基于血管活性因子特性探討從脾論治ITP止血機制

王珺 張雅月 王佳 王沖 陳科 陳信義 郎海燕

摘要 目的：基于血管活性因子特性探討“從脾論治”ITP療效機制。方法：以被動型免疫造模法建立ITP小鼠模型，以強的松、健脾益氣方、健脾益氣攝血方、歸脾湯為干預藥物，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測模型小鼠血清ET-1、NO、NOS3、TXA2、PGI2、vWF、VCAM-1、TM含量。結果：1）升血小板療效：與正常對照組比較，注射APS后各組小鼠外周血PLT計數明顯下降（P<0.01）;與模型對照組比較，給藥第8天各組小鼠外周血PLT計數明顯升高（P<0.01）。2）止血療效：給藥前除正常對照組外，實驗各組均有不同程度出血傾向;給藥第6天、第8天，與模型對照組比較，實驗各組出血分級下降（P<0.01）。3）血管促凝因子：與正常組比較，各組ET-1檢測值明顯下調（P<0.01）;與正常對照組、模型對照組比較，實驗各組TXA2檢測值明顯上調（P<0.01）;與正常組比較，實驗各組vWF檢測值明顯下調（P<0.01）;與正常對照組比較，實驗各組VCAM-1檢測值明顯下調（P<0.01）。4）血管抗凝因子：與正常組比較，實驗各組NO檢測值明顯下降（P<0.01）;除歸脾湯組外，與正常對照組比較，各組NOS3檢測值顯示明顯下調（P<0.05）;與正常對照組比較，實驗各組PGI2檢測值明顯下調（P>0.01）;與正常對照組比較，實驗各組TM檢測值明顯下調（P>0.05）。結論：從脾論治方升高ITP模型小鼠外周血PLT計數以及有效止血與上調血管促凝因子TXA2、VCAM-1，下調PGI2、TM檢測值，平衡促凝與抗凝因子密切相關。

關鍵詞 脾主統(tǒng)血;脾不統(tǒng)血證;從脾論治;健脾益氣攝血方;免疫性血小板減少癥;血管活性因子;血管促凝因子;血管抗凝因子

Hemostatic Mechanism of “Treated From Spleen” Therapy on ITP Based on the Characteristics of Vasoactive Factors

WANG Jun1，ZHANG Yayue2，WANG Jia3，WANG Chong2，CHEN Ke4，CHEN Xinyi2，LANG Haiyan5

（1 The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310006，China; 2 Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100700，China; 3 Henan Cancer Hospital，Zhengzhou 450008，China; 4 Shunyi Hospital，Beijing Traditional Chinese Medicine Hospital，Beijing 101300，China; 5 Dongfang Hospital，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100078，China）

Abstract Objective：To explore the ITP hemostatic mechanism of “treating from spleen” therapy based on the characteristics of vasoactive factors.Methods：The ITP mouse model was established by passive immunomodeling method.The prednisone，Jianpi Yiqi Formula，Jianpi Yiqi Shexue Formula and Guipi Decoction were used as intervention drugs.The content of serum ET-1，NO，NOS3，TXA2，PGI2，VWF，VCAM-1 and TM of the model mice were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.Results：1）Therapeutic effect of platelet enhancement：compared with normal control group，PLT count in peripheral blood of mice in each group was significantly decreased after APS injection （P<0.01）; compared with model control group，PLT count in peripheral blood of mice in each group was significantly increased on the 8th day of injection （P<0.01）.2）Hemostasis effect：except for the normal control group，all experimental groups had bleeding tendency to a greater or lesser extent before injection; compared with model control group，the grade of bleeding in experimental groups decreased on the 6th and 8th day of administration （P<0.01）.3）Vascular coagulation factor：compared with normal group，ET-1 detection value in each group was significantly decreased （P<0.01）; compared with normal control group and model control group，TXA2 detection values in experimental groups were significantly increased （P<0.01）.Compared with normal group，VWF detection values in experimental groups were significantly down-regulated （P<0.01）.Compared with normal control group，VCAM-1 detection value in experimental groups was significantly reduced （P<0.01）.4）Vascular anticoagulant factor：compared with normal group，NO detection value in experimental groups was significantly decreased （P<0.01）; Compared with normal control group，NOS3 values in all groups were expressively reduced （P<0.05） except for Guipi Decoction group.Compared with normal control group，PGI2 detection value in experimental groups was significantly cut down （P<0.01）.Compared with normal control group，TM detection values in experimental groups were greatly reduced （P>0.05）.Conclusion：PLT count in peripheral blood of ITP model mice from the treatment of spleen theory is increased，and effectively hemostasis is taken，which has a close correlation between increasing TXA2 and VCAM-1，PGI2 and TM detection values are decreased，and balancing pro-coagulation and anticoagulation factors.

