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    第29 屆國際生物學(xué)奧林匹克競賽試題

    2021-07-01 03:24:44
    生物學(xué)通報 2021年9期
    關(guān)鍵詞:石竹沖刷切片

    實(shí)驗(yàn)4 植物系統(tǒng)學(xué)、解剖學(xué)和生理學(xué)

    范六民1周 潔2楊 揚(yáng)3張 立4張雁云4

    (1 北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 北京 100871 2 華中師范大學(xué)第一附屬中學(xué) 湖北武漢 430223 3 清華大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 北京 100084 4 北京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 北京 100875)

    中國圖書分類號:G634.915 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:E

    總分:100 分

    時間:90 min

    ●請將你的學(xué)生代碼寫入標(biāo)題頁的方框中。

    ●使用單獨(dú)提供的答題紙回答所有問題。

    ●不會評估寫在試題紙中的答案。

    ●旗幟的使用(桌子上的標(biāo)志),只需將其置于桌子左墻上的旗架上即可。

    ●請確保你可使用所有材料和設(shè)備。如果遺漏任何東西,請在考試開始后5 min 內(nèi)將旗幟放在旗架上。(15 min 后的任何投訴都不會被接受)

    ●如遇緊急情況或問題,請將您的黃旗置于旗架上。

    ●在實(shí)驗(yàn)過程中,任何材料損失都不會額外提供。

    ●在使用此任務(wù)的材料時,請務(wù)必遵守安全說明。

    ●建議你在開始實(shí)驗(yàn)之前閱讀整個實(shí)驗(yàn)流程,以幫助你進(jìn)行時間管理。

    ●在考試結(jié)束時立即停止答題并放下筆。將整個流程與答題紙放在信封中。監(jiān)考人員將收集信封。

    祝你好運(yùn)。

    用自己的字跡,在下表右邊的單元格中寫出左邊提示的數(shù)字。

    1 7

    材料與設(shè)備(注意每項物品的數(shù)量)

    1.顯微鏡;

    2.實(shí)驗(yàn)手套,吸水紙;

    3.移液器(100~1 000 μL)和藍(lán)色吸頭;

    4.薄層層析(TLC)板(5 個板);

    5.鉛筆(1 支);

    6.直尺(1 把);

    7.鑷子(1 支);

    8.薄層層析槽和蓋(1 個);

    9.毛細(xì)管(1 盒);

    10.透明膠帶(1 個);

    11.安全粘貼的解剖刀片(5 支),注意:勿切到手指,握貼有黃色膠帶的一邊;

    12.創(chuàng)可貼(2 片);

    13.酒精片(2 片);

    14.表面皿(5 個);

    15.泡沫(切片用);

    16.載玻片和蓋玻片(5 套);

    17.洗瓶500 mL(1 個);

    18.燒杯1 000mL、50 mL 和25 mL(各1 個);

    19.滴管(1 支);

    20.移液管膠泵(1 個);

    21.吸管10 mL(1 支);

    22.1 mL 注射器(1 支);

    23.pH 試紙;

    24.試管(5 支);

    25.用于NO3測量的溶液1(1 份)(小心);

    26.用于NO3測量的溶液2(1 份);

    27.用于NO3測量的顏色參考比色條(1 份);

    28.用于CaCO3測量的溶液1(1 份);

    29.用于CaCO3測量的溶液2(1 份);

    30.包括有如下物品的架子:

    ●裝有TLC 溶劑(TS∶酒精∶n-丙醇∶蒸餾水比例為2∶2∶1)的Falcon 管;

    ●裝在標(biāo)記為PA~PE 的小管中的提取的花瓣色素;

    ●裝在標(biāo)記為S1~S5 的falcon 管中的土壤提取物;

    ●裝在標(biāo)記為L1~L5 的小管中的葉提取物;

    ●次氯酸鈉溶液(洗滌劑);

    ●染液(甲苯胺藍(lán)O 溶液);

    ●保存在小管中的葉樣品A~E;

