血管內(nèi)皮生長因子與缺血性結(jié)腸炎相關(guān)性

盧翀 胡益冰 丁進(jìn)

[摘要] 目的 研究血管內(nèi)皮生長因子與缺血性結(jié)腸炎相關(guān)性，探討VEGF在缺血性結(jié)腸炎早期診斷中的應(yīng)用價值。 方法 選取2018年6月至2020年3月在我院消化內(nèi)科就診的缺血性結(jié)腸炎患者50例為研究組，選取同期未患病者53例為對照組。比較研究組治療前后與對照組血液中的VEGF表達(dá)水平;血液及結(jié)腸組織中的VEGF RNA表達(dá)水平;分析研究組治療前后血液及結(jié)腸組織中VEGF RNA表達(dá)水平的相關(guān)性。 結(jié)果 治療前研究組血液中VEGF水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。治療前研究組結(jié)腸組織及血液中VEGF RNA表達(dá)水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。研究組治療前后血液及結(jié)腸組織中VEGF RNA表達(dá)水平的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，兩者表達(dá)水平呈正相關(guān)。 結(jié)論 VEGF在缺血性結(jié)腸炎的早期診斷中具有一定的意義，有助于提高早期診斷率，改善患者預(yù)后。

[關(guān)鍵詞] 缺血性結(jié)腸炎;血管內(nèi)皮生長因子;生物醫(yī)學(xué);VEGF RNA

[中圖分類號] R574? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）09-0026-04

The correlation between vascular endothelial growth factor and ischemic colitis

LU Chong? ?HU Yibing? ?DING Jin

Department of Gastroenterology， Affiliated Jinhua Hospital， Zhejiang University School of Medicine， Jinhua? ?321000， China

[Abstract] Objective To study the correlation between vascular endothelial growth factor and ischemic colitis， and to explore the application value of VEGF in the early diagnosis of ischemic colitis. Methods Fifty patients with ischemic colitis who were treated in the Department of Gastroenterology of our hospital from June 2018 to March 2020 were selected as the study group， and 53 patients with no disease during the same period were selected as the control group. The expression levels of VEGF in the blood， the expression levels of VEGF RNA in the colon tissue and in the blood of the study group before and after treatment and between the two groups were compared. The correlation between the expression levels of VEGF RNA in the blood and colon tissue of the study group before and after treatment were analyzed. Results Before treatment， the blood VEGF level in the study group was significantly higher than that in the control group， and the difference was statistically significant（P<0.05）; after treatment， the difference between the two groups was not statistically significant（P>0.05）. Before treatment， the expression levels of VEGF RNA in colon tissue and blood in the study group were significantly higher than those in the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）; after treatment， the differences between the two groups were not statistically significant （P>0.05）. Analysis showed that the correlation between the expression levels of VEGF RNA in blood and colon tissues in the study group before and after treatment were positively correlated. Conclusion VEGF has a certain significance in the early diagnosis of ischemic colitis， which helps to increase the early diagnosis rate and improve the prognosis of patients.

[Key words] Ischemic colitis; Vascular endothelial growth factor; Biological medicine; VEGF RNA

