四霉素與丙硫菌唑復(fù)配對(duì)草莓炭疽病菌的增效作用

王曉琳 鄔劼 黃潔雪 吉沐祥

摘要：在實(shí)驗(yàn)室條件下，以草莓炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）為供試菌，采用菌絲生長(zhǎng)速率法，測(cè)定了吡唑醚菌酯、四霉素、丙硫菌唑、氟吡菌酰胺和吡噻菌胺對(duì)草莓炭疽病菌的毒力。結(jié)果表明，丙硫菌唑?qū)Σ葺烤也【种浦袧舛茸畹?，EC50僅為0.036 6 μg/mL，其次是四霉素，EC50為0.297 5 μg/mL，吡噻菌胺抑制中濃度最高，其EC50為1.818 8 μg/mL。在離體條件下開展四霉素與丙硫菌唑配比篩選試驗(yàn)，結(jié)果表明，當(dāng)四霉素與丙硫菌唑的質(zhì)量比為1 ∶ 15時(shí)，EC50僅為0.022 4 μg/mL，增效系數(shù)（SR）值為1.73，確定四霉素與丙硫菌唑防治草莓炭疽病菌的最佳比例為1 ∶ 15。

關(guān)鍵詞：四霉素;丙硫菌唑;草莓炭疽病菌;復(fù)配;增效作用

中圖分類號(hào)：S436.68+4 ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A ?文章編號(hào)：1002-1302（2021）10-0091-05

草莓是江蘇省大面積栽培的特色經(jīng)濟(jì)作物之一，全省種植面積達(dá)2萬hm2，主要分布在蘇南的句容市、溧水縣、宜興市，以及蘇北地區(qū)的東海市、銅山區(qū)、賈旺區(qū)、如皋市、海門市、沭陽(yáng)縣等地區(qū)，其中設(shè)施草莓面積超過90%，年產(chǎn)量超過4.0萬t。草莓作為江蘇省冬季唯一時(shí)令水果，產(chǎn)品供不應(yīng)求，經(jīng)濟(jì)效益顯著，收益超1萬元/667 m2，草莓產(chǎn)業(yè)已成為當(dāng)?shù)噩F(xiàn)代農(nóng)業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)。草莓在生產(chǎn)中病蟲害多而復(fù)雜，隨著近年來極端氣候的頻現(xiàn)，特別是雨水天氣導(dǎo)致草莓露天育苗病害重，其中又以草莓炭疽病為甚。炭疽病危害草莓整個(gè)生長(zhǎng)期，尤其是育苗期和移栽存活期的匍匐莖、葉片、葉柄、根冠等部位容易染病，導(dǎo)致局部產(chǎn)生病斑，甚至整株死亡[1]。目前生產(chǎn)上主要采用甲氧基丙烯酸酯類、咪唑類、三唑類、苯并咪唑類等化學(xué)殺菌劑進(jìn)行草莓炭疽病的防治。楊敬輝等對(duì)江蘇省句容市的1株草莓炭疽病原菌進(jìn)行分離鑒定，并采用12種殺菌劑對(duì)該炭疽病菌進(jìn)行了室內(nèi)毒力試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)丙環(huán)唑、氟硅唑、咪鮮胺、氟環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇對(duì)其抑制中濃度較低，有較好的抑菌活性[2]。吳祥等發(fā)現(xiàn)，吡唑醚菌酯、咪鮮胺、已唑醇和嘧菌 ∶ 已唑醇（1 ∶ 2，體積比）對(duì)草莓炭疽病菌也有較強(qiáng)的室內(nèi)抑菌活性[3]。因?yàn)榉乐尾葺烤也〉臍⒕鷦┐蠖嗍菃我坏淖饔梦稽c(diǎn)，具有高度的選擇專化性，在長(zhǎng)期高劑量殺菌劑的選擇壓下，導(dǎo)致草莓炭疽病菌產(chǎn)生嚴(yán)重的抗藥性。林婷檢測(cè)到對(duì)甲基硫菌靈產(chǎn)生高水平抗藥性的草莓炭疽病菌株67株，頻率高達(dá)98.53%[4]。韓國(guó)興等通過對(duì)杭州建德和下沙草莓基地菌株的抗性進(jìn)行檢測(cè)，也發(fā)現(xiàn)膠孢炭疽菌對(duì)乙霉威高抗菌株比例高達(dá)93.7%，對(duì)多菌靈高抗菌株的比例達(dá)92.1%，同時(shí)抗這2種藥劑的菌株的比例高達(dá)87.3%[5]。

