、可樂(lè)定、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇半硫酸鹽、萊克多巴胺鹽酸鹽、硫酸特布他林各10 mg 于10 mL 棕色容量瓶當(dāng)中,用甲醇溶解,定容后,配制成濃度為1 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,準(zhǔn)確量取液體標(biāo)準(zhǔn)品鹽酸賽庚啶、西馬特羅1 mL 于10 mL 棕色容量瓶當(dāng)中,用甲醇溶解,定容后,配制成濃度為10 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,使用前,用甲醇配制成1 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中間液,根據(jù)需要,配制成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。
1.2.2 超高效液相色譜條件 色譜柱:ZORBAX Eclipse Plus C18RRHD 1.8 μm,2.1 mm×50 mm;流速:0.4 mL/min;柱溫:40 ℃;進(jìn)樣量:5 μL;流動(dòng)相;A 為0.1%甲酸水溶液,B 為乙腈,梯度洗脫條件見(jiàn)表1。
表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序Table 1 Condition of gradient elution
1.2.3 質(zhì)譜條件 電離模式:電噴霧正離子模式(ESI+);多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiple reaction monitoring,MRM)質(zhì)譜分析方法;毛細(xì)管電壓3500 V;噴嘴電壓500 V;干燥氣溫度250 ℃;干燥氣流量8 L/min;霧化氣壓力45 psi;鞘氣溫度300 ℃;鞘氣流量11 L/min;11 種受體激動(dòng)劑的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。
表2 11 種物質(zhì)質(zhì)譜參數(shù)Table 2 Chromatography-mass spectrometry parameters of eleven substances
1.2.4 樣品前處理 豬肉用粉碎機(jī)充分混勻粉碎,稱(chēng)取2.0000 g 左右的樣品于50 mL 離心管中,加入2 mL 0.2 mol/L 乙酸銨緩沖溶液(pH=5.2),40 μL 的β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶,于37 ℃下水浴振蕩16 h,充分酶解,加入8 mL 85%乙腈水溶液(含0.2%甲酸),渦旋5 min,于10000 r/min 冷凍(?4 ℃)離心5 min,取上清液過(guò)Waters Oasis PRiME HLB 小柱,棄去前0.6 mL 初濾液,收集流出液0.5 mL,加入初始流動(dòng)相0.5 mL,渦旋混勻,過(guò)0.22 μm 有機(jī)濾膜,UPLCMS/MS 進(jìn)樣檢測(cè)。
UPLC-MS/MS 配有MassHunter B.08.00 數(shù)據(jù)處理軟件,譜圖為Origin61 做圖軟件繪制。
為了獲得良好的分離效果,在色譜柱的選擇、流動(dòng)相的選擇以及梯度洗脫條件進(jìn)行了優(yōu)化。采用C18柱可對(duì)11 種物質(zhì)進(jìn)行很好的分離,并且峰形良好。流動(dòng)相的選取對(duì)于目標(biāo)化合物的保留時(shí)間和色譜峰形狀以及靈敏度也會(huì)有很大的影響,根據(jù)11 種物質(zhì)的結(jié)構(gòu)可知,加酸更易使其離子化,因此選擇0.1%(v/v)甲酸水與乙腈作為流動(dòng)相。更改流動(dòng)相的配比,使11 種物質(zhì)達(dá)到最佳的分離,同時(shí)到達(dá)最佳峰面積。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。
本實(shí)驗(yàn)分別配制100 ng/mL 的各種化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液,選擇ESI+模式,對(duì)11 種物質(zhì)進(jìn)行優(yōu)化參數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)樣品與流動(dòng)性混合后,不經(jīng)過(guò)色譜柱直接連接質(zhì)譜的方式,利用MRM 采集模式,優(yōu)化出母離子、子離子、碰撞電壓、碰撞能量等參數(shù),優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表2。11 種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流圖和MRM 圖提取離子色譜圖見(jiàn)圖1和圖2。
