含釓對比劑的環(huán)境污染現(xiàn)狀、毒性及分析方法

劉洪濤，陳 曦，沈素云，蔣 超，馮順卿，欒天罡*

(1.中山大學(xué) 測試中心，廣東 廣州 510275；2.中山大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510275)

釓對比劑(GBCAs)是目前常用的核磁共振(MRI)對比劑，與其他金屬離子相比，釓離子(Gd3+)由于最外層有7個(gè)未成對電子，電子的誘導(dǎo)作用強(qiáng)，弛豫時(shí)間長，所以具有良好的順磁性而被廣泛研究[1]。游離的Gd3+因與Ca2+具有相似尺寸，在生物體內(nèi)會抑制Ca2+參與的生物過程(如與含鈣的酶結(jié)合使酶失活，影響鈣離子通道等)，從而產(chǎn)生劇毒[2]。因此，通常會將Gd3+與螯合劑螯合，如二乙基三胺五乙酸(DTPA)、1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四羧酸(DOTA等)，形成穩(wěn)定的化合物而作為GBCAs使用。1984年Carr首次研究釓噴酸葡甲胺(Gd-DTPA)對人腦腫瘤的強(qiáng)化作用[3]。1987年美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)正式批準(zhǔn)其作為磁共振造影劑。1988年首個(gè)商品化的GBCAs投入市場，其后，各種GBCAs紛紛進(jìn)入臨床應(yīng)用。目前商用的GBCAs有9種，按化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為線型和環(huán)型，或離子型和非離子型(見表1)。環(huán)型結(jié)構(gòu)能束縛Gd3+，給Gd3+提供更好的保護(hù)，因此其比線型結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。離子型環(huán)狀的螯合物由于無需多余的螯合，最難釋放Gd3+，因此比非離子型環(huán)狀的螯合物穩(wěn)定。由于含釓造影劑的水溶性強(qiáng)，熱力學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在環(huán)境中不易分解或除去，大量使用含釓造影劑還會造成地表水的釓含量異常升高。而2000年首次報(bào)道一種新疾病——腎源性系統(tǒng)性纖維化疾病(NSF)[4]，2006年流行病學(xué)研究提出NSF可能與含釓造影劑的使用相關(guān)[5]，含釓對比劑的毒性及環(huán)境歸趨引起了科學(xué)家的關(guān)注。

表1 9種商用含釓對比劑的信息Table 1 Informations of nine commercial gadolinium-based contrast agents

1 環(huán)境污染現(xiàn)狀

GBCAs具有很高的親水性，污水處理廠的傳統(tǒng)工藝不能很好地將其去除而進(jìn)入環(huán)境[6]。目前GBCAs的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)研究集中在水環(huán)境方面。1996年，Bau等[7]首次報(bào)道了環(huán)境水體中Gd含量異常，發(fā)現(xiàn)城市河水中Gd元素含量在稀土元素中的占比遠(yuǎn)高于自然占比，異常的Gd含量應(yīng)來自人為輸入。Kümmerer等[8]估算1999年德國約有超過1 000 kg的Gd排放到地表水中，約占當(dāng)年全球醫(yī)用Gd使用量的5%。 Cyris等[9]基于一定假設(shè)條件下，外推出德國到2013年，每年約12噸的Gd通過排污系統(tǒng)進(jìn)入環(huán)境。目前，德國、捷克、法國、美國、日本、韓國、澳大利亞等國家已在地表水中發(fā)現(xiàn)Gd含量高于自然水平上百倍，異常Gd含量通常發(fā)生在醫(yī)療及工業(yè)發(fā)達(dá)的地區(qū)[10-24]。在德國的一個(gè)污水處理廠出水口，Gd的含量甚至高達(dá)mg/L級[9]。Kulaksiz[25]、Tepe[26]、Schmidt[27]等均報(bào)道德國柏林自來水中Gd含量從2009年到2012年顯著升高(最高11.5倍)，提示由Gd引起的健康風(fēng)險(xiǎn)持續(xù)提高。近年來，農(nóng)村地區(qū)也發(fā)現(xiàn)了人為輸入Gd濃度的增高，這可能歸因于接受核磁共振掃描的病人回鄉(xiāng)后體內(nèi)的GBCAs經(jīng)排泄進(jìn)入環(huán)境[23]。水環(huán)境中Gd的異常引起了科學(xué)家關(guān)注，源自GBCAs的釓可成為污水中外源性物質(zhì)的合適指示劑[28]，因此成為新型環(huán)境潛在污染物[6，29]。Gd元素可引起生態(tài)毒性，研究發(fā)現(xiàn)，水生生物(木霉菌、大型蚤、青萍、水芹、鯉魚等)可從水溶液中富集Gd元素[30-33]，富集倍數(shù)為3.2～86.4，少數(shù)報(bào)道發(fā)現(xiàn)水系沉積物中含有人為輸入的Gd[34-38]。提示存在Gd通過食物鏈放大影響人類健康的可能。本課題組也在中國南方某城市污水廠入水樣品中檢出4種GBCAs(未發(fā)表結(jié)果)，提示我國大城市存在GBCAs污染的可能性。

