血清miR-181b在兒童阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征中的作用及意義

宣妙燕 郁峰 黃秋玲 蔡堯梁

[摘要] 目的 探討血清miR-181b在兒童阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（OSAHS）中的作用及意義。 方法 選取2018年1—12月湖州市中心醫(yī)院收治的OSAHS患兒60例，經(jīng)多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)儀監(jiān)測(cè)，按照病情分為輕度OSAHS組與中重度OSAHS組，每組各30例。選取同一時(shí)期來(lái)湖州市中心醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的無(wú)OSAHS癥狀患兒30例為對(duì)照組。對(duì)受試者進(jìn)行Achenbach兒童行為量表（CBCL）檢測(cè)、韋氏兒童智力量表（WWISC）檢測(cè)，以及血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、S100β、miR-181b水平檢測(cè)。 結(jié)果 輕度、中重度OSAHS組CBCL評(píng)分，NSE、S100β、miR-181b水平顯著高于對(duì)照組;中重度OSAHS組CBCL評(píng)分、NSE、S100β、miR-181b水平顯著高于輕度OSAHS組，WISC顯著低于輕度OSAHS組（P<0.05）。OSAHS患者血清miR-181b水平與NSE、S100β水平、CBCL評(píng)分均呈顯著正相關(guān)（P<0.05），與WISC呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。 結(jié)論 通過(guò)對(duì)血清中的miR-181b水平進(jìn)行檢測(cè)，能夠?qū)SAHS患兒認(rèn)知行為障礙的程度、腦損傷的程度進(jìn)行早期的篩查，提高診斷水平。

[關(guān)鍵詞] 阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征;認(rèn)知行為障礙;腦損傷;miR-181b

[中圖分類號(hào)] R563.9? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2021）09-0005-05

The role and significance of serum miR-181b in children with obstructive sleep apnea- hypopnea syndrome

XUAN Miaoyan? ?YU Feng? ?HUANG Qiuling? ?CAI Yaoliang

Department of Pediatrics， Huzhou Central Hospital in Zhejiang Province， Affiliated Hospital of Huzhou University， Huzhou? ?313000， China

[Abstract] Objective To explore the role and significance of serum miR-181b in children with obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome（OSAHS）. Methods Sixty children with OSAHS admitted to Huzhou Central Hospital from January to December 2018 were selected as the subjects. They were monitored by polysomnography and divided into mild OSAHS group and moderate-severe OSAHS group according to their condition， with 30 cases in each group. Thirty children with no OSAHS symptoms who came to Huzhou Central Hospital for physical examination during the same period were selected as the control group. All subjects were tested with achenbach child behavior checklist（CBCL）， wechsler intelligence scale for children （WISC）， serum neuron-specific enolase（NSE）， S100β， and miR-181b level. Results The CBCL scores， NSE， S100β， and miR-181b levels of the mild and moderate-severe OSAHS groups were significantly higher than those of the control group. The CBCL scores， NSE， S100β， and miR-181b levels of the moderate-to-severe OSAHS group were significantly higher than those of the mild OSAHS group. WISC of the moderate-to-severe OSAHS group was significantly lower than that of the mild OSAHS group（P<0.05）. Serum miR-181b levels in OSAHS patients were significantly positively correlated with NSE， S100β levels， and CBCL scores（P<0.05）， and significantly negatively correlated with WISC（P<0.05）. Conclusion By detecting the level of miR-181b in the serum， early screening of the degree of cognitive behavioral impairment and the degree of brain damage in children with OSAHS can be carried out to improve the level of diagnosis.

