清開(kāi)靈注射液對(duì)急性腦缺血大鼠不規(guī)則趨化因子表達(dá)的影響

劉豫玥 閆楊楊 狄波 潘彥舒

摘要 目的：觀察清開(kāi)靈注射液對(duì)大鼠腦梗死缺血性損傷急性期階段，不規(guī)則趨化因子（Fractalkine，F(xiàn)KN）的表達(dá)變化，探討清開(kāi)靈注射液治療急性腦缺血的可能機(jī)制。方法：線(xiàn)栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈永久性梗死模型（MCAO），隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組，清開(kāi)靈注射液觀察組，TTC染色觀察大鼠治療前后腦組織梗死體積變化，同時(shí)采用蛋白芯片、ELISA和免疫組化法分別檢測(cè)腦脊液、外周血清及腦組織中FKN的表達(dá)水平。結(jié)果：腦組織TTC染色顯示模型組均出現(xiàn)明顯梗死灶，清開(kāi)靈觀察組的梗死體積明顯縮減。與模型組比較，清開(kāi)靈觀察組明顯下調(diào)病變局部腦組織的FKN（P<0.05），且能明顯上調(diào)血清中的FKN（P<0.05），同時(shí)觀察到其可上調(diào)腦脊液及全腦的FKN，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：清開(kāi)靈注射液能縮小腦梗死體積，減輕急性腦缺血性損傷，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)FKN的表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞 急性腦缺血;不規(guī)則趨化因子;清開(kāi)靈注射液;大鼠

Effect of Qingkailing Injection on the Expression of Irregular Chemokines in Rats with Acute Cerebral Ischemia

LIU Yuyue1，YAN Yangyang2，DI Bo3，PAN Yanshu4

（1 Dongfang Hospital Affiliated to Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100078，China; 2 Dongzhimen Hospital

Affiliated to Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100070，China; 3 China Academy of Chinese medical

Science，Beijing 100070，China; 4 Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Abstract Objective：To observe the expression changes of irregular chemokine （Fractalkine，F(xiàn)KN） in the acute phase of ischemic injury of rat cerebral infarction by Qingkailing Injection，and to explore the possible mechanism of Qingkailing Injection in the treatment of acute cerebral ischemia.Methods：A rat model of permanent middle cerebral artery infarction （MCAO） was prepared by suture method and randomly divided into a sham operation group，a model group，and a Qingkailing Injection treatment group.TTC staining was used to observe the changes in infarct volume of rat brain tissue before and after treatment.Protein chip，ELISA and immunohistochemistry were used to detect the expression level of FKN in cerebrospinal fluid，peripheral serum and brain tissue.Results：TTC staining of brain tissue showed that there were obvious infarcts in the model group，and the infarct volume in the Qingkailing treatment group was significantly reduced.Compared with the model group，the Qingkailing treatment group significantly down-regulated the FKN of the diseased local brain tissue （P<0.05），and significantly increased the FKN in the serum （P<0.05）.It was observed that it could up-regulate the cerebrospinal fluid and the whole brain FKN.But the difference was not statistically significant （P>0.05）.Conclusion：Qingkailing Injection can reduce the volume of cerebral infarction and reduce acute cerebral ischemic injury.The mechanism may be related to the regulation of FKN expression.

Keywords Acute cerebral ischemia; Fractalkine; Qingkailing Injection; Rat

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5;R743文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.02.014

急性腦缺血損傷可繼發(fā)引起炎性反應(yīng)及應(yīng)答，產(chǎn)生的一系列炎性因子，其始動(dòng)環(huán)節(jié)離不開(kāi)一系列趨化因子的參與。不規(guī)則趨化因子（Fractalkine，F(xiàn)KN）是家族中較少的在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中組成性表達(dá)的趨化因子之一，近年來(lái)在急性腦缺血性損傷中的作用也逐漸受到關(guān)注。FKN主要集中分布在大腦皮質(zhì)、海馬、尾狀殼核、丘腦、嗅球[1]，缺血再灌注損傷的腦海馬中FKN信號(hào)顯著增加，抑制CX3CR1受體功能，進(jìn)一步激活更多的小膠質(zhì)細(xì)胞及炎性反應(yīng)因子表達(dá)水平，加重中樞神經(jīng)炎性反應(yīng)及認(rèn)知損害[2]，而炎性反應(yīng)的程度與急性腦缺血損傷程度密切相關(guān)。團(tuán)隊(duì)前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)清開(kāi)靈注射液能夠升高腦缺血大鼠的行為學(xué)神經(jīng)功能評(píng)分，減輕腦組織病理?yè)p傷[3]，但其分子機(jī)制目前尚不是十分清楚，本研究觀察急性腦梗死引發(fā)的急性腦缺血損傷，檢測(cè)FKN表達(dá)變化，探討清開(kāi)靈注射液治療急性腦缺血的作用機(jī)制。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 健康雄性SPF級(jí)8～9周齡Wistar大鼠，體質(zhì)量（300±20）g，購(gòu)于北京維通利華公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SCXK（京）2007-0001]，質(zhì)量合格證號(hào)：0243109。所有動(dòng)物在北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度控制在22 ℃，相對(duì)濕度60%，12 h光/暗周期，自由飲水。