Keywords Spleen governing blood; Splenic failure in controlling blood; Treating from spleen therapy; Jianpi Yiqi Shexue Decoction; Immune thrombocytopenia; Vasoactive factor; Vascular coagulation factor; Vascular anticoagulant factor

中圖分類號：R242;R558+.2文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.03.003

免疫性血小板減少癥（Immune Thrombocytopenia，ITP）是臨床常見的血液系統(tǒng)出血性疾病，主要臨床表現(xiàn)為皮膚、黏膜、牙齦、鼻黏膜出血，尿血、便血或月經過多，或月經期長。嚴重者可有內臟出血。目前，對ITP發(fā)病機制尚不完全清晰，公認的發(fā)病機制是多因素導致的自身免疫功能紊亂[1-2]。按照中醫(yī)理論，結合慢性ITP臨床特征，其發(fā)病是由于脾氣虛弱，不能統(tǒng)攝血液而致[3]。因此，“從脾論治”是ITP的基本原則[4-5]。我們在前期臨床與實驗研究基礎上，采用被動免疫造模法復制了ITP動物模型[6-8]，以模型小鼠外周血血小板（Platelet，PLT）計數、出血程度分級與血清內皮素-1（Endothelin-1，ET-1）、血栓素A2（Thromboxane A2，TXA2）、一氧化氮（Nitric Oxide，NO）、一氧化氮合酶NOS3（Nitric Oxide Synthase 3，NOS3）、前列環(huán)素（Prostacyclin，PGI2）、血栓調節(jié)蛋白（Thrombomodulin，TM）、血管性血友病因子（von Willebrand Factor，vWF）、血管內皮細胞血管細胞黏附分子1（Vascular Cell Adhesion Molecule1，VCAM1）為檢測指標。試圖從血管活性因子特性角度探索“從脾論治”治療ITP出血效應機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 豚鼠，100只，雌雄各半，體質量250 g，許可證號：SCXK（陜）2012-001，購于陜西省興平市天瑞實驗動物養(yǎng)殖場，普通環(huán)境飼養(yǎng)，室溫20～25 ℃，相對濕度50%～60%;BALB/c小鼠，280只，雌雄各半，體質量18～22 g，許可證號：SCXK（陜）2014-002，購于中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學實驗動物中心，SPF級動物實驗室飼養(yǎng)，室溫20～25 ℃，相對濕度50%～60%。其中，160只用于APS制備，120只用于造模并進行療效機制研究（倫理審批號：XYLS2019069）。

1.1.2 藥物 實驗用中藥浸膏由西安星華藥物研究所按照中藥新藥藥學標準制備并提供，包括：健脾益氣攝血浸膏（黃芪、黨參、茯苓、白術、阿膠、茜草、炙甘草）;健脾益氣浸膏（黃芪、黨參、茯苓、白術、炙甘草）;歸脾湯浸膏（人參、白術、當歸、茯苓、黃芪、龍眼肉、遠志、炒酸棗仁、木香、炙甘草）。強的松（上海晶純生化科技股份有限公司，貨號：P116562）。

