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    腹腔鏡胃癌根治術(shù)患者組織中PPARγ輔激活因子1α及長(zhǎng)鏈非編碼轉(zhuǎn)錄因子7表達(dá)及其臨床意義

    2021-06-10 05:20:12趙小勇吳瑞卿
    實(shí)用癌癥雜志 2021年5期
    關(guān)鍵詞:生存期免疫組化根治術(shù)

    趙小勇 吳瑞卿 王 尚

    胃癌是消化道常見的惡性腫瘤的1種,發(fā)病率和死亡率較高[1-2],近年來通過腹腔鏡治療胃癌已有廣泛的應(yīng)用[3-4]。PGC1α是PGC-1(PPARγ coactivator-1) 家族的一個(gè)成員,是線粒體增殖的重要調(diào)節(jié)因子,促進(jìn)線粒體的氧化表達(dá),提高線粒體氧化功能,介導(dǎo)多種組織的能量代謝途徑中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。lncRNA主要位于細(xì)胞核內(nèi),作為修飾染色質(zhì)復(fù)合物的支架,調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。已有研究表明lncRNA與癌癥的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)密切關(guān)系[5-6]。PGC1α、lncTCF7已被證實(shí)在多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中有重要作用。本研究旨在分析腹腔鏡胃癌根治術(shù)后患者體內(nèi)PGC1α和lncTCF7表達(dá)情況,探討腹腔鏡胃癌根治術(shù)的療效,PGC1α和lncTCF7對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展的重要意義,對(duì)腹腔鏡胃癌根治術(shù)患者預(yù)后的監(jiān)測(cè)效果。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料

    對(duì)我院2016年8月至2017年8月住院行腹腔鏡胃癌根治術(shù)患者50例作為研究對(duì)象,其中男性20例,女性30例,年齡36~74歲,平均年齡(51.5±2.9) 歲;納入標(biāo)準(zhǔn)為均接受術(shù)前胃鏡檢查,病理活組織檢查結(jié)果證實(shí)為原發(fā)性胃癌。排除標(biāo)準(zhǔn):①術(shù)前曾接受放射和(或)化學(xué)治療等轉(zhuǎn)化治療;②因出血、梗阻、穿孔等進(jìn)行急診手術(shù);③由于術(shù)后并發(fā)癥、意外等導(dǎo)致非腫瘤性因素的死亡;④術(shù)后病理檢查結(jié)果均符合胃癌病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn),并排除其他胃惡性腫瘤如淋巴瘤等;⑤單純接受消化道重建等非根治性切除術(shù)。本次研究的患者與家屬均知曉本次研究并簽署知情同意書,研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后展開。

    1.2 細(xì)胞株和質(zhì)粒載體

    lncTCF7高表達(dá)的胃癌細(xì)胞株AGS購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所。人胚腎細(xì)胞HEK-293T為病毒包裝細(xì)胞,來自美國(guó)菌種保藏中心,并由上海市腫瘤研究所癌基因及相關(guān)基因國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存。RNA干擾慢病毒載體系統(tǒng)購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司,該系統(tǒng)包括LV2穿梭載體、包裝質(zhì)?;旌衔飌PACK-GAG、pPACK-REV和pPACK-VSV-G包裝載體。

    1.3 檢測(cè)方法

    免疫組化檢測(cè):PGC1α檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海語純生物有限公司,于根治術(shù)中收集患者胃癌病理組織,對(duì)組織進(jìn)行染色后制作病理切片,計(jì)算其免疫組化評(píng)分。

    qRT-PCR檢測(cè):收集患者新鮮胃癌組織標(biāo)本,在液氮下研磨并置于1.5 ml的EP管中,1 000 r/min離心5 min,將上清液棄去,QIAGEN RNA提取試劑盒(優(yōu)寧維,中國(guó))提取細(xì)胞的總RNA。利用分光光度計(jì)測(cè)量RNA吸光度值,計(jì)算RNA濃度。羅氏(ROCHE,瑞士)對(duì)lncTCF7基因進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)。