缺血性結(jié)腸炎（Ischemic colitis，IC）是因腸道動脈供血不足或靜脈回流受阻導(dǎo)致的結(jié)腸缺血性損傷性疾病，是缺血性結(jié)腸炎中最常見的臨床類型[1]。IC的臨床表現(xiàn)多種多樣，早期確診較困難，誤診率高，術(shù)后死亡率高達(dá)21%。血液檢測在IC快速診斷中有重要意義[2]。在一定的時間內(nèi)，組織如果沒有獲得充分的血液，機(jī)體為了維護(hù)自身的穩(wěn)定狀態(tài)，會出現(xiàn)一些適應(yīng)性反應(yīng)，現(xiàn)有的文獻(xiàn)提出，缺氧誘導(dǎo)因子1α（Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）和血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）等與上述現(xiàn)象相關(guān)[3]。細(xì)胞處于缺氧狀態(tài)時，泛素蛋白酶體因不斷發(fā)生降解而減少，與此同時，HIF-1α的分子濃度則會不斷升高。VEGF由HIF-1α復(fù)合物產(chǎn)生，其與特異性受體KDR/Flk-1結(jié)合，刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖，從而生成血管[4-5]。本研究旨在分析缺血性結(jié)腸炎及健康人群血液和結(jié)腸組織中VEGF的表達(dá)水平，探討VEGF在IC早期診斷中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年6月至2020年3月在我院消化內(nèi)科就診的IC患者50例為研究組，其中男23例，女27例;年齡41～88歲，平均（62.51±6.24）歲;基礎(chǔ)疾病史包括動脈硬化、高血壓病、高脂血癥、糖尿病、便秘、腹部手術(shù)史。診斷標(biāo)準(zhǔn)：參考2015年美國胃腸學(xué)院發(fā)表的《結(jié)腸缺血的臨床指南》[6]。納入標(biāo)準(zhǔn)[6-8]：①出現(xiàn)IC的臨床癥狀，如腹痛、腹瀉，便血等;②結(jié)腸鏡提示腸壁缺血表現(xiàn)或術(shù)中發(fā)現(xiàn)結(jié)腸缺血、壞死;③腹部影像學(xué)結(jié)果提示，伴（或不伴）腸壁增厚、腸腔狹窄、腸管擴(kuò)張、腹腔積氣積液及腹部血管狹窄或閉塞等。排除標(biāo)準(zhǔn)：①感染性結(jié)腸炎、假膜性腸炎、炎癥性腸病、憩室炎和結(jié)腸癌等相關(guān)疾病;②資料不完整。選取同期未患病者53例為對照組，其中男25例，女28例;年齡43～84歲，平均（63.27±5.32）歲;入組前均進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查，并且未發(fā)現(xiàn)結(jié)腸病變。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有研究對象及其家屬簽署知情同意書。

1.2 方法

收集兩組研究對象入院時血液樣本1 mL，采用離心機(jī)（1000 g，10 min）分離血清，保存至-80℃冰箱內(nèi)。

收集患者結(jié)腸組織勻漿，通過RNA試劑盒（RNeasy Mini Kit，Qiagen，Valencia）提取樣本自身RNA[9]。采用ABI prism 7700系統(tǒng)（TaqMan PCR，Applied Biosystems）、Assays-on-Demand引物、探針組Hs00153153m1及TaqMan Assay試劑4339277F進(jìn)行RT-PCR分析，以GADPH為內(nèi)參照，測定VEGF的表達(dá)水平[10]。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒（Human VEGF Immunoassay Quantikine，R&D Systems，Minneapolis，USA）說明書進(jìn)行操作，獲得VEGF濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而檢測出兩組患者血清中VEGF的表達(dá)水平[11-12]。

為保證檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性，研究組結(jié)腸鏡檢查時取活檢標(biāo)本3處，其中2處位于病變結(jié)腸黏膜，1處位于正常結(jié)腸黏膜;對照組結(jié)腸鏡檢查時取活檢標(biāo)本3處，其中2處位于降結(jié)腸黏膜，1處位于乙狀結(jié)腸黏膜。將活檢標(biāo)本置于含有100 μL RNA穩(wěn)定劑的1.5 mL Microfuge管中，置于-80℃冰箱內(nèi)保存，隨后對所有標(biāo)本進(jìn)行RT-PCR分析[13]。

研究組保守治療為主，予全身應(yīng)用廣譜抗生素、禁食等，鼻飼拜阿司匹林腸溶片（Bayer Vital GmbH，批準(zhǔn)文號：J20080078，規(guī)格：100 mg）100 mg，1次/d，療程為14 d。所有研究對象均不使用其他活血化瘀中藥、降纖酶、抗凝劑或溶栓治療。研究組治療7～10 d后臨床癥狀明顯緩解，復(fù)查結(jié)腸鏡顯示病變結(jié)腸黏膜接近正常，同時可見瘢痕，采用上述方法收集研究組治療后的血清及結(jié)腸組織標(biāo)本進(jìn)行檢測分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用（x±s）表示，采用t檢驗;計數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義[14]。

2 結(jié)果

2.1 兩組血液中VEGF水平比較

治療前研究組血液中VEGF水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。經(jīng)過7～10 d積極治療，研究組患者結(jié)腸組織過表達(dá)的VEGF基本恢復(fù)正常水平。

2.2 兩組VEGF RNA表達(dá)水平比較

治療前研究組結(jié)腸組織及血液中VEGF RNA表達(dá)水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表2～3。經(jīng)過7～10 d積極治療，研究組患者結(jié)腸組織區(qū)域過表達(dá)的VEGF RNA基本恢復(fù)正常水平。

2.3研究組血液及結(jié)腸組織中VEGF RNA表達(dá)水平相關(guān)性分析

對研究組治療前后血液及結(jié)腸組織中VEGF RNA表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，兩者表達(dá)水平呈正相關(guān)。