目前,COVID-19疾病的全球傳播導(dǎo)致GBCAs的使用暫時(shí)減少，這種由于經(jīng)濟(jì)生產(chǎn)和社會化的癱瘓將在環(huán)境中留下強(qiáng)烈信號[39]。除了關(guān)閉工廠和企業(yè)外，所有國家都在關(guān)注新型冠狀病毒對衛(wèi)生系統(tǒng)的影響，并在為這種前所未有的情況做準(zhǔn)備，一些非必要的醫(yī)療檢查(包括磁共振成像的使用)和手術(shù)被推遲，以便騰出足夠的醫(yī)療能力和人員。目前，醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行的MRI檢查減少了80%，預(yù)計(jì)GBCAs排放量將顯著減少，這將導(dǎo)致淡水系統(tǒng)中Gd濃度的暫時(shí)降低，測量和分析這種瞬態(tài)Gd信號可提高人們對環(huán)境系統(tǒng)的認(rèn)識，并為自來水廠有關(guān)外源或病原體輸入的風(fēng)險(xiǎn)評估提供更好的數(shù)據(jù)[40]。未來，由于MRI的不斷增加，水環(huán)境中GBCAs濃度可能繼續(xù)升高，盡管實(shí)際增加的GBCAs濃度很低，但污水處理工藝對飲用水中GBCAs的影響將會引起環(huán)境工作者的關(guān)注。

2 生物毒性研究現(xiàn)狀

2.1 含釓對比劑與NSF

NSF是被報(bào)道的與GBCAs使用有關(guān)的疾病，發(fā)生在嚴(yán)重腎功能損傷病人注射GBCAs后，目前致病機(jī)理仍不明確[41]。2006年Grobner提出NSF可能與GBCAs的使用有關(guān)[5]，此后的探究提示了釓與NSF疾病的相關(guān)性[42-49]，并在NSF患者的腦部、皮膚、組織及血管等位置檢出金屬釓。GBCAs的安全性開始受到質(zhì)疑[50]，美國、歐洲各國以及我國先后出臺GBCAs安全使用警示[51-54]。