植物源農(nóng)藥、微生物農(nóng)藥或抗生素類生防藥劑，是現(xiàn)代種植產(chǎn)業(yè)的綠色健康可持續(xù)發(fā)展的方向。但是生物農(nóng)藥在防治草莓炭疽病的實(shí)際應(yīng)用中，因?yàn)槿菀资墉h(huán)境等因素影響而導(dǎo)致防效穩(wěn)定性差、作用持久性差等問題。遼寧微科生物工程股份有限公司2016年登記的四霉素（梧寧霉素）生物農(nóng)藥，是不吸水鏈霉菌梧州亞種的發(fā)酵代謝產(chǎn)物，其有效成分可通過抑制菌絲體生長(zhǎng)，誘導(dǎo)植物抗性并促進(jìn)作物生長(zhǎng)而達(dá)到防治病害的目的[6]。安徽久易農(nóng)業(yè)股份有限公司2019年登記的三唑硫酮類殺菌劑——丙硫菌唑，屬甾醇脫甲基化抑制劑，具有選擇性、保護(hù)性、治療性和持效性等特點(diǎn)[7]。本研究選用生物農(nóng)藥四霉素與丙硫菌唑復(fù)配，以期明確2種藥劑最佳配比，旨在為草莓炭疽病的防治提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株 草莓炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）采自江蘇省句容市白兔鎮(zhèn)笪小華家庭農(nóng)場(chǎng)草莓棚，由江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所分離、鑒定、并保存?zhèn)溆?。菌? ℃保存于馬鈴薯蔗糖瓊脂（PDA）斜面上。將菌種在PDA培養(yǎng)基平板上轉(zhuǎn)接1次后，置于25 ℃條件下預(yù)培養(yǎng)6 d，從菌落邊緣取直徑5 mm菌絲塊用做藥劑毒力測(cè)定。

1.1.2 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn) 試驗(yàn)時(shí)間2020年7—10月，試驗(yàn)地點(diǎn)江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所中心實(shí)驗(yàn)室。

1.1.3 供試藥劑 詳見表1。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藥液的配制及濃度設(shè)計(jì) 母液配制：各藥劑均用蒸餾水溶解，配制成1 000 μg/mL的母液。

草莓炭疽病菌各藥劑（單劑）的濃度設(shè)置見表2。

四霉素、丙硫菌唑與不同配方的濃度設(shè)置見表3。

四霉素和丙硫菌唑2個(gè)殺菌劑的單劑與不同配方的濃度設(shè)計(jì)均為6個(gè)2倍稀釋的梯度濃度含藥PDA培養(yǎng)基，試驗(yàn)所用殺菌劑系列濃度的藥液均為現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.2 殺菌劑對(duì)草莓炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定 溫度為25 ℃條件下培養(yǎng)6 d后，每個(gè)菌落用十字交叉法垂直測(cè)量其直徑各1次，每處理重復(fù)4次，然后取平均值。以不含殺菌劑的PDA培養(yǎng)基為對(duì)照計(jì)算藥劑的抑制率，按毒力回歸方程y=a+bx計(jì)算藥劑抑制菌絲生長(zhǎng)的有效中濃度（EC50），將其作為毒力參數(shù)。結(jié)果計(jì)算公式：D=D1-D2，式中：D為菌落增長(zhǎng)直徑;D1為菌落直徑;D2為菌餅直徑。I=（D0-Dt）/D0×100%，式中：I為菌絲生長(zhǎng)抑制率;D0為空白對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑;Dt為藥劑處理菌落增長(zhǎng)直徑。

