頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定鹽酸右美托咪定中殘留溶劑含量*

楊園，谷亦平

(1.武漢藥品醫(yī)療器械檢驗所，武漢 430073；2.桂林醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，桂林 541199)

鹽酸右美托咪定(dexmedetomidine hydrochloride)化學(xué)名稱為(+)-4-(S)-[1-(2，3-二甲基苯基)乙基]-1H-咪唑鹽酸鹽，是Orion pharma/Abott公司研發(fā)的鎮(zhèn)靜催眠藥，2000年首次在美國上市。鹽酸右美托咪定是一種新型高選擇性α2-腎上腺素受體激動劑，半衰期短，主要作用于腦內(nèi)負(fù)責(zé)覺醒與睡眠且α2-腎上腺素受體最密集的區(qū)域藍(lán)斑核，產(chǎn)生鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗焦慮作用，降低交感神經(jīng)活性，降低機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)程度，并對呼吸功能影響甚微，故其較傳統(tǒng)鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛藥在臨床麻醉及重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)應(yīng)用中具有明顯優(yōu)勢[1-3]。不同的鹽酸右美托咪定合成工藝，會引入不同的有機(jī)溶劑，分別有甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)及甲苯。殘留溶劑又稱有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)，可能對人體的健康造成一定危害。根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015年版[4]關(guān)于殘留溶劑的相關(guān)規(guī)定，應(yīng)對鹽酸右美托咪定生產(chǎn)或純化中使用的溶劑進(jìn)行檢測。關(guān)于鹽酸右美托咪定中殘留溶劑的檢測已有文獻(xiàn)報道[5]，但同時測定鹽酸右美托咪定中多種有機(jī)溶劑殘留量的文獻(xiàn)筆者尚未見報道。筆者在本實驗建立毛細(xì)管氣相色譜法配以頂空進(jìn)樣，對鹽酸右美托咪定原料藥中11種有機(jī)溶劑殘留量分析進(jìn)行系統(tǒng)性研究與確認(rèn)，以期為鹽酸右美托咪定的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 7890B 氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器(氫火焰離子化檢測器)，Agilent G1888 頂空進(jìn)樣器，DB-624毛細(xì)管色譜柱(美國Agilent公司)；XS105電子天平(梅特勒-托利多公司，感量：0.01 mg)；CLXXXUVM2純水機(jī)(ELGA公司)。

1.2試藥 乙醚、異丙醇、二氯甲烷、1，4-二氧六環(huán)(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號分別為80059618，80109218，80047318，10008918)；甲醇、乙醇、甲苯、丙酮、N，N-二甲基甲酰胺、環(huán)己烷(色譜純，德國FISHER公司，批號分別為174486，1714869，134611，165605，1673620，106977)；四氫呋喃(色譜純，上海星可生化有限公司，批號：41161101)；乙酸乙酯(色譜純，美國TEDIA公司，批號：13040152)。鹽酸右美托咪定(廠家提供，批號：6601604012，6601604022，6601605012)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱為DB-624(30 m×0.32 mm，1.80 μm)毛細(xì)管柱；柱溫采取程序升溫，初始溫度35 ℃維持10 min，以0.5 ℃ ·min-1升溫至40 ℃，維持5 min，再以20 ℃ ·min-1升溫至65 ℃，維持1 min，再以60 ℃ ·min-1升溫至220 ℃，維持5 min；檢測器為 FID，檢測器溫度250 ℃；進(jìn)樣口溫度 200 ℃ ；載氣為高純氮?dú)?，分流進(jìn)樣，分流比10：1，流速2 mL·min-1；氫氣流速30 mL·min-1；空氣流速300 mL·min-1；頂空進(jìn)樣，平衡溫度85 ℃，平衡時間30 min，進(jìn)樣體積：1 mL。

2.2溶液的配制

2.2.1空白溶液 精密量取N，N-二甲基甲酰胺5 mL，置50 mL量瓶，加水稀釋至刻度，即得。

2.2.2對照品儲備溶液 分別取甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)、甲苯適量，精密稱定，用N，N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀釋成30 000，50 000，50 000，50 000，50 000，6 000，50 000，7 200，38 800，3 800，8 900 μg·mL-1，搖勻，作為各對照品儲備溶液。