目前NSF疾病與GBCAs相關(guān)性的研究主要分為兩部分：GBCAs金屬轉(zhuǎn)移分析;金屬釓刺激產(chǎn)生NSF疾病的原因。實(shí)驗(yàn)分為體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ桶ǎ杭?xì)胞模型(主要以成纖維細(xì)胞為主)、血液、人皮膚、活體動(dòng)物模型(以小鼠為主)等[55-70]。Kimura等[55]在體內(nèi)注射釓雙胺(Gd-DTPA-BMA)、Gd-DTPA和釓特酸葡甲胺(Gd-DOTA)，結(jié)果顯示注射Gd-DTPA-BMA的病人體內(nèi)Zn的含量最高。Gd-DOTA增加，Zn的排放量不明顯，Gd-DTPA增加，有少量Zn的排放，而Cu的排放不受三者影響。Puttagunta等[58]進(jìn)行Gd-DTPA、Gd-DTPA-BMA等GBCAs體內(nèi)轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明有金屬轉(zhuǎn)移，使用Gd-DTPA-BMA的病人尿液中鋅含量顯著升高。Tweedle等[59]發(fā)現(xiàn)GBCAs在體外可發(fā)生金屬離子置換，產(chǎn)生游離的釓離子。Telgmann等[60]體外實(shí)驗(yàn)評估Gd-DTPA、Gd-DOTA與鐵之間的金屬離子轉(zhuǎn)移，證明Fe3+與GBCAs在血漿中需較長的時(shí)間后發(fā)生離子轉(zhuǎn)化，說明GBCAs在腎病病人體內(nèi)的半衰期較久，導(dǎo)致其與其他金屬離子發(fā)生轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生游離釓離子。Idée和Thakral等[61-62]對與GBCAs相關(guān)的金屬轉(zhuǎn)移研究進(jìn)行總結(jié)，提出金屬轉(zhuǎn)移產(chǎn)生游離釓是誘發(fā)NSF疾病的可能作用機(jī)制。病人腎功能受損無法將GBCAs完全排除，當(dāng)造影劑的半衰期超過30 h后，“螯合Gd”與“游離Gd”之間的平衡被破壞，使Gd3+被其他金屬離子置換，從螯合形態(tài)解離出來。游離的Gd3+與血漿中的物質(zhì)結(jié)合，從而刺激NSF疾病產(chǎn)生[61]。

在探求釓造成纖維化的誘導(dǎo)機(jī)制方面，主要從GBCAs對成纖維細(xì)胞造成增殖、對膠原蛋白產(chǎn)生影響[63-66]以及對免疫細(xì)胞造成刺激等領(lǐng)域展開[67-69]。Edward等[63]發(fā)現(xiàn)GBCAs可誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞產(chǎn)生過量的乙酰透明質(zhì)酸和膠原蛋白，并刺激纖維細(xì)胞生長。Varani等[64]發(fā)現(xiàn)人皮膚在釓雙胺的刺激下膠原蛋白并無顯著變化，但基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)及組織抑制劑(TIMP-1)增加；釓雙胺處理下的成纖維細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞增殖并伴隨MMP及TIMP-1增加。同時(shí)，GBCAs濃度不同，對成纖維細(xì)胞功能作用發(fā)生變化，濃度過高時(shí)將抑制部分纖維細(xì)胞增殖及相應(yīng)金屬蛋白酶較少。而Perone等[66]發(fā)現(xiàn)GBCAs雖然對膠原蛋白含量并無影響，但膠原分解活性受到影響。且膠原的分解活性與TIMP-1有關(guān)，當(dāng)TIMP-1高達(dá)250 ng/mL時(shí)觀察到膠原在細(xì)胞層中沉積的增加。證明GBCAs加入后導(dǎo)致TIMP-1增加，同時(shí)導(dǎo)致膠原降解活性降低，膠原更新減少并易形成膠原蛋白沉淀損害細(xì)胞。

關(guān)于GBCAs對免疫細(xì)胞作用的研究，Vakil等[68]發(fā)現(xiàn)釓雙胺干擾單核細(xì)胞對纖維細(xì)胞分化的信號調(diào)節(jié)，從而造成纖維化，說明NSF的發(fā)病機(jī)理可能由于GBCAs影響纖維細(xì)胞分化的輔助因子。Newton等[69]通過研究GBCAs刺激下的免疫細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞炎癥變化，解釋游離釓離子刺激促炎和纖維化反應(yīng)過程，即GBCAs產(chǎn)生游離釓離子，刺激單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和炎癥小體等免疫細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致纖維化。Schmidtlauber等[70]使用酶聯(lián)免疫法(ELISA)、蛋白質(zhì)印跡法和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)法對釓刺激下小鼠內(nèi)NLRP3炎癥小體和IL-1β白細(xì)胞介素含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)釓離子及釓雙胺均可激活NLRP3并誘導(dǎo)IL-1β產(chǎn)生。說明GBCAs會誘發(fā)炎癥小體產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，從而誘導(dǎo)纖維化。

2.2 含釓對比劑NSF以外的毒理學(xué)終點(diǎn)

