自制β-人絨毛膜促性腺激素、孕酮室內(nèi)質(zhì)控品及初步評價

裴蘊鋒，張先梅

（江蘇省徐州市中心醫(yī)院檢驗科，江蘇 徐州 221009）

血清β-人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）、孕酮（PG）定量檢測，作為妊娠過程監(jiān)測的常規(guī)檢查項目[1-2]，臨床實驗室檢測方法眾多，但因技術平臺的不同，試劑質(zhì)量不一，各生產(chǎn)廠商儀器間檢測結果缺乏可比性，在這種情況下，有穩(wěn)定可靠的室內(nèi)質(zhì)控品顯得十分重要。為保證檢驗質(zhì)量，降低運行成本，我們嘗試自制混合血清β-HCG、PG質(zhì)控品，現(xiàn)將初步應用結果及評價報道如下。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器 β-HCG、PG試劑盒和定標液均購自安圖生物工程有限公司。儀器使用安圖生物工程有限公司AutoLumo A2000全自動化學發(fā)光免疫分析儀。

1.2 方法

1.2.1 β-HCG、PG質(zhì)控血清的制備：根據(jù)中國合格評定國家認可委員會（CNAS）-GL005：2018文件要求[3]，收集2020年6月徐州市中心醫(yī)院產(chǎn)科孕婦及女性健康體檢者血清，經(jīng)檢測乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒等指標均為陰性，血清無溶血、黃疸、脂血。

1.2.1.1 低值、高值血清收集：β-HCG收集低值20 mIU/mL左右、高值300 mIU/mL左右的血清；PG收集低值4.0 ng/mL左右、高值35.0 ng/mL左右的血清。分別混合標本血清。

1.2.1.2 血清滅活：混合血清經(jīng)56 ℃加熱30 min滅活。

1.2.1.3 離心去除沉淀物：1 500 r/min，水平轉子大型離心機，離心30 min，取上清備用。

1.2.1.4 防腐分裝：用0.2 g/L疊氮鈉防腐，取有蓋離心管按0.2 mL/管，分裝后按照不同的批號分別于-20 ℃冰凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 自制β-HCG、PG血清質(zhì)控品的性能評價：

1.2.2.1 儀器定標校正：測定前，將儀器重新定標并使用原廠校正品做好儀器校正，使儀器處于最佳測定狀態(tài)，每次按需取出相應的自制β-HCG、PG質(zhì)控品，經(jīng)室溫融化平衡30 min，輕輕混勻后測定，并做好結果記錄。

1.2.2.2 不精密度測定：批內(nèi)不精密度測定：在同一天內(nèi)，分別對自制β-HCG、PG兩水平質(zhì)控品各進行20 次測定，分別計算平均值（x）、標準差（s）、變異系數(shù)（CV）。批間不精密度測定：每天分別對自制β-HCG、PG兩水平濃度質(zhì)控品隨標本批次各測定1 次，連續(xù)測定20 d，分別計算x、s、CV。

1.2.2.3 穩(wěn)定性比較：將β-HCG、PG自制質(zhì)控血清放置-20℃冷凍保存，每工作日取出，測定β-HCG、PG低值和高值各1 次，連續(xù)測定6 個月，分別統(tǒng)計每個月的x、s，觀察自制混合血清質(zhì)控品的穩(wěn)定性。

1.2.2.4 均勻性評估：隨機抽取已分裝在-20 ℃冰箱中的兩濃度水平的β-HCG、PG質(zhì)控品各10 支，共計40 支。經(jīng)室溫融化后混勻，測定3 次并計算其x、s、CV值，以觀察瓶間均勻性是否良好[4]。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進行分析。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差（±s）表示；多組比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 自制β-HCG、PG質(zhì)控血清批內(nèi)和批間不精密度檢測結果見表1、表2。

表1 自制β-HCG質(zhì)控血清批內(nèi)和批間不精密度

表2 自制PG質(zhì)控血清批內(nèi)和批間不精密度

2.2 自制β-HCG、PG質(zhì)控血清穩(wěn)定性比較 結果見表3。經(jīng)單因素方差分析，自制β-HCG、PG低值和高值質(zhì)控品每個月結果間的差異無統(tǒng)計學意義（P值均＞0.05）。2.3 自制β-HCG、PG質(zhì)控品瓶間均勻性評估 β-HCG質(zhì)控血清低值為(19.78±0.669)mIU/mL，CV 3.38%；高值(280.10±7.818)mIU/mL，CV 2.79%。PG質(zhì)控血清低值為(3.72±0.229)ng/mL，CV 6.15%；高值(33.16±0.766)ng/mL，CV 2.31%。均滿足＜1/3 TEA的室內(nèi)質(zhì)控要求[5]，提示瓶間均勻性良好。