1.1.3 試劑與儀器 對硝基苯磷酸二鈉（上海晶純生化科技股份有限公司，貨號：P118471）;完全弗氏佐劑（Sigma-Aldrich，美國，批號：SLBF2619V）、不完全弗氏佐劑（Sigma-Aldrich，美國，批號：SLBH7317V）;凍干酶聯(lián)A蛋白（博士德生物，批號：BST07A19B80）;疊氮化鈉（派尼化學試劑廠，批號：20140515）;明膠、吐溫（科昊生物工程有限責任公司，批號：201409）;小鼠血清ET-1、NO、NOS3、TXA2、PGI2、vWF、VCAM-1、TM試劑盒（武漢基因美生物科技有限公司，批號：201411）。微量高速離心機（長沙湘儀，H1650-W型）;全波長酶標儀（Thermo Fisher，美國，型號：Multiskan GO型）;全自動動物血液分析儀（普朗，型號：XFA6130型）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 從120只小鼠尾靜脈取血，用全自動血液分析儀檢測血小板計數，并隨機分為6組，每組20只，分別為正常組、模型組、強的松組、歸脾湯組、健脾益氣組和健脾攝血組。按照經典被動免疫造模法制備抗小鼠血小板血清。制備步驟如下：160只BALB/c小鼠麻醉取抗凝全血，梯度離心（1 100 r/min，10 min;3 000 r/min，10 min，離心半徑：6 cm）得到血小板，用PBS洗滌2次，重懸，計數，調整濃度至2.5×106/mL，與等量完全弗式佐劑和不完全弗式佐劑分別混合均勻做抗原。含完全弗式佐劑抗原于0周注射于豚鼠足掌、背及皮下，共5點，合計1 mL;含不完全弗式佐劑抗原分別于1、2、4周按上述相同部位、點數、劑量注射。第5周從豚鼠心臟取不抗凝全血，靜置后，離心分離獲得豚鼠抗小鼠血小板血清（GP-APS）。置于56 ℃水浴30 min滅活，紅細胞吸附，用生理鹽水稀釋成1∶4濃度備用。分離所得小鼠血小板用PBS洗滌3次，并調整濃度至6×104/μL。取50 μL血小板懸液加入酶標孔中，以560×g離心13 min。加入緩沖液（0.2%明膠，0.1%疊氮化鈉，0.5%吐溫，0.15 mol/LPBS）于4 ℃孵育過夜，洗滌。加入50 μL待測血清，37 ℃孵育1 h，洗滌。加入100 μL酶聯(lián)A蛋白，于22 ℃孵育45 min，洗滌4次，加入200 μL對硝基苯磷酸二鈉（溶于二乙醇胺緩沖液中，濃度1.5 mg/mL），于37 ℃孵育30 min，加入50 μL的1N氫氧化鈉中止反應。用酶標儀在405 nm波長下測定OD值。

1.2.2 給藥方法 除正常組按100 μL/20 g生理鹽水腹腔注射外，實驗各組按100 μL/20 g劑量注射APS，1次/d至實驗結束。注射APS第8天，除模型組外，其余各組均按照0.1 mL/10 g體積灌胃給藥，實驗結束后進行各項指標檢測。

1.2.3 檢測指標與方法

外周血PLT計數檢測：注射APS前、注射后48 h、第8天（開始給藥）、第12天、第15天，分別從造模小鼠尾靜脈取血，用全自動血液分析儀檢測模型小鼠外周血血小板計數。

出血程度分級觀察：參照2010年衛(wèi)生部醫(yī)政司發(fā)布的《免疫性血小板減少性紫癜臨床路徑》[9]，結合動物實驗特點，將出血程度分4級。1）0級：無出血現(xiàn)象。2）Ⅰ級：注射部位輕度出血，其他部位有散在出血點。3）Ⅱ級：注射部位明顯出血，并見有其他部位瘀斑、瘀點。4）Ⅲ級：注射部位嚴重出血，皮膚大量瘀斑、瘀點，或皮膚發(fā)黑或破潰。注意在觀察出血程度時，要以出血面積與出血點密集程度描述，并關注出血部位、出血開始時間、止血時間、出血色澤、形狀等。觀察時間點為注射GP-APS第8天（用藥前）、注射GP-APS第14天（用藥第6天）、注射GP-APS第16天（實驗結束）3個時間點動態(tài)觀察出血分級變化。