    ●裝有氫氧化鉀顆粒的小管(1 支)(小心);

    31.答題紙(2 張,第1 張寫答案,第2 張答題紙標(biāo)記為answer sheet 2 的用于粘貼TLC 板);

    32.綠旗和黃旗。

    介紹

    石竹(Caryophyllales)是雙子葉開花植物的石竹目。這是一個多樣化的目,包括樹木、灌木、藤本植物、紅樹林、多肉植物(莖或葉)、一年生植物,甚至食肉植物。該目植物的許多成員在生態(tài)學(xué)上發(fā)育特化以忍耐極端環(huán)境。在下面的實(shí)驗(yàn)中,將研究5 種石竹目植物響應(yīng)不同生境的生理生態(tài)特征。

    任務(wù)1:石竹中的甜菜素和花青素

    幾乎所有的開花植物都有紅色、藍(lán)色或紫色的花瓣,這些顏色是花青素生物合成途徑的產(chǎn)物。花青素色素在植物的營養(yǎng)組織中起著額外的作用,使其免受紫外線(UV)、食草蟲類和病原菌的攻擊。此外,在石竹目植物中發(fā)現(xiàn)了第2 組彩色的色素,即甜菜素。這2 種類型色素中的其中一種存在于每個科中,它們從未在同一科中被同時發(fā)現(xiàn)。

    將石竹目的5 種植物(植物PA~PE)的花瓣或苞片中提取的色素存于小管(植物A~E)。每種植物屬于1 個科。用實(shí)驗(yàn)流程1 確定每種植物中存在的色素種類。

    實(shí)驗(yàn)流程1:花青素和甜菜素分析

    1.標(biāo)記TLC 板。用鉛筆在每個板的底部上面1 cm 處畫一條水平線(梯形形狀。在前者上方4 cm 處畫另一條線,并將其視為溶劑前沿)。

    2.標(biāo)記TLC 板。用鉛筆在層析板的頂部用字母A~E(英文字母順序)對5 個TLC 板進(jìn)行標(biāo)記。

    3.取少量溶液。使用前搖動管子。用毛細(xì)管取出適量的色素提取物,在板上點(diǎn)樣。

    4.在板子上點(diǎn)樣。如圖1 所示,在每個獨(dú)立的TLC 板上沿水平線輕輕點(diǎn)每個提取物(樣點(diǎn)半徑應(yīng)為約0.2 cm)。對每種提取物重復(fù)點(diǎn)樣,以將色素濃縮于TLC 板上(約3 次)。最好在每次點(diǎn)樣前讓TLC 板保持干燥。

    圖1

    5.準(zhǔn)備TLC 槽。將溶劑(Falcon TS)倒入槽中(注意:將板放入槽中時,溶劑水平應(yīng)低于這些樣點(diǎn)位置)。用蓋子蓋住槽,等待越5 min,使溶劑相與氣相平衡。

    6.運(yùn)行色譜。當(dāng)TLC 板上的樣點(diǎn)干燥時,輕輕地迅速(必須保持溶劑/氣體平衡)用鑷子將TLC 板放入溶劑槽中,剛好放在溝槽中,使每個板的點(diǎn)過樣的一端置于底部(注意:將所有板同時放入TLC 槽內(nèi)的溝槽中)。將板的底邊浸沒在溶劑中。再次蓋上層析槽的蓋子。等待直至溶劑到達(dá)溶劑前沿線。

    7.取下板子。用鑷子小心地2 從槽中取出TLC 板。

    8.等溶劑從板上揮發(fā)。

    9.固定。在板上粘上透明膠,防止色素?fù)p失,將你的TLC 板貼到answer sheet 2(答題紙2)上,溶劑前沿應(yīng)該朝上。注意:一旦完成后,將綠旗放到旗架上。

    10.計算阻滯系數(shù)(Rf)。Rf是條帶移動距離與溶劑移動距離的比值。用每條帶的中間測量移動的距離(圖2)。注意:Rf≤0.060 代表花青素,Rf≥0.070 代表甜菜素。