1.1.2 藥物 清開(kāi)靈注射液（北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠(chǎng)，批號(hào)：913204A）購(gòu)于北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院，無(wú)菌生理鹽水（澤葉生物有限公司，貨號(hào)：ZY034）購(gòu)于北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院。

1.1.3 試劑與儀器 FKN ELISA試劑盒[EBSBL（美國(guó)），貨號(hào)：4431];FKN抗體[Bio Vision（美國(guó)），貨號(hào)：5088-100];Super Polymer-二步法IHC試劑盒（北京康為世紀(jì)生物科技公司，批號(hào)：CW0177），DAB顯色試劑盒（北京康為世紀(jì)生物科技，批號(hào)：CW0125）;大鼠細(xì)胞因子抗體芯片試劑盒[Ray Bio（美國(guó)），貨號(hào)：AAR-CYT-119]，BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒（上?？党缮?，批號(hào)：KTD3001）、磷酸緩沖液PBS（艾美捷科技有限公司，美國(guó)，貨號(hào)：PBL07-6X500ML），低溫離心機(jī)（Eppendorf公司，德國(guó)，型號(hào)：Centrifuge 5810 R）、光學(xué)顯微鏡（徠卡，德國(guó)，型號(hào)：DM1000）、組織切片機(jī)（徠卡，德國(guó)，型號(hào)：RM2235）、組織包埋機(jī)（徠卡，德國(guó)，型號(hào)：EG1150H+EG）、染色機(jī)（賽默飛，美國(guó)，型號(hào)：Gemini）、酶標(biāo)儀（南京貝登醫(yī)療股份有限公司，型號(hào)：MR-96A）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 健康雄性Wistar大鼠，共39只，平均分為假手術(shù)組、模型組、清開(kāi)靈治療組。參照Z(yǔ)ea Longa等[4]報(bào)道的方法進(jìn)行改良，建立大鼠左側(cè)大腦半球永久性大腦中動(dòng)脈栓塞（Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO）模型，Wistar大鼠采用10%水合氯醛（0.4 mL/100 g體質(zhì)量）腹腔注射進(jìn)行麻醉，仰臥固定于手術(shù)板上，頸部偏左切開(kāi)，逐層分離組織，暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈（Common Carotid Artery，CCA）、頸外動(dòng)脈（External Carotid Artery，ECA）、頸內(nèi)動(dòng)脈（Internal Carotid Artery，ICA），永久結(jié)扎CCA近心端、ECA根部，微動(dòng)脈夾暫時(shí)夾閉CCA的遠(yuǎn)心端，在CCA結(jié)扎處遠(yuǎn)心端剪一斜口，經(jīng)此斜口插入頂端光滑成球面的直徑0.24 mm的尼龍線(xiàn)，經(jīng)CCA分叉處通過(guò)ICA入顱至大腦前動(dòng)脈（Anterior Cerebral Artery，ACA）的起始部，從而閉塞了大腦中動(dòng)脈（Middle Cerebral Artery，MCA）的起始部，造成MCA供血相關(guān)區(qū)的梗死。尼龍線(xiàn)平均插入深度為（18.5±0.5）mm，結(jié)扎CCA遠(yuǎn)心端以固定尼龍線(xiàn)和防止出血，減去尼龍繩尾端，逐層縫合組織，模擬急性腦缺血梗死。術(shù)后6 h參照Longa神經(jīng)癥狀評(píng)分，選總分高于4分者的大鼠進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。見(jiàn)表1。

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.2.1 TTC法檢測(cè)腦梗死體積 術(shù)后24 h，假手術(shù)組取10只，模型組及清開(kāi)靈觀察組各取13只大鼠新鮮大腦組織-20 ℃冰箱冷凍20 min后，冠狀面均勻切5片，將切片避光放入1%TTC染液中30 min，梗死部位呈白色，假手術(shù)組腦組織呈紅色。將切片依次擺好，拍照，采用Image-pro Plus 5.0軟件計(jì)算梗死體積。

