SHCBP1 表達(dá)與宮頸癌患者預(yù)后相關(guān)性的研究

林莉香

在全球女性癌癥患者中，宮頸癌的發(fā)病率及病死率均排名第四[1]，而其在發(fā)展中國家是僅次于乳腺癌的第二大最常見的癌癥[2]。隨著宮頸癌篩查的普及，盡早接受根治性切除術(shù)可極大地改善早期宮頸癌患者的預(yù)后，但中晚期患者接受治療后的生存期仍不理想[3]。因此，有必要鑒定新的生物標(biāo)記物以改善宮頸癌的診斷和預(yù)后。

SHCBP1（SHC SH2 結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白1）是一種最早在活化的淋巴細(xì)胞中被鑒定的蛋白質(zhì)，可與銜接蛋白SHC 的SH2 結(jié)構(gòu)域相互結(jié)合，可能在調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程的信號(hào)通路中發(fā)揮作用[4]。近年來，越來越多的證據(jù)揭示了SHCBP1 在癌癥進(jìn)展中的關(guān)鍵作用。例如，SHCBP1 被證實(shí)可促進(jìn)胃癌的生長及侵襲[5]。此外，神經(jīng)膠質(zhì)瘤中SHCBP1 的高表達(dá)與患者較差的預(yù)后有關(guān)[6]。然而，尚未有研究報(bào)道SHCBP1在宮頸癌中的功能作用。本研究旨在揭示SHCBP1表達(dá)與宮頸癌患者預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床病例資料 選取2013 年3 月～2015 年10 月期間于中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬?？卺t(yī)院婦產(chǎn)科行手術(shù)治療，且病理診斷為宮頸癌的病例61例（表1），收集所有病例的癌及癌旁組織樣本并儲(chǔ)存于液氮罐中，所有病例均簽署患者知情同意書。所有病例入院后接受常規(guī)手術(shù)或以手術(shù)為主的綜合治療，術(shù)前均未接受過宮頸癌相關(guān)的手術(shù)治療及放、化療，出院后以電話、短信或查閱病案資料等進(jìn)行定期隨訪調(diào)查，隨訪截止日期為2020 年10 月。

1.2 總RNA 提取及定量PCR 實(shí)驗(yàn) 將癌與癌旁組織樣本在組織研磨儀（武漢賽維爾生物科技公司）中充分研磨后，利用總RNA 提取試劑盒（北京索萊寶科技公司）提取總RNA。應(yīng)用核酸濃度測定儀（美國Bio-rad 公司）測定RNA 濃度后，再利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（德國Qiagen 公司）合成cDNA。按比例配制PCR 反應(yīng)體系，置于熒光定量PCR 儀（美國ABI 公司）中擴(kuò)增40 個(gè)循環(huán)。將GAPDH 的mRNA表達(dá)水平用于進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，利用2-ΔΔCT法計(jì)算相較于癌旁組織，宮頸癌組織中SHCBP1 的mRNA 表達(dá)量的相對(duì)倍數(shù)。將上述相對(duì)倍數(shù)的中位值作為區(qū)分癌組織中SHCBP1 高表達(dá)或低表達(dá)的界定值。引物由南京金斯瑞生物科技公司合成，具體序列如下：SHCBP1，上游：5′-GCTACCGTGATAAACCAGGTTC-3′，下游：5′-AGGCTCTGAATCGCTCATAGA-3′，GAPDH，上游：5′-TGGAGAAACCTGCCAAGTATG-3′，下游：5′-GGAGACAACCTGGTCCTCAG-3′。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用非參數(shù)檢驗(yàn)分析兩個(gè)獨(dú)立組或多個(gè)組之間SHCBP1 表達(dá)的差異。SHCBP1 表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性采用χ2檢驗(yàn)。根據(jù)Kaplan-Meier法，并利用GraphPad Prism 7.0 軟件構(gòu)建生存曲線，應(yīng)用Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行比較。應(yīng)用Cox回歸分析評(píng)估宮頸癌患者預(yù)后因素。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均使用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織中SHCBP1 的表達(dá)情況 結(jié)果顯示與癌旁組織相比，處于不同臨床分期（Ⅰ～Ⅳ期）的宮頸癌組織樣本中，SHCBP1 的mRNA 表達(dá)量均顯著增加（P<0.01），并且隨患者臨床分期的增加而增加（圖1A）。此外，相較于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，SHCBP1 在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者樣本中的mRNA 表達(dá)量顯著增加（P<0.01）（圖1B）。

圖1 宮頸癌組織中SHCBP1 的表達(dá)情況

2.2 SHCBP1 表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性 結(jié)果顯示與SHCBP1 表達(dá)顯著相關(guān)的包括：組織分化程度（P=0.018）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)（P=0.002）以及臨床分期（P=0.004），而無顯著相關(guān)性的包括：組織學(xué)類型（P=0.612）、年齡（P=0.124）以及腫瘤大?。≒=0.198），詳見表1。

表1 SHCBP1 表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性

2.3 宮頸癌組織中SHCBP1 表達(dá)與患者生存期的相關(guān)性 結(jié)果顯示SHCBP1 高表達(dá)組的宮頸癌患者的總生存期顯著短于SHCBP1 低表達(dá)組（P=0.006），其中位生存期為46 個(gè)月（圖2A）。此外，SHCBP1 高表達(dá)組的宮頸癌患者的無瘤生存期同樣顯著短于SHCBP1 低表達(dá)組（P=0.005），其中位生存期為40個(gè)月（圖2B）。

