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    綠原酸對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能、空腸結(jié)構(gòu)與抗氧化的影響

    2021-06-19 02:34:18劉靜慧徐美利牛志平劉亞娟陳寶江
    中國(guó)畜牧雜志 2021年6期
    關(guān)鍵詞:隱窩綠原消化率

    劉靜慧,李 沖,徐美利,牛志平,劉亞娟,陳寶江*

    (1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,河北保定 071000;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所,北京 100081;3.晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司,河北邯鄲 057250;4.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)山區(qū)研究所,河北保定 071001;5.河北省山區(qū)農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究中心,河北保定 071001)

    中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第194 號(hào)文件宣告,退出除中藥外的所有促生長(zhǎng)類藥物飼料添加劑品種,飼料生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)含有促生長(zhǎng)類藥物飼料添加劑的商品飼料??股靥娲罚绕涫侵参锾崛∥锍蔀檠芯繜狳c(diǎn)。綠原酸(Chlorogenic Acid)是由咖啡酸(Caffeic Acid)與奎尼酸(Quinic Acid)生成的縮酚酸,是植物有氧呼吸過程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物,其廣泛存在于多種植物中,在金銀花、杜仲中含量較高。綠原酸具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、保肝利膽、抗腫瘤等多種生物活性[1],在動(dòng)物生產(chǎn)中有一定應(yīng)用。賴星等[2]報(bào)道,綠原酸和橙皮苷能顯著提高仔豬的生長(zhǎng)性能,其中綠原酸具有抗菌、抗炎和抗氧化作用,并能參與維持腸道微生物多樣性。李乃順等[3]報(bào)道,在草魚飼糧中添加綠原酸能顯著提高草魚的生長(zhǎng)性能和非特異性免疫功能,改善草魚的肌肉品質(zhì)。綠原酸在兔生產(chǎn)中的研究報(bào)道較少,因此,本試驗(yàn)旨在研究不同水平綠原酸對(duì)伊拉肉兔生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、腸道結(jié)構(gòu)形態(tài)及其抗氧化性能的影響,為其在兔生產(chǎn)中的進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供科學(xué)參考。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料 綠原酸(有效含量≥80%)由晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司提供,由甜葉菊提取,有效成分為3,5-二咖啡?;G原酸和4,5-二咖啡?;G原酸。

    1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)日糧 選擇35 日齡的斷奶伊拉兔72 只,體重(950±25)g,公、母各半,隨機(jī)分為6 個(gè)處理組,每組12 個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)1 只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,抗生素組在基礎(chǔ)飼糧中添加18.80 mg/kg 桿菌肽鋅和15.51 mg/kg 喹烯酮,綠原酸組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加500、1 000、2 000、3 000 mg/kg 綠原酸。基礎(chǔ)飼糧參照谷子林[4]推薦的兔營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行配制,飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

    表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分(風(fēng)干基礎(chǔ))

    1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在河北農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧教學(xué)基地進(jìn)行,試驗(yàn)前對(duì)兔舍和籠具進(jìn)行清理和消毒,采用育成兔三層階梯式金屬籠單獨(dú)飼養(yǎng),對(duì)每只兔籠進(jìn)行單獨(dú)編號(hào),自然通風(fēng)和光照,試驗(yàn)期間平均溫度23℃,平均濕度55%,自由采食和飲水,每天08:00 和18:00 進(jìn)行飼喂,投料后2 h 后對(duì)兔舍進(jìn)行糞便清理、衛(wèi)生清掃。預(yù)試期7 d,正試期28 d。

    1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

    1.4.1 生產(chǎn)性能 正式試驗(yàn)開始后,稱量各組試驗(yàn)兔的體重獲得初始重,于第28 天稱量記錄試驗(yàn)?zāi)┲?,根?jù)試驗(yàn)天數(shù)計(jì)算平均日增重,統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)期間試驗(yàn)兔的采食量,計(jì)算平均日采食量和耗料增重比。