1.2.2.2 蛋白芯片法和酶聯(lián)免疫法檢測(cè)FKN的濃度 術(shù)后24 h，假手術(shù)組取10只，模型組及清開(kāi)靈觀察組各取13只抽取清亮腦脊液，混合，3 000 r/min，離心半徑13.5 cm，離心10 min，蛋白芯片試劑盒檢測(cè);腹主動(dòng)脈取血5 mL，靜置30 min，析出血清，3 000 r/min，離心半徑13.5 cm，離心15 min，取上清液，ELISA試劑盒檢測(cè);新鮮缺血側(cè)大腦皮質(zhì)，按重量體積比加冰冷生理鹽水制備成10%的組織勻漿，3 000 r/min，離心半徑13.5 cm，離心10 min，ELISA試劑盒檢測(cè)。

1.2.2.3 HE染色 各組動(dòng)物術(shù)后24 h采用4%多聚甲醛經(jīng)心臟灌流前固定，斷頭取腦后放入4%多聚甲醛中后固定24 h，乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟，行石蠟包埋，制成5 μm厚度的大腦同一冠狀面石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水，入Harris蘇木精染色5 min，自來(lái)水沖洗，50%的鹽酸乙醇分色30 s，水洗后酸化伊紅復(fù)染10 min，水洗、脫水、透明、中性樹(shù)膠封片，光鏡下觀察。

1.2.2.4 免疫組化法測(cè)定FKN表達(dá) 石蠟切片制備同前。1）PBS（pH=7.4）沖洗3 min×3次;2）熱修復(fù)2 min;3）滴加3%過(guò)氧化氫，室溫下孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化酶的活性;PBS沖洗3 min×3次;4）滴加稀釋好的第一抗體（濃度均為1∶200），4 ℃過(guò)夜;5）PBS沖洗3 min×3次，除去PBS液;6）滴加即用型Super Polymer試劑，室溫下孵育10～15 min，PBS沖洗3 min×3次;7）除去PBS液，滴加新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察3～5 min;8）自來(lái)水沖洗終止顯色反應(yīng)，蘇木素輕度復(fù)染，水洗泛藍(lán);9）梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。各組均設(shè)定一陰性對(duì)照組，PBS代替一抗，其余條件相同。

1.2.2.5 圖像分析 每張切片的梗死缺血皮層區(qū)隨機(jī)選取5個(gè)不重疊高倍視野，用顯微鏡圖像采集系統(tǒng)采集圖像，并用Image-pro Plus 5.0圖像分析軟件計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，平均光密度來(lái)反映切片上缺血側(cè)皮層區(qū)陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)目。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性及方差性檢驗(yàn)采用單因素方差分析，2組間比較采用LSD檢驗(yàn);以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦梗死體積檢測(cè) TTC染色，正常腦組織呈紅色，梗死組織呈白色。假手術(shù)組：大腦紅染，未發(fā)現(xiàn)任何白色梗死區(qū)域。模型組出現(xiàn)明顯白色梗死灶，主要集中在左側(cè)大腦中動(dòng)脈供血區(qū)（左側(cè)前2/3腦區(qū)，外側(cè)面的大部分和島葉）;部分尾狀核，豆?fàn)詈?、?nèi)囊膝和后肢的前部等部位也可見(jiàn)白色梗死區(qū)。給予清開(kāi)靈注射液治療后，白色梗死灶體積明顯減?。≒<0.05）。見(jiàn)表2，圖1。

2.2 FKN濃度

2.2.1 腦脊液中FKN的濃度 蛋白芯片法檢測(cè)腦脊液中FKN的表達(dá)水平結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦梗死缺血性損傷24 h后，腦脊液FKN濃度為假手術(shù)組的2.7倍;與相同時(shí)間點(diǎn)模型組比較，清開(kāi)靈注射液治療后，腦脊液FKN濃度為模型組的1.05倍，是假手術(shù)組的2.85倍。見(jiàn)表3。

2.2.2 外周血清及腦組織中FKN的濃度 ELISA檢測(cè)外周血清及腦組織中FKN的表達(dá)水平結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦梗死缺血性損傷24 h，外周血清中FKN表達(dá)水平明顯降低（P<0.05），與相同時(shí)間點(diǎn)模型組比較，清開(kāi)靈注射液治療后，外周血FKN表達(dá)顯著升高，但是仍然低于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦梗死缺血性損傷24 h，腦組織中FKN表達(dá)水平降低，清開(kāi)靈治療后，F(xiàn)KN表達(dá)水平提高，但是三者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表4。