2.2.3混合對照品儲備溶液和混合對照品溶液 精密量取各對照品儲備溶液1.00 mL，置50 mL 量瓶，純化水稀釋至刻度，搖勻，即為混合對照品儲備溶液。精密量取混合對照品儲備溶液5 mL，置10 mL 量瓶，用純化水稀釋至刻度，搖勻，即為混合對照品溶液。

2.2.4供試品溶液 精密稱取供試品1.0 g，置10 mL 量瓶，純化水溶解稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3方法學(xué)驗證

2.3.1系統(tǒng)適用性實驗 按“2.2”項方法制備混合對照品溶液、供試品溶液和空白溶液，按“2.1”項色譜條件分別進(jìn)樣分析，色譜圖見圖1。色譜圖中各被測物色譜峰相互間分離度均符合要求。

2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與線性范圍考察 精密量取“2.2.3”項混合對照品儲備溶液10.0，5.0，2.5，1.0，0.5 mL，分別置10 mL量瓶，用純化水稀釋至刻度，精密量取1.00 mL，置 10 mL頂空瓶，加蓋密封，即得標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。按“2.1”項色譜條件測定，以標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液濃度為橫坐標(biāo)，被測物峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程見表1。結(jié)果表明，甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯在一定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)Tab.1 Linear regression equation and correlation coefficient

2.3.3精密度實驗 按“2.2”項方法配制混合對照品溶液，共6份，按“2.1”項色譜條件測定，計算得甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯峰面積RSD分別為2.4%，1.2%，2.8%，2.2%，2.6%，2.9%，2.8%，2.9%，2.6%，2.7%，2.8%，表明所建立的色譜系統(tǒng)方法重復(fù)性良好。

1.甲醇；2.乙醇；3.乙醚；4.丙酮；5.異丙醇；6.二氯甲烷；7.乙酸乙酯；8.四氫呋喃；9.環(huán)己烷；10.二氧六環(huán)；11.甲苯。圖1 對照品溶液(A)、空白溶劑(B)與樣品溶液(C)氣相色譜圖1.methanol；2.ethanol；3.diethyl ether；4.acetone；5.isopropyl alcohol；6.dichloromethane；7.acetidin；8.tetrahydrofuran；9.cyclohexane；10.dioxane；11.toluene.Fig.1 Gas chromatograms of reference solution(A)，blank solvent(B) and sample solution (C)

2.3.4加樣回收率實驗 取鹽酸右美托咪定 (批號：6601604012) 約1.0 g，共2份，精密稱定。按“2.2”項方法配制供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進(jìn)行分析，外標(biāo)法以峰面積計算供試品中各溶劑的本底殘留量。取同批次鹽酸右美托咪定1.0 g，共9份，精密稱定，置10 mL量瓶，其中3份精密加入“2.2.3”項混合對照品儲備溶液2.50 mL，3份精密加入混合對照品儲備溶液5.00 mL，另3份精密加入混合對照品儲備溶液7.50 mL，用純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得相當(dāng)于各殘留溶劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為50%，100%，150%水平的供試品溶液。按“2.1”項色譜條件進(jìn)行分析，外標(biāo)法以峰面積計算9份加樣鹽酸右美托咪定樣品中各溶劑的總殘留量，扣除供試品中各溶劑的本底殘留量，根據(jù)加入量計算回收率，結(jié)果見表2。結(jié)果符合殘留溶劑測定準(zhǔn)確度的要求。

表2 鹽酸右美托咪定殘留溶劑回收率實驗結(jié)果Tab.2 Results of recovery test of residue organic solvents in dexmedetomidine hydrochloride %