血管活性因子檢測：實驗結束后，各組隨機取12只小鼠斷頸處死，腹主動脈血，靜置后離心，收集血清，按照酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒說明書方法進行各項指標檢測。其中，6只小鼠血清用于血管促凝活性因子（ET-1、TXA2、vWF、VCAM-1）檢測;6只小鼠血清用于血管抗凝活性因子（NO、NOS3、PGI2、TM）檢測。用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算相應樣品濃度。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件進行數據分析，其中計數資料以（%）表示，采用χ2檢驗，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 抗血清效價測定

用酶標儀在405 nm波長下測定OD值，APS血清組OD值平均為0.300，空白孔OD值平均為0.163，相差約2倍（P<0.01），證明血清效價正常[4]。

2.2 外周血小板檢測

分別從120只小鼠尾靜脈取血，按比例稀釋后，用全自動動物血液分析儀檢測外周血小板計數，結果見表1。

從表1可以看出：1）注射APS前，各組小鼠外周血PLT計數組間比較，經t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。2）注射APS后48 h至第8天，實驗各組小鼠外周血PLT計數與正常組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。表明已經成功建立血小板減少模型。3）注射APS第8天（開始給藥）到12天，實驗各組小鼠外周血PLT計數與正常組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。證明實驗小鼠外周血PLT計數依然處于低水平。4）注射后第15天（給藥第8天），模型組小鼠外周PLT計數與正常組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），仍處于低水平。給藥各組小鼠外周PLT與正常組比較，經t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），證明實驗藥物可明顯提高實驗小鼠外周PLT計數。其中，強的松對照、健脾攝血組與歸脾湯對照組、健脾益氣組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。表明強的松對照、健脾攝血組提升造模小鼠外周血PLT具有明顯優(yōu)勢。

2.3 出血程度分級觀察

按照觀測時間點，以出血分級標準，每組隨機觀察10只小鼠出血分級變化，結果見表2。

對表2進一步分析表明：1）注射APS第8天，除正常對照組外，實驗各組出血程度組間比較，經χ2檢驗，P=0.998，具有可比性。說明注射GP-APS后各組小鼠均有不同程度出血傾向。2）注射APS第8天開始給藥，藥物干預第6天，各組出血等級明顯下降，與模型對照組比較，經χ2檢驗，具有統(tǒng)計學意義（P=0.014）。下降幅度從大到小依次為強的松組（P=0.002）、健脾益氣攝血組（P=0.003）、歸脾湯對照組（P=0.003）、健脾益氣組（P=0.021）。藥物干預各組組間比較，經χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。3）藥物干預第8天，各組出血等級明顯下降，與模型對照組比較，經χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.000）。出血等級下降幅度從大到小依次為強的松組（P=0.000）、健脾攝血組（P=0.000）、歸脾湯對照組（P=0.001）、健脾益氣組（P=0.001）。藥物干預各組組間比較，經χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.4 血管促凝活性因子檢測

血管促凝活性因子包括血管收縮與促凝血因子，檢測結果見表3。

對表3結果分析如下：1）ET-1：實驗各組與正常組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），顯示檢測值明顯下降。2）TXA2：實驗各組與正常對照組、模型對照組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;組間比較，經t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。3）vWF：實驗各組與正常組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），顯示檢測值明顯下降。4）VCAM-1：實驗各組與正常對照組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;從脾論治各組強的松組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;組間比較，經t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.5 血管抗凝活性因子檢測

血管抗凝活性因子包括血管舒張與抗凝血因子，檢測結果見表4。

對表4結果分析如下：1）NO：實驗各組與正常組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），顯示檢測值下降;組間比較，經t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。2）NOS3：除歸脾湯組外，各組檢測值與正常對照組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），顯示檢測值下降;組間比較，經t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。3）PGI2：健脾

各組與正常對照組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P>0.01）;組間比較結果顯示，健脾益氣攝血組與模型對照組、強的松對照組、健脾益氣組、歸脾湯組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。4）TM：實驗各組與正常對照組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。健脾益氣組、健脾益氣攝血組與模型對照組、強的松對照組歸脾湯對照組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

