高效液相色譜法測(cè)定通降顆粒中虎杖苷含量

段昌令 ，王鳳云 ，鄭 蕊 ，唐旭東

（1．上海中醫(yī)藥大學(xué)·上海高校中醫(yī)內(nèi)科學(xué)E－研究院，上海 201203； 2．中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院，北京 100091）

高效液相色譜法測(cè)定通降顆粒中虎杖苷含量

段昌令1，2，王鳳云2，鄭 蕊2，唐旭東2

（1．上海中醫(yī)藥大學(xué)·上海高校中醫(yī)內(nèi)科學(xué)E－研究院，上海 201203； 2．中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院，北京 100091）

目的建立測(cè)定通降顆粒中虎杖苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為COSMOSILCholester柱（250mm×4．6mm，5 m ），流動(dòng)相為乙腈－水（18 ∶82），檢測(cè)波長(zhǎng)為 306nm，流速為 1．0mL ／min。結(jié)果虎杖苷質(zhì)量濃度在 2．20～140．6 g／mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r＝0．9998），平均加樣回收率為101．16%，RSD為1．74%（n＝6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于通降顆粒中虎杖苷的含量測(cè)定。

高效液相色譜法；通降顆粒；虎杖苷；質(zhì)量控制

通降顆粒是中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院院內(nèi)制劑（批準(zhǔn)文號(hào)：京藥制字Z20100007），由蘇梗、香附、枳殼、陳皮、黃連、虎杖等藥組方，主要用于治療非糜爛性胃食道反流病、反流性食管炎[1－2]。方中主藥虎杖能利濕退黃、清熱解毒、散瘀止痛，用于治療濕熱黃疸、風(fēng)濕痹痛[3]?；⒄戎兄饕休祯?、二苯乙烯苷類成分，活性廣泛[4]。通降顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有鑒別項(xiàng)而無含量測(cè)定方法項(xiàng)，本研究中結(jié)合2015年版《中國(guó)藥典》和文獻(xiàn)[5－11]建立了虎杖苷含量測(cè)定方法。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent1200型高效液相色譜儀（包括Hpchem色譜工作站、紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司）；COSMOSILCholester柱（250mm ×4．6mm，5 μm，日本Nacalai公司）；Milli－QIntegral3型純水機(jī)（美國(guó)密理博公司）；AE240型電子分析天平（梅特勒－托利多儀器＜上海＞有限公司）；KQ－300型超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司，功率為300W，頻率為40kHz）。

1．2 試藥

通降顆粒（中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院自制，批號(hào)分別為 20131001，20160201，20170201）；虎杖苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為11575－200502）；乙腈、磷酸（美國(guó)Fisher公司)為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純；DaionHP－20型大孔吸附樹脂（日本三菱化學(xué)株式會(huì)社）。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：COSMOSILCholester柱（250mm ×4．6mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（18 ∶82）；流速：1．0mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：306nm。理論板數(shù)按虎杖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2．2 溶液制備

對(duì)照品溶液：稱取虎杖苷對(duì)照品7．03mg，精密稱定，置10mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻；精密量取虎杖苷溶液4mL，置100mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為虎杖苷對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取通降顆粒細(xì)粉約0．2g，精密稱定，置10mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理20min，放冷，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

陰性對(duì)照品溶液：取不含虎杖的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取 2．2項(xiàng)下3種溶液各10μL，注入色譜儀，按2．1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。在此色譜條件下，對(duì)照品溶液與供試品溶液色譜主成分峰的保留時(shí)間基本一致，陰性對(duì)照無干擾，詳見圖1。理論板數(shù)按虎杖苷峰計(jì)應(yīng)不低于3000。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取質(zhì)量濃度為140．6μg／mL的虎杖苷對(duì)照品溶液1m L，置5m L容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為高濃度虎杖苷對(duì)照品溶液；再依次用70%乙醇等倍稀釋制備得質(zhì)量濃度分別為70．30，35．15，17．58，8．79，4．39，2．20 μg ／m L 的虎杖苷對(duì)照品溶液，按2．1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得虎杖苷回歸方程 Y＝42．07 X－24．81，r＝0．9998（n ＝7）。結(jié)果表明，虎杖苷質(zhì)量濃度在 2．20 ～140．6μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10μL，按2．1項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果虎杖苷峰面積的 RSD為0．36%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，按2．1項(xiàng)下色譜條件，分別于 0，5，11，16，22 h 時(shí)各進(jìn)樣 10 μL，記錄峰面積。結(jié)果虎杖苷峰面積的 RSD為 1．30%（n＝5），表明供試品溶液在22 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號(hào)為20131001），共6份，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果該批通降顆粒中虎杖苷的含量為 0．157%，RSD 為 1．44%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知含量（0．157%）的同批樣品90mg共6份，分別置10m L容量瓶中，精密加入虎杖苷對(duì)照品溶液（140．6 μg／mL）各 1．0mL，依 2．2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液各6份，按2．1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 虎杖苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測(cè)定