[Key words] Obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome; Cognitive behavior disorder; Brain injury; miR-181b

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（Obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome，OSAHS）是由于各種原因?qū)е碌纳虾粑啦糠只蛉孔枞?，從而擾亂睡眠過(guò)程中正常通氣過(guò)程和睡眠結(jié)構(gòu)的疾病[1]。OSAHS的發(fā)生不僅影響睡眠質(zhì)量，還與高血壓、心血管疾病等疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，影響患者的健康與生活質(zhì)量，據(jù)統(tǒng)計(jì)，OSAHS在兒童中的患病率達(dá)1.2%～5.7%[2]。兒童的身體結(jié)構(gòu)與機(jī)能與成人存在較大差異，OSAHS可影響患兒身體及智力發(fā)育[3]。目前，對(duì)OSAHS患兒進(jìn)行早期篩查，并制定個(gè)體化的治療和管理方案已成為該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。近年來(lái)相關(guān)血清生物標(biāo)志物的表達(dá)與OSAHS關(guān)系成為研究熱點(diǎn)。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）表達(dá)異常參與多種腦疾病的發(fā)病過(guò)程[4]，本研究分析血清miR-181b與OSAHS兒童腦損傷、認(rèn)知行為障礙的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年1—12月所有因打鼾、張口呼吸和呼吸困難等來(lái)本院兒科及耳鼻喉科門診就診的OSAHS患兒60例為研究對(duì)象。OSAHS診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉科分會(huì)2007年發(fā)表的兒童OSAHS診療指南草案中OSAHS的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。

經(jīng)多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)儀監(jiān)測(cè)，根據(jù)呼吸暫停低通氣指數(shù)（Apnea hypopnea index，AHI）和最低血氧飽和度將60例患兒按照病情分為輕度OSAHS組與中重度OSAHS組，每組各30例。輕度OSAHS組，男16例，女14例;年齡5～12歲，平均（7.25±2.13）歲。中重度OSAHS組男17例，女13例;年齡5～12歲，平均（7.75±2.29）歲。選取同一時(shí)期來(lái)本院進(jìn)行健康體檢的無(wú)OSAHS癥狀患兒30例為對(duì)照組，男15例，女15例;年齡5～12歲，平均（7.15±2.04）歲。三組性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①因打鼾、張口呼吸、呼吸困難等來(lái)本院科就診的睡眠呼吸障礙（Sleep-disordered breathing，SDB）患兒;②完成整夜睡眠監(jiān)測(cè);③符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒童OSAHS診療指南草案診斷標(biāo)準(zhǔn);④經(jīng)患兒及家長(zhǎng)知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有神經(jīng)系統(tǒng)疾病或心理疾病;②患有影響生理及智力發(fā)育的疾病;③不能配合調(diào)查。

對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：①被家人證實(shí)無(wú)鼾聲，發(fā)育正常;②無(wú)慢性呼吸道疾病如支氣管哮喘，無(wú)上氣道腫物或壓迫氣道的疾病，鼻腔通暢;③無(wú)影響呼吸中樞的疾病，如腦干腫瘤或梗死等;④無(wú)顱內(nèi)病變或任何解剖畸形;⑤經(jīng)患兒和家長(zhǎng)知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神、神經(jīng)、代謝性腦病疾患患兒;②顱面部畸形;③中樞性呼吸暫停低通氣綜合征。

1.3 方法

1.3.1 兒童行為測(cè)試? 采用Achenbach兒童行為量表（Child behavior checklist，CBCL）對(duì)受試者進(jìn)行社會(huì)能力及行為問(wèn)題測(cè)試。該量表能夠評(píng)價(jià)兒童的行為及情緒問(wèn)題，對(duì)活動(dòng)能力、社交能力、學(xué)習(xí)能力等進(jìn)行綜合評(píng)估。評(píng)分越高表明各項(xiàng)目的行為特征越明顯。

1.3.2 兒童智力測(cè)試? 采用韋氏兒童智力量表（Wechsler intelligence scale for children，WISC）進(jìn)行受試者的兒童智力水平測(cè)試，根據(jù)各項(xiàng)測(cè)試指標(biāo)核算言語(yǔ)智商、操作智商、總智商得分。得分越高表明受試者的智力水平越高。

1.3.3 血清NSE、S100β、miR-181b水平檢測(cè)? 清晨空腹采集靜脈血，采用酶鏈免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清中神經(jīng)元特異性烯醇化酶（Neuron-specific enolase，NSE）、S100β蛋白水平。采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)血清中miR-181b水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，正態(tài)計(jì)量資料用（x±s）表示，兩樣本比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本比較采用單因素方差分析;兩兩比較采用LSD法。兩變量相關(guān)分析采用Pearson直線相關(guān)分析法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組CBCL量表測(cè)試結(jié)果比較