3 討論

從骨髓巨核細胞分化產生的血小板具有凝血/止血與修復破損的血管內皮細胞等多種功能。血小板表面糖衣能吸附血漿蛋白和凝血因子Ⅲ，血小板內顆粒內含有與凝血相關的物質。當血管受損害或破裂時，就會刺激血小板由靜止相變?yōu)闄C能相，急速發(fā)生變形，表面黏度增大，凝聚成團。同時，在血小板表面第Ⅲ因子作用下，使血漿內凝血酶原變?yōu)槟福执呋w維蛋白原變成絲狀纖維蛋白，與血細胞共同形成凝血塊以止血。同時，血小板顆粒物質釋放，則進一步促進凝血/止血。血小板具有保護血管內皮細胞、參與內皮細胞修復等功效。因此，當患者外周血小板計數低于50×109/L則有出血發(fā)生的風險[10]。說明ITP出血與患者外周血PLT數量及其質量密切相關。在臨床實際中，許多ITP特別是慢性ITP患者，雖然外周血PLT計數低于50×109/L，甚至低于安全水平（30×109/L），但出血傾向并不明顯。有些患者經相關治療后外周血PLT依然處于較低水平，可出血癥狀并不明顯。顯然ITP患者外周血PLT減少并不是出血的唯一因素。很可能是參與凝血機制多個環(huán)節(jié)共同作用的結果。其中，血管及其血管分泌的活性因子發(fā)揮著至關重要的作用[11]。血管是生物體運送血液的管道，除維持血液與組織間物質交換外，正常血管中存在大量的活性物質，以控制血管生理狀態(tài)。特別是血管內皮細胞是分泌、合成和釋放血管活性物質的重要場所，這些活性物質具有舒縮血管、調控血管張力與促進血液凝固的多重效果。

舒張血管活性因子與抗凝機制關系密切，主要包括：1）前列腺素：前列腺素（Prosta Glandin，PG）及其代謝后的衍生物如前列環(huán)素（Prostaglandin，PGI2）。其對血液凝固作用主要是導致血管舒張，抑制血小板聚集與調節(jié)血小板活化[12]。2）一氧化氮與一氧化氮合酶3：一氧化氮（Nitric Oxide，NO）與一氧化氮合酶3（Nitric Oxide Synthase-3，NOS3）主要作用于平滑肌細胞，使其松弛，擴張血管，并會很快滲透出細胞膜擴散進入血液，作用于血小板細胞，并降低血小板活性，抑制其凝集和向血管內皮黏附[13]。3）血栓調節(jié)蛋白：血栓調節(jié)蛋白（Thrombomodulin，TM）是使凝血酶由促凝轉向抗凝的重要血管內凝血抑制因子，主要是調節(jié)機體凝血與抗凝血動態(tài)平衡[14]。

收縮血管活性因子與凝血機制密切相關，主要包括：1）血管內皮素：血管內皮素（Endothelin，ET）是調節(jié)心血管功能的重要因子，對維持血管張力與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)起重要作用。其中，血管內皮素1（Endothelin-1，ET-1）是迄今為止發(fā)現(xiàn)作用最強的縮血管因子，可引起的血管特別是微小血管收縮有利于血液凝固和止血[15]。2）血栓素A2：血栓素A2（Thromboxane，TXA2）是一強血管收縮因子，可以激活血小板、使其聚集，有利于修復組織損傷和止血[16]。3）血管性血友病因子：血管性血友病因子：（von Willebrand Factor，vWF）是一種有黏附性的多聚體糖蛋白。與血小板膜GPⅠb-Ⅸ復合物及細胞內皮下膠原結合，介導血小板在血管損傷部位黏附以及與因子凝血因子Ⅷ結合來有效止血[17]。此外，vWF也能結合GPⅡb-Ⅲa，參與血小板聚集過程。4）血管內皮細胞黏附分子-1：血管內皮細胞黏附分子-1（Vascular Cell Adhesion Molecule1，VCAM1）是一種細胞黏附分子，主要參與細胞之間、細胞與細胞外基質之間相互作用。其活性降低會導致血管通透性增加，組織缺血與缺氧，增加血液外滲[18]。