1.2.3 殺菌劑對(duì)草莓炭疽病菌離體試驗(yàn)的最佳配比篩選 通過下列公式計(jì)算四霉素與丙硫菌唑的增效系數(shù)（SR）。

EC50（exp）=a+baEC50（A）+bEC50（B）;

SR=EC50（exp）EC50（obs）。

式中：a代表混劑中A的百分比;b代表混劑中B的百分比;EC50 （obs）為混劑EC50實(shí)測(cè)值，EC50（exp）為混劑EC50理論值。通過SR來評(píng)估四霉素與丙硫菌唑混用的增效作用，SR>1.5為增效作用，0.5≤SR≤1.5為相加作用，SR<0.5為拮抗作用[8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)抑菌活性測(cè)定

2.1.1 5種殺菌劑對(duì)草莓炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用 試驗(yàn)結(jié)果顯示，5種殺菌劑對(duì)草莓炭疽病菌均有一定的毒力作用，其中丙硫菌唑的毒力最強(qiáng)，四霉素次之（表4）。5種單劑的抑制中濃度（EC50）依次為丙硫菌唑（0.036 4 μg/mL）<四霉素（0.296 2 μg/mL）<吡唑醚菌酯（1.101 4 μg/mL）<氟吡菌酰胺（1.362 8 μg/mL）<吡噻菌胺（1.818 8 μg/mL）。

2.1.2 四霉素、丙硫菌唑與不同配方對(duì)草莓炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制 從表5可以看出，不同藥劑隨著濃度的升高對(duì)草莓炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑菌率都有不同程度的提高，其中當(dāng)四霉素濃度為0.1～3.2 μg/mL 時(shí)，其抑菌率為30.68%～99.41%;當(dāng)丙硫菌唑濃度為0.012 5～0.400 0 μg/mL 時(shí)，其抑菌率為27.73%～95.58%;當(dāng)四霉素與丙硫菌唑的配比分別為1 ∶ 15、1 ∶ 11、1 ∶ 7、1 ∶ 3時(shí)，其抑菌率分別為37.76%～95.28%、27.14%～98.53%、19.76%～87.91%、18.88%～90.27%;當(dāng)四霉素與丙硫菌唑的配比分別為15 ∶ 1、11 ∶ 1、7 ∶ 1、3 ∶ 1時(shí)，抑菌率分別為5.90%～55.46%、5.01%～65.49%、10.91%～64.90%、17.11%～71.98%。

2.1.3 四霉素與丙硫菌唑?qū)Σ葺烤也【罴雅浔群Y選 試驗(yàn)中篩選到的毒力最高殺菌劑為四霉素和丙硫菌唑，將二者復(fù)配后根據(jù)Wedley法確定其最佳配比。依據(jù)前述毒力回歸曲線方程、抑制中濃度和SR值（表6）可知，四霉素與丙硫菌唑復(fù)配比例為1 ∶ 15時(shí)，其SR值最高，為1.73，表現(xiàn)為增效作用，此時(shí)EC50僅為0.022 4 μg/mL，其他復(fù)配比例的SR值在0.73～1.18，表現(xiàn)為相加作用。因此建議四霉素與丙硫菌唑的復(fù)配用于防治草莓炭疽病菌的最佳比例選擇1 ∶ 15。