    圖2

    問題1.在答題紙上用“√”表示植物A~E 中存在花青素或甜菜素。同時寫入相關(guān)的Rf值(僅顯示小數(shù)點(diǎn)的2 位數(shù),略去其他位數(shù))。

    請將綠旗放在旗架上,交答題紙2。

    任務(wù)2:石竹目植物的生理生態(tài)特征

    有5 種土壤沖刷液,標(biāo)記為Falcons S1~S5。還有5 種葉提取物(小管L1~L5)。

    注意:5 個土壤沖刷液(S1~S5)對應(yīng)于5 個葉提取物(L1~L5),但尚不知道哪個土壤沖刷液屬于哪個植物(植物A~E)。

    通過執(zhí)行實(shí)驗(yàn)流程2.1~2.3,測量土壤沖刷樣品的CaCO3和硝酸鹽濃度,以及土壤沖刷液和植物葉提取物的pH 值。

    注意:葉提取物是在黎明時制備的。

    實(shí)驗(yàn)流程2.1:測量土壤中CaCO3的含量

    為了研究土壤中所有鹽的總濃度,通過容量測定法測量土壤沖刷液中CaCO3的含量。“用于CaCO3測量的溶液1”含有當(dāng)混合物中沒有游離Ca2+時變?yōu)樗{(lán)色的指示劑?!坝糜贑aCO3測量的溶液2”含有化合物X(4 mM),其與Ca2+離子形成1∶1 復(fù)合物。

    1.向燒杯中加入10 mL 土壤沖刷液(如果有必要,在此步驟前用蒸餾水清洗燒杯)。

    2.加入2 滴“用于CaCO3測量的溶液1”并混合。如果溶液為藍(lán)色,則CaCO3濃度≤1 mg/L;如果溶液為紅色,則繼續(xù)進(jìn)行下一步。

    3.用注射器向混合物中加入“用于CaCO3測量的溶液2”,直至顏色變?yōu)樗{(lán)色為止。添加溶液的同時搖動燒杯。在答題紙的問題2:表1 處,寫下消耗的“用于CaCO3測量的溶液2”的體積和土壤沖刷液的Ca2+濃度(Ca 的摩爾質(zhì)量為40 g/mol)。

    實(shí)驗(yàn)流程2.2:測定硝酸鹽的含量

    用一個試劑盒測定土壤沖刷液中硝酸鹽的含量。此試劑盒的使用說明如下:

    1. 將1 mL 土壤沖刷液樣品倒入25 mL 或50 mL 的燒杯中。

    2.小心加入20 滴“用于NO3測量的溶液1”,然后加入蒸餾水至總體積為10 mL。

    3.請小心地用手套和鑷子,挑取2 個KOH 顆粒并將其溶解在上述混合物中。

    4.添加幾滴“用于NO3測量的溶液2”,將出現(xiàn)黃色。

    5.繼續(xù)逐滴添加“用于NO3測量的溶液2”,搖勻,直至黃色穩(wěn)定。

    6.將約5 mL 混合物轉(zhuǎn)移至試管中,并將其顏色與參考條顏色進(jìn)行比較,以測量NO3濃度。將結(jié)果記錄在答題紙的問題2:表1 中。

    實(shí)驗(yàn)流程2.3:測量pH 值

    測量土壤沖刷液及葉提取物的pH 值:

    將1 條pH 試紙放入樣品中,幾秒鐘后將其取出。并甩動試紙條去除多余的溶液。

    確定顏色與參考條的哪個pH 值的顏色匹配,并在答題紙問題2:表1 中記錄相應(yīng)的pH 值。

    根據(jù)獲得的結(jié)果,在答題紙上回答問題2:表2 中。

    任務(wù)3:C3、C4 和CAM 光合作用途徑的鑒定

    在不同科的石竹屬植物中,存在所有3 種類型的光合作用機(jī)制。在此項任務(wù)中,你應(yīng)該確定每種植物的光合作用途徑。

    你可用流程3制備橫切片。請注意:制備橫切片本身不給分,但你還是需要制備橫切片回答任務(wù)4。

    實(shí)驗(yàn)流程3:橫切片的制備

    1.使用刀片和泡沫片,小心地用預(yù)先固定的葉(小管A~E 中)徒手制備橫切片。將切片存放在表面皿或載玻片上的水中。

    2.將“次氯酸鈉”(清洗劑)加到切片上。

    3.至少3 min 后去除清洗劑。

    4.用水清洗切片(3 次)以除去清洗劑。

    5.用“甲苯胺藍(lán)O”溶液染色切片(注意:在用前,稀釋“甲苯胺藍(lán)O”溶液20 倍)。

    6.1 min 后,用水清洗切片。

    7.將切片置于載玻片上。滴一滴水,然后用蓋玻片蓋上,在光學(xué)顯微鏡下觀察。

    8.根據(jù)任務(wù)2 和任務(wù)3 的結(jié)果,在答題紙的問題3:表1 中,用“√”表示每種植物的光合作用類型。

    任務(wù)4:石竹目植物的晶體類型

    草酸鈣晶體分布在石竹目的許多成員中。這些植物能大量地積累晶體。植物中形成草酸鈣晶體的主要功能包括高容量鈣調(diào)節(jié)和防止食草蟲類的侵襲。晶體以特定的形狀和尺寸形成。晶體形態(tài)是物種特異性的,并且傳統(tǒng)上用于鑒別石竹目中的種和屬。

    用你在上一個任務(wù)中制備的葉的橫切片,鑒別植物A~E 中的晶體類型。下圖顯示了常見晶體類型的形狀。

    圖3 不同類型的草酸鈣晶體

    問題4:

    A.在答題紙上,用“√”和“×”分別指出植物A~E 中每種晶體類型存在與否。

    B. 假設(shè)在鹽生植物中有大量的棱柱狀的晶簇,土壤沖刷液3 屬于植物D,確定哪個土壤(S1~S5)屬于哪個植物(A~E)。填寫到答題紙上的問題4:表2 中。

    任務(wù)5:繪制最大簡約發(fā)育樹

    最大簡約法(maximum parsimony)是一種重建系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的系統(tǒng)發(fā)育方法。在這種方法中,將使用變化的次數(shù)及權(quán)重評估每個樹。最好的樹是具有最小進(jìn)化變化的樹。基于下表畫出的推定的分類群W~Z 的2 個樹如圖4 所示。在此例子中,“樹2”由于分?jǐn)?shù)較低而優(yōu)于“樹1”。

    圖4

    Ni是樹中性狀i的變化次數(shù),Wi是性狀i的權(quán)重。

    下表顯示了假定分類群P ~T 在系統(tǒng)發(fā)育上的重要性狀。

    注意:表中的數(shù)據(jù)與你在前面部分中獲得的數(shù)據(jù)不匹配。

    性狀I(lǐng) V植物(色素)II(晶簇)III(針晶體)IV(花粉粒)(花冠聯(lián)合)VI(花被輪)VII(葉序)P Q R S T 外群權(quán)重0 1 0 0 0 0 2 1 1 0 0 1 0 2 1 0 1 0 1 0 4 1 1 1 1 1 0 3 0 1 1 0 1 0 2 1 0 0 0 1 0 2 0 1 1 1 0 0 1

    下表列出了這些性狀的狀態(tài)。

    性狀I(lǐng)(色素)II(晶簇)III(針晶體)IV(花粉粒)V(花冠聯(lián)合)VI(花被輪)VII(葉序)狀態(tài)0花青素狀態(tài)1甜菜素?zé)o無有有光滑表面花瓣離生1輪互生或蓮座叢粒狀表面花瓣合生2輪或以上對生

    問題5:根據(jù)上表中的性狀及其權(quán)重,在答題紙上繪制最大簡約發(fā)育進(jìn)化樹并計算其得分。

    注意:在樹中放置衍征(由祖先特征演化而來的、但表型不同的特征)不是必需的,不計分。

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