圖1 11 種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖(1.0 μg/L)Fig.1 TIC chromatograms of standard solution of eleven substances (1.0 μg/L)
圖2 11 種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM 圖(0.5 μg/L)Fig.2 MRM chromatograms of standard solution of eleven substances (0.5 μg/L)
2.2.1 提取溶劑的選擇β2-受體激動(dòng)劑大多有苯乙胺醇和叔丁基或異丙基連接而成,一般分為苯胺型(克倫特羅、西馬特羅)、苯酚型(沙丁胺醇)、間苯二酚型(菜克多巴胺)。β2-受體激動(dòng)劑在體內(nèi)代謝完,會(huì)跟羥基結(jié)合,進(jìn)而形成一個(gè)葡萄糖醛苷的代謝物,若要檢測(cè),需將其酶解后游離出來(lái)[29]。而苯胺型的克倫特羅與蛋白結(jié)合率低,因而不需要酶解。而α2型與H1型并沒(méi)有這種現(xiàn)象,綜合考慮,仍需對(duì)豬肉進(jìn)行酶解再進(jìn)行實(shí)驗(yàn),具體酶解步驟為,在豬肉樣品里面加入40 μL 的β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶,在37 ℃下水浴16 h。選擇豬肉樣品4 份,分別編號(hào)樣品1、樣品2、樣品3、樣品4,樣品1 與樣品2 按照處理步驟進(jìn)行,樣品3 與樣品4 不加入β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶,其余步驟相同,具體結(jié)果見(jiàn)表3。比較4 份樣品可以看出,酶解與否,對(duì)于α2型與H1型的回收率并無(wú)影響。
表3 酶解對(duì)α2 型與H1 型回收率的影響Table 3 Effect of enzymatic hydrolysis on recovery of α2 and H1
在不含待測(cè)7 種物質(zhì)的陰性樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),提取溶劑分別選用含0.2%(v/v)甲酸的純乙腈、含0.2%(v/v)甲酸的85%乙腈溶液、含0.2%(v/v)甲酸的70%乙腈溶液,具體結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果表明,在純乙腈中,沙丁胺醇與賽庚啶的回收率僅有60%左右,而在70%的乙腈溶液中,萊克多巴胺、克倫特羅、賽庚啶、西馬特羅的回收率均低于60%,原因是純乙腈沒(méi)有讓基質(zhì)分散開(kāi),提取效率不高,而70%乙腈濃度又偏低,導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)沒(méi)有很好的提取出來(lái)。通過(guò)圖表可以清楚的判斷出,含0.2%(v/v)甲酸的85%乙腈溶液的提取溶劑對(duì)11 種物質(zhì)的提取效果最好,均滿足要求。
圖3 不同乙腈濃度下各化合物回收率對(duì)比Fig.3 Comparison of recoveries using different acetonitrile concentrations
研究甲醇濃度比例對(duì)各化合物的影響,分別選用含0.2%(v/v)甲酸的純甲醇、含0.2%(v/v)甲酸的85%甲醇溶液、含0.2%(v/v)甲酸的70%甲醇溶液,與乙腈的提取溶劑做相應(yīng)對(duì)比,如圖4。從圖4中可以清晰的看出,甲醇對(duì)于賽庚啶基本提取不到,回收率幾乎均為零。賽庚啶是易溶于甲醇的,在過(guò)PRIME HLB 小柱時(shí),均被吸附在小柱里,沒(méi)能洗脫出來(lái)。因此,不能選擇甲醇溶液作為提取溶劑。
圖4 不同甲醇濃度比例下各化合物回收率對(duì)比Fig.4 Comparison of recoveries using different Methanol concentrations