目前，GBCAs暴露與毒理學(xué)終點(diǎn)(嚴(yán)重腎損害患者的NSF除外)之間的關(guān)系數(shù)據(jù)有限。由于NSF病人的增多，非NSF病人在使用GBCAs(特別是多次使用)后的臨床癥狀及毒性研究開始受到關(guān)注[71]。近年來，提出了一種新的病理——釓沉積病(GDD)[72]。盡管GDD的病理生理機(jī)制、危險(xiǎn)因素，甚至作為一種疾病都存在爭議，但GDD已廣泛受到關(guān)注。雖然GBCAs相對穩(wěn)定，但有報(bào)道發(fā)現(xiàn)GBCAs在體內(nèi)可分解，使得Gd元素在動(dòng)物或非NSF病人組織及器官沉積、富集，甚至組織學(xué)改變，包括腦組織(特別是齒狀核和蒼白球)、骨頭、皮膚、肝臟等，多次使用GBCAs的病人Gd累積現(xiàn)象更甚[73-80]。Gd在部分組織的沉積是長期的，在骨頭沉積甚至長達(dá)8年以上[81]。

GBCAs具有腎毒性，體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)其可導(dǎo)致腎小管細(xì)胞壞死和凋亡[82]；對比豬注射GBCAs與注射含碘造影劑后的影響，GBCAs顯示出更強(qiáng)的腎毒性[83]；Akgun等[84]報(bào)道了一位56歲腎功能正常的女性患者連續(xù)2次注射GBCAs進(jìn)行核磁成像檢查，幾天后病人出現(xiàn)急性腎功能衰竭，腎活檢顯示急性腎小管壞死。

GBCAs毒性不限于腎毒性。在GBCAs治療的小鼠中觀察到肝、肺和腎組織的組織病變和分子凋亡[85]。Blasco-Perrin等[86]報(bào)道一位58歲女性在核磁共振檢查中使用GBCAs誘發(fā)復(fù)發(fā)性急性胰腺炎(最初給藥3 h后)。另一病例報(bào)告顯示GBCAs給藥后出現(xiàn)胰腺炎[87]。一名45歲無癥狀女性在使用GBCAs進(jìn)行頭顱MRI檢查4 h后出現(xiàn)上腹部疼痛和嘔吐，腹部癥狀出現(xiàn)12 h后，發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重壞死性胰腺炎。

GBCAs證實(shí)具有潛在神經(jīng)毒性。Ray等[88]報(bào)道將釓噴酸二甲胺注射到雄性大鼠側(cè)腦室后產(chǎn)生了急性神經(jīng)毒性(肌陣攣、共濟(jì)失調(diào)、震顫、胼胝體出血和損傷)。Hui等[89]報(bào)道了一名接受GBCAs核磁共振成像的婦女腦病的發(fā)展，質(zhì)譜法檢測到病人腦脊液樣本中含有23 000 nmol/mL的釓。

以往的致病機(jī)理和毒性研究從分子生物學(xué)或臨床癥狀角度出發(fā)，缺乏體內(nèi)釓形態(tài)的直接證據(jù)。本課題組選擇NIH-3T3細(xì)胞作為Gd暴露實(shí)驗(yàn)和Gd結(jié)合蛋白鑒定的模型，通過多種分析手段分離鑒定出微管蛋白是NIH-3T3細(xì)胞中一種新的Gd結(jié)合蛋白，并通過生物實(shí)驗(yàn)證實(shí)Gd與微管蛋白的結(jié)合能抑制微管蛋白的聚集或解聚，提示Gd3+與微管蛋白結(jié)合干擾微管的形成可能是Gd毒性的重要分子機(jī)制[90]。