控制血管張力的舒縮活性因子是一對矛盾的統(tǒng)一體。一般認為，血管舒張活性因子具有抗凝效應，既是預防血栓形成的關鍵因子，也是影響血液凝固/止血的重要物質;血管收縮活性因子具有促進凝血效應，既是血栓形成的危險因素，也是促進血液凝固/止血的關鍵。二者的動態(tài)平衡在不同的疾病中擔當不同角色。當機體發(fā)生血小板減少特別是免疫性血小板減少癥，紊亂的免疫機制可導致血管內皮細胞損傷，血管分泌、合成和釋放血管活性因子比例失調，直接或間接影響了血管舒縮與凝血功能。因此，有效的調節(jié)血管舒縮活性因子，能在ITP患者低血小板數值情況下，預防出血風險或達到止血效果。有基于此，我們在臨床實踐中，確立了“從脾論治”ITP的重要治則[19]，擬定了“從脾論治”的健脾益氣攝血方。前期臨床試驗證明，該方可明顯提升ITP患者外周血PLT計數，改善出血與相關臨床癥狀[20-21]。動物實驗也證實，該方能夠提升模型小鼠外周血PLT計數與良好的止血效果[22-25]，并明確了部分效應機制[26-28]。為進一步探討“從脾論治”ITP療效機制，我們以健脾益氣攝血方（四君子湯加炙黃芪、阿膠、茜草）為標準觀察藥物，選擇健脾益氣方（四君子湯加炙黃芪）、歸脾湯原方為“從脾論治”方，觀察三方對ITP動物模型外周血PLT計數、出血程度分級與血管活性因子影響。研究結果顯示：1）升血小板療效：注射APS后48 h至第8天（給藥時間點），與正常對照組比較，實驗各組小鼠外周血PLT計數明顯下降，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;給藥第8天與模型對照組比較，實驗各組小鼠外周血PLT計數明顯升高，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。其中，強的松對照、健脾攝血組與歸脾對照、健脾益氣組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。證明強的松對照、健脾攝血組提升造模小鼠外周血PLT具有明顯優(yōu)勢。2）止血療效：注射APS第8天（給藥時間點），除正常對照組外，實驗各組均有不同程度出血傾向;藥物干預第6天、第8天，與模型對照組比較，實驗各組出血分級明顯下降，經χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.014、P=0.000）。下降幅度從大到小依次為強的松組（P=0.002、0.000）、健脾益氣攝血組（P=0.003、0.000）、歸脾湯對照組（P=0.003、0.001）、健脾益氣組（P=0.021、0.001）。各組組間比較，經χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。3）血管促凝因子：ET-1：實驗各組ET-1檢測值與正常組比較明顯下調，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;TXA2檢測值與正常對照組、模型對照組比較明顯上調，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;vWF檢測值與正常組比較明顯下調，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;VCAM-1檢測值與正常對照組比較明顯下調，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），從脾論治各組與強的松對照組、模型對照組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），表明從脾論治各組有提升VCAM-1優(yōu)勢。4）血管抗凝因子：實驗各組NO檢測值與正常組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），顯示檢測值下降;組間比較，經t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;除歸脾湯組外，各組NOS3檢測值與正常對照組比較顯示明顯下調，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），組間比較，經t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;健脾各組PGI2檢測值與正常對照組比較明顯下調，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P>0.01）;組間比較結果顯示，健脾益氣攝血組與模型對照組、強的松對照組、健脾益氣組、歸脾湯組比較，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P>0.05）;TM檢測值與正常對照組比較明顯下調，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。健脾益氣組、健脾益氣攝血組與模型對照組、強的松對照組、歸脾湯對照組比較下降明顯，經t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論認為，“從脾論治”方除具有升高ITP模型小鼠外周血PLT計數、降低出血分級效果外，上調血管促凝因子TXA2、VCAM-1，下調下調PGI2、TM檢測值，平衡促凝與抗凝活性因子的動態(tài)平衡可能是有效止血機制之一。

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（2021-01-05收稿 責任編輯：徐穎）