另外甲酸的添加對(duì)提取效果也有影響,見(jiàn)圖5。在85%乙腈溶液中分別不添加、添加0.1%(v/v)、添加0.2%(v/v)的甲酸溶液,添加1.0%(v/v)的甲酸溶液,觀察每種物質(zhì)的回收率,不加甲酸的情況下,沙丁胺醇回收率只有40%,其他物質(zhì)的回收率也均在60%~85%期間,而添加0.1%或0.2%的甲酸,提取效果非常好且基本相同,但是,溴莫尼定這種物質(zhì),提取液若是含0.2%,回收率在70%左右,比其他兩種提取液的回收率高一些,加酸可以促進(jìn)其離子化,但是添加甲酸量到1.0%時(shí),回收率沒(méi)有明顯改變,最后選擇添加0.2%(v/v)甲酸的85%乙腈溶液作為最終提取溶劑。
圖5 不同甲酸濃度下各化合物回收率對(duì)比Fig.5 Comparison of analyte recoveries using different concentrations of formic acid
2.2.2 凈化方式的選擇 本實(shí)驗(yàn)采用三種凈化方式,方式一不凈化,方式二通過(guò)Waters Oasis PRiME HLB 通過(guò)式固相萃取小柱凈化、方式三通過(guò)Agilent EMR Lipid 凈化管凈化。結(jié)果見(jiàn)圖6,不進(jìn)行凈化,直接上機(jī),雖然有一定的回收率,但雜質(zhì)較多,對(duì)儀器是有一定的損害的,并且基質(zhì)的去除很有限,因此回收率偏低。其他兩種的凈化方式回收率相當(dāng),但溴莫尼定用EMR Lipid 凈化管,回收率比PRiME HLB低一些,因此選擇Waters Oasis PRiME HLB 通過(guò)式固相萃取小柱進(jìn)行凈化。
圖6 不同凈化條件下各化合物回收率對(duì)比Fig.6 Comparison of recoveries using different clean-up methods
在農(nóng)獸藥物殘留檢測(cè)方面,存在著兩方面的影響,一個(gè)是基質(zhì)效應(yīng),由于樣品基質(zhì)復(fù)雜,基質(zhì)對(duì)分析過(guò)程會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的干擾,另一個(gè)是溶劑效應(yīng),當(dāng)樣品溶劑與流動(dòng)相溶劑強(qiáng)度不同時(shí),峰形可能前展或者拖尾,二者均會(huì)影響目標(biāo)物的定量。
2.3.1 基質(zhì)效應(yīng)的影響 在運(yùn)用質(zhì)譜檢測(cè)的過(guò)程中,樣品基質(zhì)會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響,對(duì)目標(biāo)物有抑制或增強(qiáng)作用,統(tǒng)稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng),影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度?;|(zhì)效應(yīng)消除常用方法有同位素內(nèi)標(biāo)法[30?31]、空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線法[32]、前處理方法優(yōu)化[33]等,同位素內(nèi)標(biāo)法是消除基質(zhì)效應(yīng)最好的方法,但其缺點(diǎn)是同位素內(nèi)標(biāo)價(jià)格昂貴,不易購(gòu)買(mǎi)。本文前處理方法中,使用PRIME HLB 小柱可去除部分基質(zhì),凈化后的樣品是否還存在基質(zhì)效應(yīng)的影響,可以利用流動(dòng)相和空白基質(zhì)提取液分別配制標(biāo)準(zhǔn)品的方式來(lái)驗(yàn)證。
用流動(dòng)相配制一份標(biāo)準(zhǔn)溶液,濃度為1 ng/mL,再按前處理步驟得到一份空白前處理液,用其配制濃度為1 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液,比較每種物質(zhì)在流動(dòng)相中和基質(zhì)中的峰面積,得到基質(zhì)響應(yīng)相對(duì)強(qiáng)度(ME),若ME>100%,表明基質(zhì)對(duì)離子起到增強(qiáng)作用,反之則為抑制作用,從表4中可以看出,除西馬特羅是基質(zhì)增強(qiáng)外,其他均為基質(zhì)抑制作用,而溴莫尼定、沙丁胺醇和特布他林的ME 值均在60%以下,說(shuō)明基質(zhì)對(duì)其抑制很?chē)?yán)重,因此選擇用空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
表4 11 種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液在空白基質(zhì)提取液和初始流動(dòng)相中的峰面積Table 4 Peak area of 11 substances in blank matrix extracting solution and initial mobile phase