表3 自制β-HCG、PG質(zhì)控品穩(wěn)定性（±s）

表3 自制β-HCG、PG質(zhì)控品穩(wěn)定性（±s）

時間 β-HCG（mIU/mL） PG（ng/mL）低值 高值 低值 高值2020年7月 20.61±1.649 281.13±18.72 3.73±0.24 33.48±2.17 2020年8月 20.24±1.655 280.04±19.46 3.76±0.18 34.01±2.49 2020年9月 19.70±1.613 278.36±21.64 3.72±0.21 34.33±2.35 2020年10月 19.50±1.453 281.33±19.89 3.73±0.18 34.02±1.98 2020年11月 20.06±1.621 281.03±20.68 3.73±0.20 33.85±2.58 2020年12月 19.94±1.656 281.28±19.90 3.75±0.20 33.44±2.49 F 1.155 0.064 0.088 0.435 P 0.336 0.997 0.994 0.824

3 討論

β-HCG主要由胎盤滋養(yǎng)層細胞分泌，在妊娠后的開始幾周分泌成倍增加，起到維持卵巢黃體分泌功能，滿足早期胚胎發(fā)育需要的重要作用，在懷孕后8～12 周β-HCG達到峰值。早孕階段，如β-HCG水平不隨孕齡增長呈倍增態(tài)勢或有回落，則提示可能有宮內(nèi)孕囊發(fā)育不良、早孕流產(chǎn)跡象[6-7]。PG同樣在妊娠過程中十分重要，足量PG可保證子宮內(nèi)膜功能正常，促進胚胎生長發(fā)育，避免母體發(fā)生胚胎排異反應。PG能降低肌纖維興奮性，進而降低孕婦子宮對縮宮素敏感性，為妊娠順利進行提供保證。正常情況下，早孕孕婦PG水平隨孕齡增加而穩(wěn)步增長。PG水平下降，則提示孕婦可能不能維持正常妊娠[8-9]，因此，血清PG可以作為判斷早孕先兆流產(chǎn)的有效指標之一。目前，國內(nèi)醫(yī)療單位使用的β-HCG、PG檢測方法學不同，實驗室間結果相差較大，使得β-HCG、PG臨床應用受到影響，尤其是一些基層醫(yī)療單位，因質(zhì)控品價格昂貴的影響，甚至室內(nèi)質(zhì)控不能正常開展。據(jù)于此，我們嘗試制備相對簡單、成本低廉、質(zhì)量滿足實驗室需求的室內(nèi)質(zhì)控品，在指導基層衛(wèi)生院質(zhì)量保證上做出努力。應用血清標本的好處之一就是基質(zhì)同臨床檢測標本完全一致，不添加任何物質(zhì)[10]。其次，考慮到正常及妊娠情況下的β-HCG、PG血清濃度范圍，質(zhì)控品設計了2個不同水平。在血清標本的選擇上，除了有濃度范圍的要求外，同時也對傳染性指標進行檢測，保證自制質(zhì)控品的生物安全性。性能評價，主要考量穩(wěn)定性及瓶間均一性。

通過評價β-HCG、PG低值和高值兩個水平自制混合血清質(zhì)控品的不精密度、6 個月穩(wěn)定性及瓶間均勻性，所有觀察指標均能滿足實驗室要求。批內(nèi)、批間不精密度，符合美國臨床生物化學學會（NACB）檢驗要求，-20 ℃保存6個月穩(wěn)定（P＞0.05）；結果顯示瓶間變異系數(shù)較小，均勻性良好。

初步評估結果顯示，自制β-HCG、PG混合血清質(zhì)控品符合化學發(fā)光免疫法室內(nèi)質(zhì)控品要求，制作簡單、結果穩(wěn)定，尤其為基層臨床實驗室β-HCG、PG檢測的室內(nèi)質(zhì)控提供了有效解決方案。同樣，這個自制質(zhì)控血清也可作為使用POCT方法質(zhì)控品，對β-HCG、PG急診檢驗質(zhì)量提高具有一定意義。