圖2 基于SHCBP1 表達(dá)的宮頸癌患者生存分析

2.4 宮頸癌患者預(yù)后因素分析 單因素Cox 回歸分析結(jié)果顯示，顯著影響宮頸癌患者預(yù)后的因素包括：組織分化程度（HR=0.143，P<0.001）、SHCBP1表達(dá)水平（HR=2.808，P=0.009）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)（HR=7.350，P<0.001）以及臨床分期（HR=6.434，P<0.001），而無顯著影響的因素包括：腫瘤大?。℉R=0.746，P=0.434）、組織類型（HR=0.459，P=0.445）及年齡（HR=0.566，P=0.146）。進(jìn)一步的多因素分析結(jié)果顯示，宮頸癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素包括：SHCBP1表達(dá)水平（HR=3.325，P=0.027）及臨床分期（HR=5.683，P<0.001），保護(hù)因素包括組織分化程度（HR=0.186，P<0.001），而無顯著影響的因素包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)（HR=2.135，P=0.107），詳見表2。

表2 Cox 回歸分析宮頸癌患者的預(yù)后因素

3 討論

SHC 是一種細(xì)胞表面受體銜接蛋白，可以參與多種因子（如生長因子、細(xì)胞因子和整合素等）介導(dǎo)的信號(hào)通路，進(jìn)而可參與調(diào)控細(xì)胞的存活、增殖、分化和遷移，并在血管生成和腫瘤發(fā)生中發(fā)揮作用[7]。SHCBP1 可通過與SHC 的SH2 結(jié)構(gòu)域相互結(jié)合而發(fā)揮其生物學(xué)作用[8]。SHCBP1 在胚胎組織中及增殖旺盛的睪丸組織中強(qiáng)烈表達(dá)，而在心臟和骨骼肌等靜止組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)，這個(gè)結(jié)果提示SHCBP1 可能在細(xì)胞增殖的調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用[4]。至今，越來越多的研究結(jié)果表明SHCBP1 在多種癌癥組織（包括食管癌、陰莖癌、肺癌等）中呈現(xiàn)高表達(dá)的模式[9-11]。與這些研究結(jié)果一致的是，本研究中我們同樣發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中SHCBP1 的表達(dá)顯著上調(diào)。此外，本研究發(fā)現(xiàn)SHCBP1 在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者樣本中的表達(dá)量同樣顯著增加。并且

在進(jìn)一步的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析中，宮頸癌中SHCBP1 表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)之間也被證實(shí)呈顯著相關(guān)，這些結(jié)果提示擁有高表達(dá)SHCBP1 的宮頸癌患者更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在前期關(guān)于陰莖癌及乳腺癌的研究報(bào)道中，SHCBP1 的表達(dá)被證實(shí)與患者的臨床分期、組織分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)等因素之間顯著相關(guān)[12-13]。此外，與這些結(jié)果一致的是，本研究結(jié)果顯示與宮頸癌中SHCBP1 表達(dá)顯著相關(guān)的因素還包括組織分化程度和臨床分期，而不包括組織病理類型、年齡以及腫瘤大小這些因素。然而，在前期關(guān)于甲狀腺乳頭狀癌的研究報(bào)道中，SHCBP1 的表達(dá)被證實(shí)與患者的臨床分期之間無相關(guān)性，而與患者的年齡顯著相關(guān)[14]。這個(gè)結(jié)果差異提示在不同種類的癌癥中SHCBP1 的表達(dá)模式并不一樣，然而筆者也推測這個(gè)結(jié)果差異可能是由于不同研究的偏倚造成的。

前期研究報(bào)道SHCBP1 可通過靶向TGF-β1/Smad 信號(hào)通路而促進(jìn)滑膜肉瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，并與患者的預(yù)后不良相關(guān)[15]。此外，SHCBP1 的表達(dá)水平還被證實(shí)與肺癌、胰腺癌及前列腺癌患者的生存期呈顯著的負(fù)相關(guān)[16-18]，提示高表達(dá)水平的SHCBP1 可預(yù)示患者預(yù)后不良。在本研究中，生存分析結(jié)果顯示高表達(dá)水平的SHCBP1 可顯著縮短宮頸癌患者的總生存期及無瘤生存期，提示SHCBP1 是一個(gè)潛在的宮頸癌預(yù)后指標(biāo)。與單純的對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)相比，Cox回歸分析可用于分析生存時(shí)間與多個(gè)危險(xiǎn)因素的回歸關(guān)系。因此，本研究采用Cox回歸分析進(jìn)一步評(píng)估分析宮頸癌患者的預(yù)后因素。我們的結(jié)果顯示不管是單因素還是多因素分析，SHCBP1 的表達(dá)水平及臨床分期均是宮頸癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素，而組織分化程度是其保護(hù)因素。這個(gè)結(jié)果可為SHCBP1作為一個(gè)潛在的宮頸癌預(yù)后指標(biāo)提供進(jìn)一步佐證。而我們的結(jié)果同樣顯示，在單因素Cox回歸分析時(shí)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的風(fēng)險(xiǎn)比為7.350，在多因素Cox回歸分析時(shí)其風(fēng)險(xiǎn)比是2.135，前者具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，然而后者差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示其可能不是危害宮頸癌患者預(yù)后的因素。然而筆者推測這個(gè)結(jié)果可能受到本研究的樣本量較小這個(gè)因素的影響。同時(shí)，本研究認(rèn)為樣本量較小是本研究的局限性。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示宮頸癌組織中SHCBP1 的表達(dá)顯著上調(diào)，且SHCBP1 的表達(dá)水平與宮頸癌患者生存期呈顯著的負(fù)相關(guān)，提示SHCBP1 是一個(gè)潛在的宮頸癌預(yù)后指標(biāo)。但是，SHCBP1 對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖等特性的作用及其可能的分子機(jī)制尚需進(jìn)一步的研究。