ME(%)=基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)峰面積/流動(dòng)相標(biāo)準(zhǔn)峰面積×100
2.3.2 溶劑效應(yīng)的影響 溶劑效應(yīng)會(huì)影響物質(zhì)的峰形與峰寬,因?yàn)榍疤幚磉^(guò)程當(dāng)中,所用提取液為85%乙腈水溶液,而儀器所用初始流動(dòng)相為5%乙腈水溶液,樣品溶液的溶劑強(qiáng)度強(qiáng)于流動(dòng)相溶劑強(qiáng)度時(shí)會(huì)造成的峰展寬、峰分叉現(xiàn)象,從而影響定量。為了減少溶劑效應(yīng),在進(jìn)樣之前用流動(dòng)相按1:1 比例稀釋?zhuān)纯山鉀Q溶劑效應(yīng)的問(wèn)題。
選取11 種物質(zhì)濃度為1 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中間液配制標(biāo)準(zhǔn)工作液,定容溶劑為空白基質(zhì)溶液,在0.1~100 μg/L 的范圍內(nèi)選取0.1、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 μg/L 幾個(gè)濃度點(diǎn),以濃度為橫坐標(biāo)x,待測(cè)物峰面積為縱坐標(biāo)y,繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線,呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)在0.9992~0.9999。以目標(biāo)物在空白樣品中的3 倍SNR 值計(jì)算檢出限,檢出限為0.5 μg/kg,11 種受體激動(dòng)劑的線性范圍、回歸方程和檢出限見(jiàn)表5。
表5 11 種物質(zhì)的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限Table 5 Linear ranges,regression equation,R2 and limits of detection (LODs) of 11 substances
分別向空白豬肉樣品基質(zhì)中添加各自的檢出限,2 倍檢出限,10 倍檢出限標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)行3 個(gè)水平的加標(biāo)回收率試驗(yàn),按照本方法進(jìn)行前處理,所得結(jié)果的平均回收率在81.3%~117.6%之間,RSD 值在0.7%~6.5%之間,具體數(shù)值見(jiàn)表6。
表6 11 種物質(zhì)的加標(biāo)回收試驗(yàn)及精密度(n=6)Table 6 Recovery and precision for 11 substances (n=6)
豬肉樣品30 批次,采用本文所建立的方法進(jìn)行檢測(cè)之后,結(jié)果顯示,有2 批次克倫特羅檢出陽(yáng)性樣品,分別為1.51 和2.13 μg/kg。用另一臺(tái)Waters UPLCMS/MS 檢測(cè)后,分別為1.46 和2.09 μg/kg,排出了內(nèi)源性污染源的可能性。這兩批次豬肉為市集所購(gòu),市集攤位流動(dòng)性大,豬肉來(lái)源不明,養(yǎng)殖戶添加了克倫特羅違禁藥物,因此本方法可以應(yīng)用在風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)樣品及突發(fā)事件的及時(shí)處置當(dāng)中。
本實(shí)驗(yàn)采用通過(guò)式固相萃取小柱提取豬肉里的目標(biāo)化合物,超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè),建立了11 種受體激動(dòng)劑同步測(cè)定的方法。該方法凈化步驟簡(jiǎn)單,高效便捷,覆蓋多種受體激動(dòng)劑,在耗材成本上大大縮減,與SPE 凈化方式相比,有著明顯的優(yōu)勢(shì)??紤]到溶劑效應(yīng),用1:1 比例稀釋凈化液即可消除影響。配合空白基質(zhì)配制標(biāo)曲的方式,基本消除了基質(zhì)效應(yīng)的影響,檢出限與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)相當(dāng)[25?26],回收率、精密度等均滿足要求。通過(guò)豬肉中的受體激動(dòng)劑實(shí)際檢測(cè)結(jié)果可知,該方法有一定可靠性,可以很好地用于實(shí)際豬肉檢測(cè)當(dāng)中。