3討論

缺血性結(jié)腸炎發(fā)病急，具有腹痛、便血癥狀消失快，結(jié)腸黏膜病變恢復(fù)快的疾病特點[15-16]。目前結(jié)腸鏡檢查是缺血性結(jié)腸炎的首選診斷手段和金標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)腸鏡檢查所見結(jié)合活檢病理可與腸結(jié)核、炎癥型腸病及結(jié)腸腫瘤相鑒別[17]。缺血性結(jié)腸炎發(fā)病急，又缺乏特異的臨床表現(xiàn)，雖然結(jié)腸鏡為缺血性結(jié)腸炎診斷的主要方法，但其為有創(chuàng)性檢查，且對于可疑壞疽型缺血型腸炎，則禁忌結(jié)腸鏡檢查[18]。探索缺血性結(jié)腸炎診斷的簡便、快捷的血液標(biāo)志物協(xié)助結(jié)腸鏡診斷，為今后的發(fā)展方向。

本研究結(jié)果顯示，治療前研究組血液中VEGF水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。經(jīng)過7～10 d積極治療，研究組患者結(jié)腸組織黏膜損傷基本恢復(fù)正常，過表達(dá)的VEGF也基本恢復(fù)正常水平，提示當(dāng)組織在一定時間內(nèi)無法得到充足的血液時，機(jī)體為了維護(hù)自身的穩(wěn)定將會生成HIF-1α因子，其不僅能夠促使基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，還能夠在一定程度上增加部分蛋白質(zhì)和酶，或提高它們的活性，如果人體處于缺氧狀態(tài)時，這種因子還能夠有效預(yù)防細(xì)胞的凋亡[19]。

本研究結(jié)果顯示，治療前研究組結(jié)腸組織及血液中VEGF RNA表達(dá)水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。經(jīng)過7～10 d積極治療，研究組患者結(jié)腸組織黏膜損傷基本恢復(fù)正常，瘢痕區(qū)域過表達(dá)的VEGF RNA也基本恢復(fù)正常水平，提示當(dāng)組織在一定時間處于缺血狀態(tài)時，機(jī)體為了維護(hù)自身的穩(wěn)定性會誘導(dǎo)VEGF表達(dá)，以使組織所遭受的損傷程度不會繼續(xù)擴(kuò)大，同時具備一定的修復(fù)作用[20-21]，經(jīng)過一段時間后，組織將會恢復(fù)到正常狀態(tài)，由缺血誘導(dǎo)出現(xiàn)的相關(guān)因子也會逐漸降低，直至恢復(fù)到正常水平。因此，缺血性結(jié)腸炎內(nèi)部存在一定的缺血性危害。

同時，觀察研究結(jié)果顯示，缺血性結(jié)腸炎血液中也可檢測到過表達(dá)的VEGF因子，并且與結(jié)腸組織中VEGF表達(dá)情況呈明顯正相關(guān)，提示外周血中VEGF表達(dá)水平可在一定程度上反映出腸道的缺血性危象，為該疾病的早期診斷提供了參考。

綜上所述，VEGF的血管生成在缺血性結(jié)腸炎中具有關(guān)鍵作用。當(dāng)組織處于缺血狀態(tài)時，血管生成因子VEGF的表達(dá)水平將會上升，此時旁分泌因子將會得到一定的信號，并和特定的受體進(jìn)行反應(yīng)，促使相應(yīng)的內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行增殖。上述結(jié)果為缺血性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制提供了相應(yīng)的分子證據(jù)，提示缺血性因子會在缺血性結(jié)腸炎自身的病理學(xué)過程中具有相對關(guān)鍵的作用。本研究證實了VEGF能夠在缺血性結(jié)腸炎對應(yīng)的病變位置發(fā)生過表達(dá)，在臨床工作中，為評估結(jié)腸組織的缺血情況或展開進(jìn)一步的修復(fù)，可以通過對上述因素的表達(dá)水平進(jìn)行評價，進(jìn)而做出更為準(zhǔn)確的判斷。同時，利用血液中VEGF的檢測，有助于高齡或有禁忌證等不能實施結(jié)腸鏡檢查的患者的臨床診斷，減少誤診概率，對缺血性結(jié)腸炎的臨床診斷、病情評估及指導(dǎo)治療等方面均具有重要的價值。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 張瑩，任華，李長鋒，等.106例缺血性結(jié)腸炎患者內(nèi)鏡診斷及臨床的回顧性分析[J].中國實驗診斷學(xué)，2018（7）：155-156.