3 分析方法

3.1 檢測方法

目前在GBCAs的環(huán)境行為及毒性研究中，采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法(ICP-OES)、電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)、X射線熒光光譜法(XRF)對Gd元素總量進(jìn)行檢測仍是主要手段[91]。Gd元素總量在一定程度上可間接反映GBCAs在環(huán)境以及生物組織中的分布、遷移、轉(zhuǎn)化，但不能獲得GBCAs的形態(tài)轉(zhuǎn)化、代謝及其與其他物質(zhì)的相互作用等具體信息，因此，對具體GBCAs的檢測變得尤為重要。GBCAs具有水溶性強(qiáng)、結(jié)構(gòu)多樣的特點(diǎn)，針對其中1種或多種GBCAs檢測的方法種類較多，目前國內(nèi)外報(bào)道的檢測方法主要分為色譜類方法、電泳類方法、輻射類方法及聯(lián)用類方法。色譜類方法包括高效液相色譜法(HPLC)、尺寸排阻色譜法(SEC)、離子色譜法(IC)；電泳類方法包括毛細(xì)管電泳法(CE)、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法(CZE)、膠束電動(dòng)毛細(xì)管電色譜(MEKC)；聯(lián)用類方法包括高效液相色譜-質(zhì)譜法(HPLC-MS)、毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜法(CE-MS)、高效液相色譜-電感耦合等離子體發(fā)射光譜法(HPLC-ICP-OES)、高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法(HPLC-ICP-MS)等(見表2)。

表2 不同類型樣品中含釓對比劑的分析方法Table 2 Analytical methods for GBCAs in different type of samples

(續(xù)表2)

GBCAs的研發(fā)過程中，由于Gd3+具有較強(qiáng)的毒性，需對GBCAs進(jìn)行穩(wěn)定性研究，HPLC成為主要的方法之一。由于穩(wěn)定性研究無需對不同的GBCAs進(jìn)行同時(shí)測定，目標(biāo)物單一，液相色譜柱多采用反相C18[59,92-97]或C8[95,98-99]色譜柱。同時(shí),GBCAs可配制成相對較高濃度的溶液，一般采用紫外可見檢測器檢測。部分Gd絡(luò)合物具有熒光響應(yīng)(如Gd-DOTA)，可在280 nm下激發(fā)，316 nm波長處檢測[93]。在HPLC分離檢測某些GBCAs時(shí)，由于目標(biāo)物易電離，需加入離子對試劑(四丁基氫氧化銨)加強(qiáng)目標(biāo)物在反相柱上的保留(如Gd-BOPTA2-)[95]。穩(wěn)定性研究實(shí)驗(yàn)中，由于GBCAs的分子量較大，因此可采用尺寸排阻色譜柱將Gd3+與GBCAs分離，可同時(shí)測定GBCAs和解離的離子[101]。由于GBCAs極性很強(qiáng)，在反相色譜柱上的保留較差，分析多種GBCAs時(shí)會出現(xiàn)共流出現(xiàn)象，為提高多種GBCAs同時(shí)測定時(shí)的色譜分離度，近年來多采用親水作用色譜柱進(jìn)行分離。本課題組、Maia等[114-115]采用化學(xué)計(jì)量學(xué)手段對HPLC分離條件進(jìn)行優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了1種或多種GBCAs的最優(yōu)化分離。由于部分GBCAs為離子型化合物，因此可采用離子色譜[111,115]、毛細(xì)管電泳、毛細(xì)管區(qū)帶電泳[102,108,110]進(jìn)行分離，該類方法對于非離子型GBCAs難以分離。為同時(shí)檢測離子型和非離子型GBCAs，Andrasi等[109]采用MEKC法分離檢測了6種GBCAs，該方法可直接進(jìn)樣檢測，適合臨床樣品GBCAs的快速檢測。