取通降顆粒3批，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2．1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定3批樣品中虎杖苷的含量。結(jié)果批號(hào)分別為 20131001，20160201，20170201的樣品中虎杖苷含量分別為 1．57，1．30，1．55mg ／g。

3 討論

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，本研究中比較了乙腈－水、乙腈－0．1%磷酸水系統(tǒng)測(cè)定虎杖苷的差異，采用乙腈－0．1%磷酸水系統(tǒng)進(jìn)行分析時(shí)虎杖苷峰內(nèi)有干擾色譜峰，而乙腈－水系統(tǒng)能去除干擾，明顯改善虎杖苷色譜峰的分離。由于其他藥味中的化學(xué)成分干擾虎杖苷的測(cè)定，故選擇了多種型號(hào)的反相硅膠色譜柱進(jìn)行比較，最后采用COSMOSILCholester柱取得了良好的分析效果。

在樣品提取中，考察了甲醇、水、70%乙醇對(duì)通降顆粒中虎杖苷提取率的影響：70%乙醇＞甲醇＞水；又進(jìn)一步比較了70%乙醇、50%乙醇對(duì)本品中虎杖苷的提取率影響，二者無差異；由于用50%乙醇提取虎杖苷時(shí)樣品溶液難以濾過，最終確定70%乙醇為提取溶劑。由于虎杖苷穩(wěn)定性較差，應(yīng)采用避光、超聲處理20min提取虎杖苷。

方法學(xué)考察結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)便、快速，重復(fù)性好，可作為該制劑的定量檢測(cè)方法。由于通降顆粒由10味藥組方，為提高、完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控，今后還應(yīng)建立其他藥材的含量測(cè)定方法。

[1]李保雙，張麗穎，彭珍婷，等．通降顆粒干預(yù)非糜爛性反流病肝胃不和證療效觀察[J]．中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33（7）：915－919．

[2]唐旭東，吳紅梅，王志斌，等．通降顆粒對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性反流性食管炎的療效評(píng)價(jià)研究[J]．中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，26（9）：818－821．

[3]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：194－195．

[4]賈玉梅，王君明，崔 瑛．基于二苯乙烯類為主要活性成分的虎杖藥理作用研究進(jìn)展[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（9）：263－269．

[5]馬 ，王起文，徐國(guó)華，等．HPLC法同時(shí)測(cè)定降脂顆粒中5種成分[J]．中成藥，2017，39（3）：532－535．

[6]劉 源，王愛明，陳曉風(fēng)．高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定降脂顆粒中虎杖苷、二苯乙烯苷、橙皮苷含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2016，25（13）：74－76．

[7]趙 萍，王 森，歐水平，等．HPLC法同時(shí)測(cè)定虎杖膏中4種成分的含量[J]．中國(guó)藥房，2017，28（3）：405－407．

[8]姜 暉，李開智，王紹志，等．高效液相色譜法測(cè)定養(yǎng)陰降糖片 4 種成分的含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2017，26（7）：32－36．

[9]羅宏麗，肖順林，陳 昆．高效液相色譜法測(cè)定抑毒調(diào)肝合劑中虎杖苷含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2016，25（20）：45－47．

[10]趙 穎，周芙瓊，朱維娜，等．活血散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．中國(guó)藥房，2016，27（15）：2114－2117．

[11]崔 璐，包永睿，孟憲生，等．活血散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2016，22（5）：89－95．

Content Determination of Polydatin in Tongjiang G ranules by HPLC

Duan Changling1，2， Wang Fengyun2， Zheng Rui2， Tang Xudong2
(1．E－Institute of Chinese Traditional Internal Medicine，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai，China 201203； 2．Xiyuan Hospital of China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing， China 100091）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of polydatin in Tongjiang Granules．Methods The Cosmosil Cholester column （250 mm ×4．6 mm，5 μm） was adopted，the mobile phase was acetonitrile－water （18 ∶82），the detection wavelength was 306 nm，and the flow rate was 1．0 mL／min．Results The polydatin showed good linearity in the range of 2．20－140．6g／mL （r＝0．999 8），the average recovery of polydatin was 101．16% and the RSD was 1．74% （n ＝6）．Conclusion The method is simple，accurate and reproducible，which can be used for the content determination of polydatin in Tongjiang Granules．

HPLC；Tongjiang Granules；polydatin；quality control

R284．1

A

1006－4931(2017)24－0023－03

10．3969 ／j．issn．1006－4931．2017．24．007

北京市科委“十病十藥”項(xiàng)目[Z141100002214012]。

段昌令（1975－），男，博士研究生，副研究員，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)及分析，（電子信箱）changlingd2010＠163．com。

唐旭東（1963－），男，博士研究生，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院首席研究員，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)消化內(nèi)科學(xué)，（電子信箱）txdly＠ 126．com。

2017－07－10)