[2] 廖亮.缺血性結(jié)腸炎發(fā)病特點的臨床分析[D].北京：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院，2015.

[3] 張惠娟，宋巧炎，石夢林，等.34例缺血性結(jié)腸炎臨床分析及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J].胃腸病學(xué)及肝病學(xué)雜志，2018，27（12）：1419-1422.

[4] 阮水良，顧小江，官俏兵.缺血性結(jié)腸炎流行病學(xué)及臨床特征國內(nèi)文獻(xiàn)分析[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2017（9）：22-26.

[5] 林錦源，楊建偉，高煒，等.不同原發(fā)部位結(jié)腸癌根治術(shù)后輔助化療的預(yù)后及安全性比較[J].實用腫瘤雜志，2019（6）：34-38.

[6] Brandt LJ，F(xiàn)euerstadt P，Longstreth GF，et al.ACG clinical guideline： epidemiology，risk factors，patterns of presentation，diagnosis， and management of colon ischemia（CI）[J].Am J Gastroenterol，2015，110（1）：18-44.

[7] 缺血性結(jié)腸炎診治中國專家建議（2011）協(xié)作組，中華醫(yī)學(xué)會老年醫(yī)學(xué)分會，《中華老年醫(yī)學(xué)雜志》編輯委員會.老年人缺血性結(jié)腸炎診治中國專家建議（2011）[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2011（30）：1-6.

[8] 賈璐璐.62例缺血性結(jié)腸炎的臨床特點及危險因素分析[D].鄭州：鄭州大學(xué)，2019.

[9] 劉艷.DMOG穩(wěn)定缺血/再灌注心肌組織HIF-1α表達(dá)的時間規(guī)律及對線粒體功能的影響[D].太原：山西醫(yī)科大學(xué)，2016.

[10] 湯盈，侯天德，李愛紅.缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）對促紅細(xì)胞生成素（EPO）等靶基因表達(dá)的影響[J].四川體育科學(xué)，2018（3）：26-29.

[11] 張立朋.HIF-1α促成骨細(xì)胞IL-6，IL-8表達(dá)分子機(jī)制的研究[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2016.

[12] 解友邦，李建平，沈括，等.低氧和缺氧誘導(dǎo)因子-1α對人白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞血管相關(guān)生成因子的影響[J].重慶醫(yī)學(xué)，2019，48（3）：364-369.

[13] 張自妍，馬建霞，童依麗，等.中青年和老年缺血性結(jié)腸炎的臨床特點比較[J].中華老年多器官疾病雜志，2018， 17（2）：116-119.

[14] Vizuete J，Alvarez J，Randall C.Changing trends in lower gastrointestinal hemorrhage：A rise in frequency of ischemic colitis[J].Open Journal of Gastroenterology，2014， 4（5）：102-105.

[15] Doulberis M，Panagopoulos P，Scherz S，et al.Update on ischemic colitis：From etiopathology to treatment including patients of intensive care unit[J].Scand J Gastroenterol，2016，51（8）：893-902.

[16] 李克難.Ataptaquin對新生小鼠缺氧缺血性腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D].鄭州：鄭州大學(xué)，2019.

[17] Yngvadottir Y，Karlsdottir BR，Hreinsson JP，et al.The incidence and outcome of ischemic colitis in a population-based setting[J].Scand J Gastroenterol，2017，52（6）：704-710.

[18] Yamanouchi S，Ogawa S，Kusunoki R，et al.Seasonal variation in occurrence of ischemic colitis：A retrospective study[J].The Journal of International Medical Research，2017， 45（1）：340-351.

[19] 袁鳳儀，吳本儼.266例老年缺血性結(jié)腸炎臨床特點分析[J].中華保健醫(yī)學(xué)雜志，2016，18（2）：117-119.

[20] Pastor-Juan M，Ripolles T，Marti-Bonmati L，et al.Predictors of severity in ischemic colitis：Usefulness of early ultrasonography[J].Eur J Radiol，2017，96（11）：21-26.

[21] 焦婕英，王春瑩，李偉之，等.缺血性結(jié)腸炎患者及正常人缺血相關(guān)細(xì)胞因子的PCR及免疫組化比較[J].現(xiàn)代消化及介入診療，2020（8）：56-60.

（收稿日期：2020-08-23）