單因素方差分析結(jié)果顯示，對(duì)照組、輕度OSAHS組、中重度OSAHS組間的CBCL量表總分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。輕度OSAHS組、中重度OSAHS組的CBCL量表總分均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）;中重度OSAHS組CBCL量表總分顯著高于輕度OSAHS組（P<0.05）。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組、輕度OSAHS組、中重度OSAHS組間的分裂樣、抑郁、交往不良、社交退縮、多動(dòng)、攻擊性、違紀(jì)評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。輕度、中重度OSAHS組的分裂樣、抑郁、交往不良、社交退縮、多動(dòng)、攻擊性、違紀(jì)評(píng)分顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。中重度OSAHS組的分裂樣、抑郁、交往不良、社交退縮、多動(dòng)、攻擊性、違紀(jì)評(píng)分顯著高于輕度OSAHS組（P<0.05）。

2.2 三組WISC測(cè)試結(jié)果比較

單因素方差分析結(jié)果顯示，對(duì)照組、輕度OSAHS組、中重度OSAHS組間的言語(yǔ)智商、操作智商、總智商評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。中重度OSAHS組的言語(yǔ)智商、操作智商、總智商評(píng)分均顯著低于對(duì)照組、輕度OSAHS組（P<0.05）。

2.3 三組血清NSE、S100β、miR-181b水平比較

單因素方差分析結(jié)果顯示，對(duì)照組、輕度OSAHS組、中重度OSAHS組間的血清NSE、S100β、miR-181b水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。輕度OSAHS組、中重度OSAHS組的血清NSE、S100β、miR-181b水平均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。中重度OSAHS組的血清NSE、S100β、miR-181b水平顯著高于輕度OSAHS組（P<0.05）。

2.4 OSAHS患者血清miR-181b水平與NSE、S100β水平相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，OSAHS患者血清miR-181b水平與NSE、S100β水平均呈顯著正相關(guān)（P<0.05）。

2.5 OSAHS患者血清miR-181b水平與CBCL、WISC測(cè)試結(jié)果相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，OSAHS患者血清miR-181b水平與CBCL評(píng)分呈顯著正相關(guān)（P<0.05），與WISC呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。

3 討論

由于兒童的身體結(jié)構(gòu)與成人存在較大差異，因此在生長(zhǎng)發(fā)育階段，OSAHS對(duì)機(jī)體的影響是多方面的，不僅身體發(fā)育將受到明顯的影響，智力、行為也將受到不同程度的影響。研究發(fā)現(xiàn)，20%左右的OSAHS兒童存在學(xué)習(xí)能力受限的情況，部分兒童還伴有注意力下降、攻擊等方面的問(wèn)題[6]。但關(guān)于OSAHS對(duì)兒童行為及心理影響的確切機(jī)制尚無(wú)定論。行為是反映人對(duì)外部環(huán)境適應(yīng)能力的重要指標(biāo)，OSAHS患兒在行為上可表現(xiàn)為多動(dòng)、攻擊性、注意力不集中等[7]。有研究發(fā)現(xiàn)，OSAHS導(dǎo)致的睡眠過(guò)程中間斷性缺氧，可影響人的情緒波動(dòng)，甚至導(dǎo)致暴力傾向的發(fā)生[8]。劉雅璇[9]在研究中分析存在睡眠頻繁中斷癥狀兒童的注意力情況及多動(dòng)情況，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，存在此類癥狀的兒童在日常的學(xué)習(xí)生活中，注意力不集中及多動(dòng)的現(xiàn)象明顯高于其他兒童。本研究結(jié)果也顯示，在CBCL量表的各個(gè)評(píng)價(jià)項(xiàng)目中，OSAHS患兒與正常對(duì)照組兒童之間的CBCL量表總分存在顯著差異。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，OSAHS組兒童主要在活動(dòng)能力、社交能力、學(xué)習(xí)能力等項(xiàng)目的評(píng)分中與正常兒童存在顯著差異，且OSAHS病情越嚴(yán)重，相應(yīng)的指標(biāo)評(píng)分越高，提示OSAHS對(duì)兒童的行為發(fā)育存在較大影響。在智力水平的評(píng)價(jià)方面，本研究結(jié)果提示，輕度OSAHS組患兒在WISC測(cè)試中的言語(yǔ)智商、操作智商、總智商評(píng)分均與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示輕度OSAHS發(fā)病對(duì)患兒的智力水平影響不大。中重度OSAHS組患兒在WISC測(cè)試中，其言語(yǔ)智商、操作智商、總智商評(píng)分均顯著低于對(duì)照組和輕度OSAHS組患兒，提示中重度OSAHS發(fā)病對(duì)于兒童的智力水平存在顯著影響。