    統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)期間試驗(yàn)兔的腹瀉情況,計(jì)算獲得腹瀉頻率,公式:

    腹瀉頻率=[試驗(yàn)期內(nèi)腹瀉只日數(shù)/(試驗(yàn)天數(shù)×試驗(yàn)只數(shù))]×100%

    1.4.2 消化試驗(yàn) 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后,將試驗(yàn)兔于消化代謝籠內(nèi)單籠飼養(yǎng),每天飼喂2 次,自由采食和飲水。根據(jù)家兔消化試驗(yàn)規(guī)程操作,采用全收糞法進(jìn)行消化試驗(yàn),每天10:00 收集濾網(wǎng)上的全部新鮮糞便,清除糞球上的兔毛后稱重,將新鮮糞便分成2 份,一份用10% 鹽酸溶液固定揮發(fā)性氮,用于粗蛋白質(zhì)測(cè)定;剩余部分不做處理,用于其他常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定。將每天收集的糞便放入-20℃儲(chǔ)存,連續(xù)收集7 d。把同一兔子7 d 的糞便充分混勻,放入65~70℃烘箱內(nèi)烘48 h,取出后回潮24 h。烘干后的糞便粉碎、過篩、待測(cè)。

    分別測(cè)定飼糧和糞便樣品中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量。計(jì)算表觀消化率:

    某營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率=(食入某營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)量-對(duì)應(yīng)糞中某營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)量)/食入某營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)量×100%

    1.4.3 空腸抗氧化性能 正試期結(jié)束后,每組挑選接近平均體重的6 只試驗(yàn)兔屠宰,迅速找到并剪取所需腸段,用冷生理鹽水輕輕沖洗掉其內(nèi)容物后置于冰臺(tái)上,在鑷子的輔助下用剪刀剪開小腸,暴露出腸黏膜,用吸水紙輕輕拭干小腸內(nèi)部,利用玻片刮取小腸黏膜置于凍存管中,-80℃保存。取出黏膜,研磨后按1:9 比例與PBS緩沖液混勻,4 000 r/min 離心10 min,分裝上清,于-80℃保存待測(cè),采用生化法測(cè)定超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、總抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,T-AOC)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的活性和水平,試劑盒購(gòu)自北京百智生物科技有限公司,貨號(hào)分別為BCEA002、BCBU-011、BCOS-009,具體操作按說明書指示進(jìn)行。

    1.4.4 空腸結(jié)構(gòu) 取試驗(yàn)兔空腸放于10% 福爾馬林固定,HE 染色制作石蠟切片,在光鏡下觀察腸黏膜結(jié)構(gòu),使用Moditec 照相處理軟件和和病理分析圖像系統(tǒng)測(cè)量各試驗(yàn)兔腸段的腸絨毛高度、隱窩深度,并計(jì)算腸絨毛高度與隱窩深度比。

    1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,用Duncan's 法進(jìn)行多重比較,以P<0.05 為差異顯著,結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

    2 結(jié)果

    2.1 綠原酸對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知,對(duì)照組和抗生素組各指標(biāo)差異不顯著。與對(duì)照組和抗生素組相比,2 000 mg/kg 綠原酸組肉兔的末重分別升高了9.90%、9.82%(P<0.05)。與對(duì)照組相比,2 000 mg/kg綠原酸組肉兔的平均日增重升高了18.73%(P<0.05)。與對(duì)照組相比,2 000 mg/kg 綠原酸組肉兔的耗料增重比降低了7.84%(P>0.05),與抗生素組相比,2 000 mg/kg綠原酸組肉兔的耗料增重比降低了6.74%(P>0.05)。對(duì)照組腹瀉率最高,綠原酸組其次,抗生素組最低。