2.3 清開(kāi)靈注射液對(duì)MCAO大鼠腦組織的形態(tài)學(xué)的影響 HE染色光鏡下觀察，假手術(shù)組腦組織結(jié)構(gòu)清晰，神經(jīng)元排列層次清楚，核居中，核仁清晰可見(jiàn)，可見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞散在分布，腦內(nèi)微血管管壁完整。模型組缺血測(cè)腦半球可見(jiàn)明顯的梗死灶，中心區(qū)神經(jīng)元丟失，皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元排列紊亂，胞核和胞質(zhì)界限模糊不清，核仁消失，膠質(zhì)細(xì)胞也呈現(xiàn)不同程度水腫征象，腦內(nèi)微血管管壁扭曲變形;清開(kāi)靈觀察組梗死灶較模型組有明顯減小，神經(jīng)元形態(tài)相對(duì)正常，間質(zhì)炎性反應(yīng)及水腫明顯減輕。見(jiàn)圖2。

2.4 清開(kāi)靈注射液對(duì)大腦FKN表達(dá)的影響 免疫組化染色結(jié)果顯示：FKN主要存在大鼠腦組織神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)，急性腦缺血24 h，血管內(nèi)皮細(xì)胞也可以看到陽(yáng)性表達(dá)。進(jìn)一步分析平均光密度，結(jié)果顯示，F(xiàn)KN在模型組的表達(dá)水平顯著高于假手術(shù)組（P<0.01），而清開(kāi)靈觀察組的表達(dá)水平顯著低于模型組，高于假手術(shù)組（P<0.01）。見(jiàn)表5、圖3。

3 討論

FKN是趨化因子家族中較少的在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中組成性表達(dá)的趨化因子之一，它是一種跨膜糖蛋白，分為膜結(jié)合型和可溶性分子2種形式存在?；贔KN在神經(jīng)系統(tǒng)中獨(dú)特的結(jié)構(gòu)優(yōu)勢(shì)，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)KN是中間神經(jīng)元旁分泌途徑中的始動(dòng)及中心環(huán)節(jié)，促進(jìn)中間神經(jīng)元向少突膠質(zhì)細(xì)胞分化形成[5]，也是一個(gè)能預(yù)示炎性反應(yīng)及血管受損程度的新靶點(diǎn)[6]，能參與介導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）向缺血腦組織的定向遷移[7]。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道也發(fā)現(xiàn)其能參與缺血性腦損傷的病理過(guò)程，在缺血性腦損傷中激活小膠質(zhì)細(xì)胞，增加神經(jīng)炎性反應(yīng)[8]，更加證實(shí)了FKN在缺血性腦損傷中的作用。

本研究證實(shí)，正常腦組織FKN有一些組成性表達(dá)，主要分布在神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞中，內(nèi)皮細(xì)胞中未見(jiàn)明顯表達(dá)，同文獻(xiàn)報(bào)道一致[1];急性腦缺血24 h后，大鼠腦脊液中FKN表達(dá)含量升高，這與局部病變腦組織中FKN的表達(dá)趨勢(shì)一致。腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞上可見(jiàn)FKN陽(yáng)性表達(dá)，受損神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞中FKN的表達(dá)亦有增加，這種變化同文獻(xiàn)報(bào)道一致[2]。血清中FKN的變化同其在腦內(nèi)的微環(huán)境中的變化趨勢(shì)相反，急性腦缺血24 h，血清中FKN的表達(dá)明顯減少。上述表達(dá)趨勢(shì)在全腦組織的檢測(cè)中并不顯著。提示生理狀態(tài)下，F(xiàn)KN主要由神經(jīng)元表達(dá)，其受體在小膠質(zhì)細(xì)胞有表達(dá)，急性腦缺血性損傷，血管內(nèi)皮細(xì)胞具有分泌FKN的功能，推測(cè)其也是FKN表達(dá)活化的始動(dòng)環(huán)節(jié)，神經(jīng)元可能是通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞分泌的信號(hào)因子刺激自身的FKN mRNA擴(kuò)增，導(dǎo)致表達(dá)顯著增加，作為特異性抗體表達(dá)的小膠質(zhì)細(xì)胞，則更多是通過(guò)與FKN結(jié)合導(dǎo)致表達(dá)含量增多。

