QuEChERS/HPLC-MS法測定食品中的生物堿

邢海燕

(池州市食品藥品檢驗中心，安徽 池州 247000)

罌粟堿在臨床上主要用于緩解伴有動脈痙攣的大腦及外周血管疾病，可治療腦血栓、肺栓塞、肢端動脈痙攣及動脈栓塞性疼痛等疾病。那可丁和蒂巴因都能從罌粟屬植物鴉片中提取得到。那可丁為支氣管解痙性鎮(zhèn)咳藥，其作用與罌粟堿相似；蒂巴因的藥理作用與嗎啡相反，它的痙攣毒性超過麻醉作用?？纱蚴且环N鴉片類藥物，可用于鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜，長期應用亦可產(chǎn)生耐受性、成癮性。嗎啡為阿片受體激動劑，是臨床解除劇烈疼痛的主要藥物，其最大缺點是易成癮，這使得長期吸食者無論從身體上還是心理上都會對嗎啡產(chǎn)生嚴重的依賴性，導致嚴重的毒物癖，從而對自身和社會均造成極大的危害。這五種生物堿都屬于精神藥物?！吨腥A人民共和國食品安全法》明確規(guī)定：“不得在食品生產(chǎn)中使用食品添加劑以外的化學物質(zhì)和其他可能危害人體健康的物質(zhì)?！笔称分薪固砑永浰趬A、那可丁、蒂巴因、可待因、嗎啡，但是依然有不法商家為了利潤鋌而走險，在火鍋底料、鹵味、麻辣燙等食品中非法添加這類物質(zhì)，對消費者的身體健康造成極大危害。

目前，人們越來越重視食品安全問題，針對罌粟堿、那可丁、蒂巴因、可待因、嗎啡等生物堿的檢測建立了比色法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法、液質(zhì)串聯(lián)法等方法。其中，液相-質(zhì)譜串聯(lián)法具有分離能力強、分析范圍廣、定性分析結果可靠、檢測限低等優(yōu)勢。由于食品樣品基質(zhì)復雜，本研究選擇火鍋底料和半固體調(diào)味料這兩種具有代表性且成分復雜的基質(zhì)驗證和優(yōu)化檢驗方法。

1 材料

1.1 主要儀器

1290II/6470A三重四極桿液相-色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，HC-3018高速離心機，KQ5200DE超聲波清洗器，JA3103N分析天平(精確到0.001 g)，粉碎機，XW-80A微型渦旋混合器。

1.2 主要試劑

甲醇、乙腈、甲酸、甲酸銨，均為色譜純；鹽酸、無水醋酸鈉、無水硫酸鎂，均為分析純；水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水。

1.3 儀器條件

1.3.1 液相條件

色譜柱：BEH HILIC色譜柱(Waters，粒徑1.7 μm，2.1 mm×100 mm)；進樣量：5 μL；柱溫：25 ℃；柱流速：0.3 mL/min；流動相：A相為含0.1%甲酸的甲酸銨溶液(甲酸銨濃度為5 mmol/L)，B相為含0.1%甲酸的乙腈溶液。按表1的程序進行梯度洗脫。

表1 液相梯度洗脫程序

續(xù)表1:

1.3.2 質(zhì)譜條件

離子化方式：電噴霧電離；

掃描方式：正離子掃描；

檢測方式：MRM多反應監(jiān)測。

質(zhì)譜優(yōu)化后的方法條件具體見表2(帶*為定量離子)。

表2 7種化合物的定性離子對、定量離子對、裂解電壓及碰撞能量

2 方法和結果

2.1 樣品QuEChERS前處理

稱取試樣2 g(精確至0.01 g)于50 mL帶塞離心管中，加入60 μL 5.0 μg/mL的同位素內(nèi)標工作溶液，液體樣品和半固體樣品可加入2 mL水，固體樣品加入5 mL鹽酸溶液。渦旋振蕩40 s，然后準確加入乙腈15 mL，蓋緊管塞，渦旋振蕩1 min，再超聲30 min 后取出。將6 g無水硫酸鎂和1.5 g無水醋酸鈉的混合粉末加入離心管，立即渦旋振蕩 3 min，以吸附樣品中的全部水分，以5000 r/min轉速離心4 min，取上清液過0.22 μm的濾膜。取 1 mL續(xù)濾液進樣，用于測定可待因、嗎啡兩種化合物；準確吸取500 μL續(xù)濾液至10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，混勻后進樣，用于測定那可丁、蒂巴因、罌粟堿三種化合物。選取不含五種生物堿的火鍋底料、半固體調(diào)味料作為空白樣品基質(zhì)，同時做空白實驗，用于計算加標回收率。

2.2 標準溶液配制

分別吸取相應體積的混合標準儲備液(那可丁、蒂巴因和罌粟堿的濃度為10 μg/mL，嗎啡和可待因的濃度為50 μg/mL)于10 mL容量瓶中，用乙腈定容配制成所需的標準系列。那可丁、罌粟堿和蒂巴因的濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10、20 ng/mL；可待因和嗎啡的濃度分別為2.5、5.0、10、20、50、100 ng/mL。

嗎啡-D3同位素和可待因-D3同位素混合標準溶液濃度為5.0 μg/mL，在標準系列中內(nèi)標溶液濃度為20 ng/mL。

2.3 測定

2.3.1 定性測定

在相同的實驗條件下分別測定標準溶液和樣品溶液。如果樣品溶液中檢出的色譜峰保留時間和相應標準溶液色譜峰的保留時間一致，并且樣品溶液的質(zhì)譜離子對相對豐度與濃度相當?shù)臉藴嗜芤旱馁|(zhì)譜離子對相對豐度相比較，相對離子豐度(k)允許的相對偏差在表3規(guī)定的范圍內(nèi)，即可以判定此樣品中存在該組分。

表3 定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差范圍

2.3.2 定量測定

取混合標準工作溶液進樣，以那可丁、蒂巴因和罌粟堿三種化合物的色譜峰面積為縱坐標，以那可丁、蒂巴因和罌粟堿三種化合物的濃度為橫坐標，繪制標準工作曲線，采用外標法定量；以可待因和嗎啡的峰面積與相應內(nèi)標物峰面積的比值作為縱坐標，以可待因和嗎啡的濃度為橫坐標，繪制標準工作曲線，采用內(nèi)標法定量。

2.4 分析結果

2.4.1 五種化合物的提取離子質(zhì)譜圖

在上述的色譜和質(zhì)譜條件下，五種化合物的標準物質(zhì)提取離子質(zhì)譜圖見圖1—圖5。

圖1 罌粟堿提取離子質(zhì)譜圖

圖2 那可丁提取離子質(zhì)譜圖

圖3 蒂巴因提取離子質(zhì)譜圖

圖4 嗎啡提取離子質(zhì)譜圖

圖5 可待因提取離子質(zhì)譜圖

2.4.2 五種化合物的標準曲線

五種化合物的標準曲線見表4。

表4 五種化合物的標準曲線

2.4.3 加標回收結果

五種化合物的加標回收結果見表5。

表5 加標回收結果

3 結語

以火鍋底料為空白基質(zhì)時，罌粟堿、那可丁、蒂巴因的加標回收率為74.0%～102.3%，嗎啡、可待因的加標回收率為75.7%～103.8%，均在回收率為75%～120%的準確度范圍內(nèi)。以半固體調(diào)味料為空白基質(zhì)時，罌粟堿、那可丁、蒂巴因的加標回收率為75.0%～93.2%，嗎啡、可待因的加標回收率為76.8%～105.9%，均在回收率為65%～120%的準確度范圍內(nèi)。

火鍋底料和半固體調(diào)味料中的脂肪和鹽含量高，添加成分多，基質(zhì)復雜。本文中的QuEChERS前處理方法，操作簡便，通過加標回收率驗證，能夠滿足準確度的要求。