    表2 綠原酸對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響

    2.2 綠原酸對(duì)飼料主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率的影響 由表3 可知,與對(duì)照組和抗生素組相比,2 000 mg/kg綠原酸組 粗脂肪的消化率分別升高了2.07%和7.71%,(P>0.05),與500 mg/kg 綠原酸組和3 000 mg/kg 綠原酸組相比,2 000 mg/kg 綠原酸組粗脂肪的消化率分別升高了11.18% 和11.08%(P<0.05)。與對(duì)照組及抗生素組相比,2 000 mg/kg 綠原酸組鈣的消化率分別提高了7.41% 和8.47%(P>0.05)。與3 000 mg/kg 綠原酸組相比,2 000 mg/kg 綠原酸組鈣的消化率升高了12.27%(P<0.05)。與對(duì)照組相比,2 000 mg/kg 綠原酸組磷的消化率升高了13.92%(P>0.05),與抗生素組相比,2 000 mg/kg 綠原酸組磷的消化率降低了6.54%(P>0.05),與抗生素組相比,3 000 mg/kg 綠原酸組磷的消化率降低了30.16%(P<0.05)。

    表3 綠原酸對(duì)肉兔飼料主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響 %

    2.3 綠原酸對(duì)肉兔空腸抗氧化性能的影響 由表4 可知,與對(duì)照組相比,綠原酸組和抗生素組肉兔空腸黏膜T-AOC、SOD 活性及MDA 水平均無顯著差異。

    表4 綠原酸對(duì)肉兔空腸抗氧化指標(biāo)的影響

    2.4 綠原酸對(duì)肉兔空腸結(jié)構(gòu)的影響 由圖1 可知,添加綠原酸可以改善肉兔的腸道結(jié)構(gòu)形態(tài),使空腸絨毛高度增加,隱窩深度變淺。由表5 可知,與對(duì)照組相比,綠原酸組肉兔空腸的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度分別升高了8.43%、11.10%、11.5%、2.80%以及18.31%、14.85%、18.31%、0.99%(P<0.05)。綠原酸組肉兔空腸結(jié)構(gòu)形態(tài)的改善效果優(yōu)于抗生素組。

    表5 綠原酸對(duì)肉兔空腸結(jié)構(gòu)的影響

    圖1 綠原酸對(duì)肉兔空腸絨毛結(jié)構(gòu)的影響

    3 討 論

    3.1 綠原酸對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響 飼糧中添加綠原酸可以改善動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。劉則學(xué)等[5]報(bào)道,在仔豬飼糧中添加250 g/t 綠原酸使耗料增重比顯著降低,腹瀉頻率有降低趨勢(shì),改善了仔豬的生長(zhǎng)性能。Chen 等[6]發(fā)現(xiàn)在斷奶仔豬飼糧中添加1 000 mg/kg 綠原酸可顯著提高飼料轉(zhuǎn)化率。陳鵬等[7]發(fā)現(xiàn)在斷奶仔豬飼糧中添加綠原酸可顯著提高仔豬平均日增重,改善生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)中,與對(duì)照組和抗生素組相比,2 000 mg/kg 綠原酸組肉兔末重和平均日增重顯著升高,可能是添加綠原酸改善了肉兔空腸的結(jié)構(gòu)形態(tài),使腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度值均顯著升高,提高了肉兔對(duì)養(yǎng)分的消化吸收能力,且2 000 mg/kg 綠原酸組對(duì)總能、粗蛋白質(zhì)、粗纖維等營(yíng)養(yǎng)素的消化率均有升高趨勢(shì),從而提高了肉兔的生長(zhǎng)性能。同時(shí),綠原酸還具有抗菌、消炎以及增強(qiáng)免疫力等作用,對(duì)肉兔具有益生作用[8]。