急性腦缺血屬于中醫(yī)“中風(fēng)病”范疇。王永炎院士在多年臨床實(shí)踐基礎(chǔ)上提出中風(fēng)病“毒損腦絡(luò)”學(xué)說(shuō)認(rèn)為中風(fēng)病與毒邪致病相似，中風(fēng)后產(chǎn)生痰、熱、瘀等毒邪，入侵脈絡(luò)（包括浮絡(luò)、孫絡(luò)和纏絡(luò)），損傷絡(luò)中正氣，營(yíng)衛(wèi)失和，毒邪內(nèi)生，強(qiáng)調(diào)痰毒、熱毒及瘀毒互結(jié)，損傷腦絡(luò)的理論觀點(diǎn)。清開(kāi)靈注射液來(lái)源于傳統(tǒng)安宮牛黃丸，由黃芩苷、梔子、金銀花、水牛角等組成，全方共奏清熱解毒、化痰通絡(luò)、醒神開(kāi)竅之功效。本團(tuán)隊(duì)前期工作顯示清開(kāi)靈注射液能顯著提高臨床治療急性腦缺血有效率，改善患者神經(jīng)功能，降低血清炎性反應(yīng)因子表達(dá)水平[9]，研究也發(fā)現(xiàn)清開(kāi)靈注射液能明顯減輕急性腦出血模型大鼠腦組織水腫程度，減輕炎性反應(yīng)，減少腦組織損傷，加快清除體內(nèi)自由基的作用[10]，藥代動(dòng)力學(xué)的研究也證實(shí)清開(kāi)靈有效組分在大鼠腦缺血性損傷時(shí)代謝更加緩慢[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，清開(kāi)靈注射液能夠顯著下調(diào)急性腦缺血24 h后局灶病變腦組織FKN，上調(diào)血清FKN，縮小腦梗死體積，減輕腦損傷，提示清開(kāi)靈注射液治療急性腦缺血可能與調(diào)節(jié)FKN在腦內(nèi)微環(huán)境表達(dá)有關(guān)，為該藥臨床治療提供了生物學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]Clark AK，Malcangio M.Fractalkine/CX3CR1 signaling during neuropathic pain[J].Front Cell Neurosci，2014，8（121）：1-7.

[2]Briones TL，Woods J，Wadowska M.Retraction Note：Chronic neuroinflammation and cognitive impairment following transient global cerebral ischemia：role of fractalkine/CX3CR1 signaling[J].J Neuroinflammation，2015，12（1）12：220.

[3]徐曉琳，馬重陽(yáng)，王雪茜，等.牛黃中膽酸類(lèi)成分改善大鼠腦缺血再灌注損傷及調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用比較[J].藥物評(píng)價(jià)研究，2017，40（1）：11-19.

[4]Longa EZ，Weinstein RP，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke，1989，20（1）：84-91.

[5]Voronova A，Yuzwa SA，Wang BS，et al.Migrating Interneurons Secrete Fractalkine to Promote Oligodendrocyte Formation in the Developing Mammalian Brain[J].Neuron，2017，94（3）：500-516.

[6]Skoda M，Stangret A，Szukiewicz D.Fractalkine and placental growth factor：A duet of inflammation and angiogenesis in cardiovascular disorders[J].Cytokine Growth Factor Rev，2017，39：116-123.

[7]朱潔，周華東.Fractalkine/CX3CR1參與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向缺血腦組織定向遷移的實(shí)驗(yàn)研究[J].解放軍醫(yī)藥雜志，2014，26（3）：38-42.

[8]陳毓青，唐靈.趨化因子Fractalkine與缺血性腦卒中[J].華夏醫(yī)學(xué)，2015，28（5）：155-159.

[9]付虹，譚喜瑩，戎有和.缺血性腦卒中患者的治療藥物評(píng)價(jià)[J].實(shí)用藥物與臨床，2019，22（1）：69-74.

[10]冉會(huì)敏，羅倫.新清開(kāi)靈注射液干預(yù)大鼠腦出血血腫周?chē)X水腫的作用途徑研究[J].中藥材，2017，40（4）：945-948.

[11]劉學(xué)，蘇菊，杜鵬，等.UPLC-MS/MS分析注射用清開(kāi)靈（凍干）中5種成分在正常大鼠和腦缺血大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)行為[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2019，4（21）：1-7.

（2019-06-12收稿 責(zé)任編輯：王楊）

基金項(xiàng)目：西藏自治區(qū)藏醫(yī)藥區(qū)域協(xié)同創(chuàng)新中心第一批培育項(xiàng)目（2017XTCX014）——西藏產(chǎn)滇黃芩對(duì)腦缺氧損傷的保護(hù)作用研究;北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院1166·中青年專(zhuān)家項(xiàng)目（030903010302）

作者簡(jiǎn)介：劉豫玥（1985.02—），女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)藥防治中風(fēng)病機(jī)制研究，E-mail：liuyuyue1985@126.com

通信作者：潘彥舒（1972.12—），女，博士，教授，研究方向：缺血性腦血管疾病的中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)研究，E-mail：13911209998@163.com