2.3.5檢測限和定量限考察 取混合對照品溶液，逐級稀釋，分別進(jìn)樣，以信噪比約為3計算檢測限，以信噪比約為10計算定量限。結(jié)果甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯的檢測限分別為 0.34，0.31，0.027，0.12，0.23，0.13，0.14，0.15，0.20，2.4，0.081 μg·mL-1，相當(dāng)于樣品的檢測限分別為3.4×10-7，3.1×10-7，0.27×10-7，1.2×10-7，2.3×10-7，1.3×10-7，1.4×10-7，1.5×10-7，2.0×10-7，24×10-7，0.81×10-7g·g-1；甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯的定量限分別為1.13，1.05，0.09，0.39，0.78，0.43，0.46，0.48，0.68，8.00，0.27 μg·mL-1，相當(dāng)于樣品定量限分別為11×10-7，10×10-7，0.9×10-7，3.9×10-7，7.8×10-7，4.3×10-7，4.6×10-7，4.8×10-7，6.8×10-7，8×10-6，2.7×10-7g·g-1。

2.3.6穩(wěn)定性考察 按“2.2”項方法配制混合對照品溶液6份，分別于0，2，4，6，8，10 h 取上述6份溶液，按“2.1”項色譜條件測定，記錄色譜峰面積。結(jié)果甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯RSD分別為2.2%，1.5%，3.4%，2.5%，2.1%，3.1%，2.5%，2.7%，3.5%，2.6%，2.2%。結(jié)果表明，甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、二氧六環(huán)和甲苯在該方法下10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4樣品測定 分別精密稱取3批樣品各1.0 g，按“2.2.4”項方法制備，按“2.1”項色譜條件檢測，結(jié)果見表3。3批鹽酸右美托咪定中有機(jī)溶劑殘留量均符合《中華人民共和國藥典》2015年版規(guī)定的限度。

表3 樣品檢測結(jié)果Tab.3 Test results of samples %，n=2

3 討論

3.1進(jìn)樣方式選擇 使用氣相色譜法測定樣品中有機(jī)溶劑殘留量有直接進(jìn)樣法和頂空進(jìn)樣法[6-8]。通常情況下，低沸點(diǎn)溶劑建議采用頂空進(jìn)樣法，高沸點(diǎn)溶劑可以采用溶液直接進(jìn)樣法；但考慮到有機(jī)溶劑殘留量檢查時通常要同時檢測多種溶劑，為操作的可行性和簡便性，建議盡量采用同樣的檢測條件控制盡量多種類的殘留溶劑。故筆者在本實驗中選擇頂空進(jìn)樣法測定鹽酸右美托咪定中11種有機(jī)溶劑殘留量。

3.2溶劑選擇 鹽酸右美托咪定是咪唑鹽酸鹽，極易溶于水，并且在選定的色譜條件下，各溶劑殘留均能達(dá)到良好的分離且不干擾樣品的測定，故選用純化水為溶劑。

3.3色譜柱選擇 鹽酸右美托咪定中需檢查有機(jī)溶劑種類較多，參考常見的有機(jī)溶劑檢查[9-12]，結(jié)合本品中需檢測的11種有機(jī)溶劑，選擇最常用中等極性毛細(xì)管柱DB-624作為分析的色譜柱。

3.4頂空條件的選擇 在頂空氣相分析中，各組分的相平衡會受到溫度的影響。在平衡時間設(shè)定為30 min條件下，測定11種有機(jī)溶劑在頂空平衡溫度為80，85和90 ℃時響應(yīng)值。結(jié)果表明，隨著平衡溫度增加，各有機(jī)溶劑組分響應(yīng)也逐漸增加，考慮到組分熱穩(wěn)定性等因素最終選擇85 ℃為頂空平衡溫度。另設(shè)定平衡溫度為85 ℃，測定有機(jī)溶劑在平衡時間為20，30，40 和50 min 時響應(yīng)值。結(jié)果表明，各被測組分在30 min 后，響應(yīng)值趨于穩(wěn)定，故選擇30 min為頂空平衡時間。

筆者在本實驗所建立的殘留溶劑檢測方法簡便、準(zhǔn)確，能夠滿足實際樣品檢測的需要，可以為鹽酸右美托咪定殘留溶劑的藥典標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)，并為鹽酸右美托咪定產(chǎn)品殘留溶劑檢測項目提供技術(shù)參考。