    3.2 綠原酸對(duì)肉兔營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響 飼料表觀消化率在一定程度上可反映動(dòng)物對(duì)飼料養(yǎng)分的利用情況。王多伽[9]研究發(fā)現(xiàn),吉戎兔飼糧中添加0.03%~0.27%綠原酸對(duì)粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維消化率均顯著提高。陳鵬等[10]報(bào)道,杜仲提取物中綠原酸含量大于5%,添加后可以提高斷奶仔豬對(duì)干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、總能的消化率。其可能原因是,添加綠原酸增強(qiáng)了消化酶的分泌能力,改善了腸道的結(jié)構(gòu)形態(tài),從而促進(jìn)對(duì)營(yíng)養(yǎng)素的吸收效率[11]。本試驗(yàn)中各組肉兔對(duì)各營(yíng)養(yǎng)素的消化率差異并不顯著,可能與動(dòng)物畜種與機(jī)體的生理特點(diǎn)和消化機(jī)制有關(guān)。

    3.3 綠原酸對(duì)肉兔空腸抗氧化性能的影響 腸道是動(dòng)物主要的消化吸收器官,其有著自己的抗氧化系統(tǒng),過程中有自由基的產(chǎn)生,過量的自由基與較低的抗氧化酶活性打破了氧化還原狀態(tài)的平衡,損傷腸道。Chen 等[12]研究表明,飼喂1 000 mg/kg 綠原酸可顯著提高斷奶仔豬十二指腸和空腸谷胱甘肽過氧化酶、過氧化氫酶活性,降低空腸和回腸MDA 活性。周艷[13]研究發(fā)現(xiàn),在大鼠飼糧中添加60 mg/kg 綠原酸能顯著提高慢性內(nèi)毒素應(yīng)激大鼠回腸組織SOD 活性和T-AOC,降低組織和線粒體MDA 含量。其原因可能是綠原酸在代謝過程中伴隨著新的酚酸產(chǎn)生,有良好的抗氧化能力,使腸道系統(tǒng)的抗氧化系統(tǒng)發(fā)生變化[14]。綠原酸具有特殊的分子結(jié)構(gòu),可以通過捐贈(zèng)氫原子減少自由基,抑制氧化反應(yīng)。也可能是綠原酸可抑制TLR4/NF-κB 信號(hào)通路并激活Nrf2/HO-1 信號(hào)通路,增強(qiáng)抗氧化酶活性[15]。本試驗(yàn)中,各組空腸抗氧化性能差異并不顯著,可能是試驗(yàn)兔在屠宰時(shí)發(fā)生應(yīng)激反應(yīng),胃腸道黏液分泌不足。

    3.4 綠原酸對(duì)肉兔空腸結(jié)構(gòu)的影響 Zhang 等[16]報(bào)道,在仔豬飼糧中添加綠原酸,可以使其十二指腸絨毛高度及絨毛高度/隱窩深度值均升高,隱窩深度顯著降低,也可以使空腸絨毛高度升高。Chen 等[17]發(fā)現(xiàn),在仔豬飼糧中添加1 000 mg/kg 綠原酸可顯著提高絨毛高度和絨毛高度/ 隱窩深度值。黃芳等[18]報(bào)道,綠原酸可以緩解鎘導(dǎo)致的大鼠腸道黏膜損傷,使絨毛高度增大隱窩深度變淺。本試驗(yàn)中,與對(duì)照組相比,抗生素組和綠原酸組的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度值均顯著增高,說明綠原酸可以改善肉兔空腸的結(jié)構(gòu)形態(tài),增加空腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)的吸收面積。其可能的原因是綠原酸能降低生長(zhǎng)過程的氧化應(yīng)激水平,絨毛長(zhǎng)度增加,保護(hù)腸道形態(tài),抵御細(xì)菌侵入。也可能增加腸道緊密連接蛋白的表達(dá),改變腸道的通透性,維持腸道微生物群落的多樣性及微生態(tài)平衡[19]。綠原酸的多種生物學(xué)功能減少了各種應(yīng)激、致病菌、病毒對(duì)腸道的影響,有益于腸道發(fā)育。

    4 結(jié) 論

    本試驗(yàn)中,添加綠原酸可改善肉兔的空腸結(jié)構(gòu)形態(tài),改善肉兔的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率來提高肉兔的生長(zhǎng)性能,推薦綠原酸添加量為2 000 mg/kg。

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