    1.4 隨訪

    通過定期復(fù)查、門診隨訪等方式直接聯(lián)系患者本人或家屬獲得隨訪資料,以2020年8月1日作為隨訪終點(diǎn),以無病生存期(全因死亡、腫瘤轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā))和總生存期(全因死亡)評(píng)價(jià)患者臨床預(yù)后。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2 結(jié)果

    2.1 PGC1α、lncTCF7 的表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系

    胃癌患者PGC1α、lncTCF7相對(duì)表達(dá)量與腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),與性別、年齡、腫瘤直徑無關(guān)(P>0.05),見表1。

    表1 PGC1α、lncTCF7 的相對(duì)表達(dá)量與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系

    2.2 PGC1α的表達(dá)與患者臨床預(yù)后的關(guān)系

    截至隨訪終點(diǎn),50例納入胃癌患者共12例死亡,6例轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā);以PGC1α免疫組化評(píng)分中位數(shù)進(jìn)行分組,PGC1α高表達(dá)組無進(jìn)展生存期和總生存期均低于PGC1α低表達(dá)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    表2 PGC1α的表達(dá)與患者臨床預(yù)后的關(guān)系月)

    2.3 lncTCF7 mRNA水平與患者臨床預(yù)后的關(guān)系

    以lncTCF7 mRNA相對(duì)表達(dá)中位數(shù)進(jìn)行分組,lncTCF7 mRNA高表達(dá)組無進(jìn)展生存期和總生存期均低于 lncTCF7 mRNA低表達(dá)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。

    表3 LncTCF7 mRNA水平患者臨床預(yù)后的關(guān)系月)

    2.4 胃癌患者不良預(yù)后的多因素分析

    將PGC1α的表達(dá)與 lncTCF7 mRNA水平作為檢驗(yàn)變量,患者隨訪終點(diǎn)時(shí)臨床結(jié)局作為結(jié)局變量,校正其它常量因素后,回歸分析結(jié)果顯示PGC1α的高表達(dá)與lncTCF7 mRNA高水平是根治性胃癌術(shù)后患者不良預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P>0.05),見表4。

    表4 胃癌患者不良預(yù)后的多因素分析

    3 討論

    研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的線粒體功能完備且與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)[7-8]。本研究結(jié)果顯示了在29.3%的胃癌患者組織中檢測(cè)到了PGC1α的明顯高表達(dá)。PGC1α在不同腫瘤中的表達(dá)受不同癌基因或信號(hào)通路的調(diào)控,以適應(yīng)在特定的腫瘤微環(huán)境下腫瘤細(xì)胞的代謝所需。胃癌患者PGC1α、lncTCF7水平與腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),與性別、年齡、腫瘤直徑無關(guān)。在腫瘤轉(zhuǎn)移方面,研究發(fā)現(xiàn)小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移模型中循環(huán)腫瘤細(xì)胞傾向于通過PGC1α維持線粒體代謝以保持侵襲性[9-10]。

    本研究發(fā)現(xiàn)腹腔鏡根治術(shù)后胃癌患者的PGC1α免疫組化評(píng)分、lncTCF7 mRNA相對(duì)表達(dá)與胃癌預(yù)后顯著相關(guān)。既往研究發(fā)現(xiàn),干擾lncTCF7的表達(dá)可以抑制胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力,提示lncTCF7可能是胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子[11-12]。因此lncTCF7有望作為胃癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的判斷生物標(biāo)志物。

    綜上所述,腹腔鏡根治術(shù)后PGC1α預(yù)測(cè)胃癌患者的預(yù)后具有重要的臨床意義,受限于病例數(shù)較少等限制,統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)論可能存在一定的偏倚,研究結(jié)論有待更多的研究證實(shí)。

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