丙硫菌唑原藥中脫硫丙硫菌唑和甲苯的液相色譜通用分析方法研究

張葉明

(上海曉明檢測技術(shù)服務(wù)有限公司，上海 201612)

1 前言

丙硫菌唑，化學(xué)名稱為2-[2-(1-氯環(huán)丙基)-3-(2-氯苯基)-2-羥丙基]-1,2-二氫-3H-1,2,4-三唑-3-硫酮，是一種新型廣譜三唑硫酮類殺菌劑，主要用于谷物、大豆、油菜、水稻、花生、甜菜和蔬菜等，殺菌譜廣。該劑不僅能高效防治小麥赤霉病，而且能有效抑制赤霉病菌產(chǎn)生毒素。同時還表現(xiàn)出良好的保綠防衰作用，增產(chǎn)效果明顯。

脫硫丙硫菌唑是丙硫菌唑產(chǎn)品中的相關(guān)雜質(zhì)，甲苯是殘留溶劑，目前有關(guān)這兩個雜質(zhì)的分析方法有團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CCPIA 026-2020丙硫菌唑原藥，分別采用液相外標(biāo)法測定脫硫丙硫菌唑含量和氣相內(nèi)標(biāo)法測定甲苯含量，但對于同時檢測兩個雜質(zhì)的分析方法尚少報道。本文旨在建立一種可對丙硫菌唑原藥中脫硫丙硫菌唑和甲苯同時進(jìn)行分離和定量的高效液相色譜法。該方法分離效果好，操作簡單快速，適用于丙硫菌唑產(chǎn)品中脫硫丙硫菌唑和甲苯的定量分析。

2 試驗部分

2.1 儀器和試劑 高效液相色譜儀，具可調(diào)波長的DAD檢測器：安捷倫1260液相色譜儀；MS205DU型電子天平；2200T型超聲波清洗儀；Direct 8純水超純水一體機(jī)。

乙腈：色譜純；磷酸：分析純；脫硫丙硫菌唑標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.4%；甲苯標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.9%；試樣：98%丙硫菌唑原藥。

2.2 色譜條件 色譜柱：采用Agilent SB-Aq(150mm × 4.6mm，1.8μm)；檢測波長：216nm；流動相：

流動相時間水(0.05%磷酸)乙腈0.00min475316.00min475316.10min109022.00min109022.10min4753

流速：0.25mL/min；柱溫：30±2 ℃；進(jìn)樣體積：5μL。在上述色譜條件下，甲苯的保留時間約為15.9min，脫硫丙硫菌唑的保留時間約為18.0min。典型的高效液相色譜圖(圖1)。

圖1 丙硫菌唑試樣的高效液相色譜圖

2.3 溶液的配制

2.3.1 標(biāo)樣溶液的配制 分別稱取約0.025g(精確至0.000 01g)脫硫丙硫菌唑標(biāo)樣和約0.05g(精確至0.000 1g)甲苯標(biāo)樣于同一個50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻得標(biāo)樣溶液儲備液。移取0.5mL標(biāo)樣溶液儲備液于25mL容量瓶中，加入乙腈稀釋至刻度，搖勻。

2.3.2 樣品溶液的配制 稱取約0.5g(精確至0.000 1g)丙硫菌唑原藥的樣品于25mL容量瓶中，加入乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.4 測定 在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針脫硫丙硫菌唑(甲苯)峰面積相對變化<10%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

2.5 計算 試樣中脫硫丙硫菌唑(甲苯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X按式(1)計算：

(1)

式中：X—脫硫丙硫菌唑(甲苯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

m1—脫硫丙硫菌唑(甲苯)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

P —脫硫丙硫菌唑(甲苯)標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

m2—試樣的質(zhì)量，g。

3 結(jié)果和討論

3.1 方法與討論

3.1.1 檢測波長的選擇 本方法檢測波長的選擇，參照了T/CCPIA 026-2020[5]中脫硫丙硫菌唑的檢測方法，另外甲苯的紫外光譜圖(圖2)，從圖中可以看出甲苯的最大吸收波長約為206nm，考慮到甲苯的紫外吸收不太強(qiáng)，為提高檢測靈敏度，故選擇210nm為檢測波長，在該波長處干擾較少，同時能夠滿足分析要求。

圖2 甲苯的紫外光譜圖

3.1.2 流動相的選擇 色譜柱選擇常用的Agilent SB-Aq柱，根據(jù)丙硫菌唑的物化性質(zhì)和溶劑的紫外吸收波長，選擇乙腈作為溶劑溶解樣品。以乙腈和水作為流動相，為了得到更好地分離效果，在1 000mL水中加入0.5mL磷酸，使用梯度洗脫的方式，流速選擇0.25mL/min。