HPLC法的靈敏度較低，檢出限較高，一般在μmol/L級。由于環(huán)境中GBCAs的含量相對較低，而在研究生物代謝動(dòng)力學(xué)時(shí)亦需要更靈敏的方法，因GBCAs含有Gd元素，可通過將分離方法與高靈敏元素檢測方法聯(lián)用以改善GBCAs的方法檢出限，HPLC-ICP-OES[105]和HPLC-ICP-MS因此應(yīng)運(yùn)而生[101,103,111-113,115]，檢出限可達(dá)nmol/L或亞nmol/L級。獲得更低檢出限的另一選擇是采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，檢出限可至nmol/L或亞μmol/L級，視目標(biāo)GBCAs的可電離程度而異。本課題組[115]對比了HPLC-ICP-MS、HPLC-MS和IC對于7種GBCAs的檢測能力，GBCAs在ESI的電離差異較大，HPLC-ESI-MS的檢出限較HPLC-ICP-MS高1～2個(gè)數(shù)量級，而IC僅能分析其中4種離子型化合物，因此HPLC-ICP-MS在多種GBCAs同時(shí)檢測時(shí)具有較大優(yōu)勢，可適用于低含量GBCAs的環(huán)境、生物應(yīng)用。但其仍具局限性，由于使用HILIC或反相色譜柱分離，流動(dòng)相含有高含量乙腈或甲醇，對聯(lián)用的ICP-MS儀有硬件要求，需配備小內(nèi)徑中心管的炬管、有機(jī)加氧裝置及半導(dǎo)體制冷裝置，相應(yīng)的儀器調(diào)諧也需在有機(jī)進(jìn)樣模式下進(jìn)行。CE與MS聯(lián)用也可提高方法靈敏度，檢出限可達(dá)亞μmol/L級，但僅局限于部分GBCAs。

3.2 樣品前處理

目前所報(bào)道的檢測GBCAs的樣品類型分為兩類：一類為水樣，包括地表水、污水、自來水等；另一類為生物樣品，主要為血樣和尿樣，包括血漿、血清、全血等。第一類樣品基質(zhì)相對簡單，且GBCAs水溶性強(qiáng)，樣品經(jīng)過濾后可直接進(jìn)樣。對于含量極低的水樣，有報(bào)道通過紅外烘烤的方式進(jìn)行濃縮富集。第二類樣品因富含大量蛋白質(zhì)、有機(jī)物等基質(zhì)，多采用沉淀蛋白后，離心過濾進(jìn)樣分析。

目前研究涉及的樣品類型均集中于上述兩類樣品，因此所涉及的樣品前處理技術(shù)相對簡單。隨著含釓對比劑毒性和環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)的進(jìn)一步開展，更多樣品類型被關(guān)注，針對不同類型的樣品特性，將會開發(fā)更多的樣品前處理方法以適應(yīng)檢測需求。

4 結(jié)論及展望

GBCAs的使用量日益增長，因其具有很高的親水性，在污水處理廠不能很好被去除而輕易地進(jìn)入環(huán)境。由于GBCAs與NSF疾病密切相關(guān)，同時(shí)已被證實(shí)具有神經(jīng)毒性、腎毒性、導(dǎo)致組織病變等毒性，進(jìn)入環(huán)境的GBCAs成為新型污染物。各國先后在環(huán)境中檢出GBCAs，但其環(huán)境歸趨、轉(zhuǎn)化、生態(tài)毒性等信息鮮少，因此開展GBCAs的環(huán)境、生態(tài)、毒理、健康風(fēng)險(xiǎn)研究意義重大，而準(zhǔn)確可靠的分析方法是開展相關(guān)工作的重要保障。GBCAs的分析方法以色譜法及色譜與其他檢測技術(shù)聯(lián)用法為主，其中，基于親水色譜分離的HPLC-ICP-MS法因具有良好的選擇性、準(zhǔn)確性及靈敏度，成為GBCAs分析的首選方法。

今后GBCAs的相關(guān)研究可考慮從以下3方面進(jìn)行：①目前所報(bào)道的檢測方法多針對水樣、血樣、尿樣等液體樣品，相應(yīng)的前處理方法簡單，但由于環(huán)境中部分GBCAs的含量極微，目前的檢測方法仍未滿足要求，應(yīng)關(guān)注針對沉積物、不同類型生物組織等復(fù)雜基質(zhì)樣品的前處理方法，以減少基體效應(yīng)、富集濃縮超低含量GBCAs；②目前GBCAs的環(huán)境歸趨、轉(zhuǎn)化、生態(tài)毒性信息較少，可開展相關(guān)方面研究；③GBCAs暴露與毒理學(xué)終點(diǎn)之間的關(guān)系數(shù)據(jù)有限，相關(guān)機(jī)理尚未明確，可通過建立多種分析方法相結(jié)合的檢測系統(tǒng)，結(jié)合生物學(xué)研究手段，揭示相關(guān)毒性機(jī)理。