3 討論

綠色防控是一套針對(duì)不同作物和靶標(biāo)，綜合運(yùn)用農(nóng)業(yè)、物理、生物、生態(tài)、化學(xué)等多種技術(shù)手段和途徑進(jìn)行防治的技術(shù)模式，其中探索研究新的高效、低毒和環(huán)境友好型復(fù)配劑是當(dāng)前業(yè)內(nèi)研究的趨勢(shì)和熱點(diǎn)。根據(jù)中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)顯示，四霉素自從2016年被登記以來，目前有6個(gè)復(fù)配產(chǎn)品，春雷霉素、喹啉銅、中生菌素、辛菌胺醋酸鹽、霉靈和已唑醇都參與到四霉素的復(fù)配中來，主要用于防治黃瓜上的細(xì)菌性角斑病和炭疽病，以及水稻上的立枯病、稻曲病及紋枯病。除此之外，有研究發(fā)現(xiàn)，四霉素還能防治茶藨子葡萄座腔菌[9]、辣椒疫霉病菌[10]、蔬菜菌核病菌[11]，此外對(duì)番茄葉霉病[12]、稻瘟病[13]、黃瓜灰霉病[14]等病害也有一定的防治效果和潛力。

丙硫菌唑?yàn)橥庀w，屬于一類新的三唑硫酮?dú)⒕鷦?，與傳統(tǒng)的三唑類殺菌劑相比殺菌譜更廣[15]，且持效期長(zhǎng)，具有更好的殺菌性能。據(jù)報(bào)道，丙硫菌唑?qū)μ液指【鶾16]、小麥赤霉病[17]、梨樹黑星病、褐斑病、白粉病[18] 等也有較好的防治效果。本研究發(fā)現(xiàn)，5種殺菌劑對(duì)草莓炭疽病菌的抑制中濃度最低的是丙硫菌唑，各單劑的活性（EC50）分別為丙硫菌唑（0.036 4 μg/mL）<四霉素（0.296 2 μg/mL）<吡唑醚菌酯（1.101 4 μg/mL）<氟吡菌酰胺（1.362 8 μg/mL）<吡噻菌胺（1.818 8 μg/mL）。本研究發(fā)現(xiàn)，在防治草莓炭疽病菌上，四霉素和丙硫菌唑單劑與吡唑醚菌酯、氟吡菌酰胺及吡噻菌胺相比具有更好的抑菌活性。

生物農(nóng)藥和化學(xué)藥劑復(fù)配具有可以延緩化學(xué)藥劑的抗藥性、降低化學(xué)殺菌劑的施用量、提高生物農(nóng)藥的活性等優(yōu)點(diǎn)，國(guó)內(nèi)業(yè)已有報(bào)道將生物農(nóng)藥與化學(xué)藥劑協(xié)同防治草莓炭疽病。谷春艷等將咪鮮胺與解淀粉芽孢桿菌復(fù)配，發(fā)現(xiàn)二者復(fù)配比例為5 ∶ 5時(shí)，室內(nèi)抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)二者對(duì)草莓炭疽病菌具有顯著的增效作用，防治效果最好，其防效為69.94%，毒性比率為1.432，該復(fù)配劑在田間試驗(yàn)也表現(xiàn)出很好的防治效果，防效達(dá)67.91%，顯著高于單劑的防效，有效地減少了化學(xué)藥劑咪鮮胺的50%用量[19]。姚克兵等研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌DJ-6（2.5 kg/hm2）和減半用量的吡唑醚菌酯（250 mL/hm2）復(fù)配后對(duì)草莓炭疽病和白粉病的防治效果優(yōu)于二者單用[20]。本研究在實(shí)驗(yàn)室離體培養(yǎng)條件下采用Wedley法得出，四霉素和丙硫菌唑殺菌劑按照1 ∶ 15的比例復(fù)配對(duì)草莓炭疽病菌具有顯著增效作用，這將為減少化學(xué)藥劑用量并提高草莓炭疽病防效提供了理論支撐，同時(shí)也為草莓炭疽病的防治藥劑提供了新的選擇，但該結(jié)果在生產(chǎn)條件下應(yīng)用的防治效果還需進(jìn)一步驗(yàn)證。

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