NSE、S100β蛋白是公認(rèn)的腦損傷外周血標(biāo)志物[10]。NSE是一種特異性蛋白質(zhì)，存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中，當(dāng)腦損傷發(fā)生時(shí)，NSE可從神經(jīng)元、神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中溢出，釋放進(jìn)入外周血液和腦脊液中[11]。S100β蛋白為存在于神經(jīng)組織中的一種鈣結(jié)合蛋白，當(dāng)腦損傷發(fā)生時(shí)，血中S100β蛋白水平顯著升高[12]。研究發(fā)現(xiàn)[13]，OSAHS患者存在記憶力下降以及血中NSE、S100β蛋白水平升高的現(xiàn)象，這可能與夜間低氧血癥的發(fā)生有關(guān)，而NSE、S100β蛋白水平升高可能是導(dǎo)致腦損害和記憶力下降的主要機(jī)制之一。本研究結(jié)果也顯示，OSAHS患兒的血清NSE、S100β蛋白水平均顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明OSAHS患兒可能存在一定程度的腦損害情況。進(jìn)一步比較顯示，中重度OSAHS組的血清NSE、S100β水平顯著高于輕度OSAHS組，說(shuō)明OSAHS病情越嚴(yán)重，腦損傷的程度越重。

目前，對(duì)OSAHS病理機(jī)制的研究結(jié)果表明，其發(fā)病過(guò)程是一種慢性炎癥過(guò)程，經(jīng)證實(shí)多種miRNA在炎癥反應(yīng)的過(guò)程中發(fā)揮重要作用[14-16]。miRNA是一類由20～24個(gè)核苷酸組成的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA，在大腦發(fā)育、神經(jīng)元分化等過(guò)程中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用。miRNA的異常表達(dá)與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，在缺血缺氧性腦損傷的發(fā)生機(jī)制中，也存在特定的miRNA表達(dá)異常的現(xiàn)象，這使miRNA作為標(biāo)記物評(píng)估OSAHS的腦損傷程度成為可能[17]。經(jīng)證實(shí)，miR-181b的過(guò)表達(dá)能夠?qū)ρ鼙趽p傷的信號(hào)通路發(fā)揮明顯的調(diào)節(jié)作用，從而降低炎癥反應(yīng)發(fā)生的程度[18-20]。本研究中，OSAHS的病情越重，血清中miR-181b水平越高，分析可能是由于miR-181b與OSAHS的炎癥反應(yīng)調(diào)控機(jī)制密切相關(guān)。相關(guān)性分析結(jié)果也顯示，OSAHS患者血清miR-181b水平與NSE、S100β水平均呈顯著正相關(guān)（P<0.05），與CBCL評(píng)分呈顯著正相關(guān)（P<0.05），與WISC呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。說(shuō)明通過(guò)對(duì)血清中的miR-181b水平進(jìn)行檢測(cè)，能夠?qū)SAHS患兒認(rèn)知行為障礙的程度、腦損傷的程度進(jìn)行早期的篩查，提高診斷水平。

在未來(lái)的研究中，將進(jìn)一步收集兒童OSAHS病例資料，對(duì)患兒進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，定期監(jiān)測(cè)認(rèn)知行為改變，適時(shí)進(jìn)行腦損傷標(biāo)志物相關(guān)檢測(cè)，以期發(fā)現(xiàn)更多助于OSAHS患兒腦損傷改變的篩查指標(biāo)。

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（收稿日期：2020-08-15）