3.2 分析方法特異性 試驗采用HPLC-DAD峰純度分析法來鑒別脫硫丙硫菌唑和甲苯。脫硫丙硫菌唑標(biāo)樣、甲苯標(biāo)樣、試樣溶液，它們的HPLC-DAD峰純度均>999，未檢測到不純物，即該分析物處無其它物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。峰純度色譜圖如(圖3～6)。

圖3 標(biāo)樣中脫硫丙硫菌唑的峰純度圖

圖4 標(biāo)樣中甲苯的峰純度圖

圖5 試樣中脫硫丙硫菌唑的峰純度圖

圖6 試樣中甲苯的峰純度圖

3.3 分析方法線性相關(guān)性 按1.3.1標(biāo)樣溶液的配制方法，準(zhǔn)確制備6個質(zhì)量濃度遞增的脫硫丙硫菌唑和甲苯線性相關(guān)溶液。按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的操作步驟進(jìn)行分析，測定線性溶液中脫硫丙硫菌唑和甲苯的峰面積，取2次測定的平均結(jié)果，結(jié)果(表1～2)。以脫硫丙硫菌唑(甲苯)質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而得到脫硫丙硫菌唑和甲苯的線性相關(guān)曲線(圖7～8)。

表1 脫硫丙硫菌唑線性范圍的測定

圖7 脫硫丙硫菌唑峰面積與質(zhì)量濃度線性關(guān)系圖

圖7中，當(dāng)脫硫丙硫菌唑質(zhì)量濃度0.977 9 ～ 39.427 5mg/L，線性回歸方程為y=38.629 2x-0.413 0，相關(guān)系數(shù)R2= 0.999 7，符合要求。

表2 甲苯線性范圍的測定

圖8 甲苯峰面積與質(zhì)量濃度線性關(guān)系圖

圖8中，當(dāng)甲苯質(zhì)量濃度2.002 0 ～ 81.838 1mg/L，線性回歸方程為y = 42.961 6x - 19.427 2，相關(guān)系數(shù)R2= 0.999 6，符合要求。

3.4 分析方法精密度 按1.3.2試樣溶液的制備方法配制6個丙硫菌唑原藥的樣品溶液。在前述色譜操作條件下，對樣品平行測定。脫硫丙硫菌唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.000 5，變異系數(shù)為1.61%(表3)。小于修改的Horwitz公式2(1-0.5logC)×0.67=4.52%，脫硫丙硫菌唑分析方法精密度的測定結(jié)果符合要求。

表3 丙硫菌唑原藥中的脫硫丙硫菌唑精密度實驗結(jié)果

甲苯的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.000 8，變異系數(shù)為0.56%(表4)。小于修改的Horwitz公式2(1-0.5logC)×0.67=3.60%，甲苯分析方法精密度的測定結(jié)果符合要求。

表4 丙硫菌唑原藥中的甲苯精密度實驗結(jié)果

3.5 分析方法準(zhǔn)確度 稱取約0.25g丙硫菌唑的樣品于25mL容量瓶中，再分別移入1.3.1中標(biāo)樣儲備液0.25mL(含脫硫丙硫菌唑約0.125mg、甲苯約0.25mg)，按1.3.2試樣溶液的制備方法配制6個樣品溶液，用作準(zhǔn)確度試驗。在前述操作條件下進(jìn)行測定，脫硫丙硫菌唑平均回收率94.6%，結(jié)果(表5)，具有良好的準(zhǔn)確度。

表5 丙硫菌唑原藥中脫硫丙硫菌唑回收率試驗結(jié)果

甲苯平均回收率102.1%，結(jié)果(表6)，具有良好的準(zhǔn)確度。

表6 丙硫菌唑原藥中甲苯回收率試驗結(jié)果

3.6 分析方法定量限 2.3中線性最低點標(biāo)樣溶液中脫硫丙硫菌唑濃度為0.977 9mg/L，甲苯濃度為2.002 0mg/L，它們的信噪比數(shù)據(jù)分別為10.8和11.9，該溶液濃度可用來計算分析方法的定量限，計算得到脫硫丙硫菌唑定量限為0.005%，甲苯定量限為0.01%。

4 結(jié)論

本文建立了同時測定丙硫菌唑產(chǎn)品中測定脫硫丙硫菌唑和甲苯的分析方法。此方法具有高精密度和高準(zhǔn)確度的特點，其分離效果、線性關(guān)系良好，定量限符合相關(guān)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中相關(guān)雜質(zhì)的限量要求，實驗操作簡便，是進(jìn)行該類產(chǎn)品中相關(guān)雜質(zhì)檢測較理想的分析方法。