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    GLUT-1、VEGF表達(dá)與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展及MVD的關(guān)系

    2021-06-10 05:20:00張媛媛陳選英薛曉會(huì)
    實(shí)用癌癥雜志 2021年5期
    關(guān)鍵詞:鼻咽癌染色淋巴結(jié)

    張媛媛 陳選英 薛曉會(huì)

    臨床上鼻咽癌的發(fā)生,能夠?qū)е禄颊呓诓∏檫M(jìn)展速度的顯著加快,增加了鼻咽癌患者遠(yuǎn)期的病死風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。臨床上對(duì)于鼻咽癌的發(fā)生機(jī)理的研究,可以為疾病的診療及預(yù)后隨訪提供參考。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT-1)的表達(dá)上升,能夠通過提高葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的激活程度,促進(jìn)癌細(xì)胞對(duì)于ATP的能量利用代謝,最終促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的持續(xù)性自我增殖[3];血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)是血管內(nèi)皮誘導(dǎo)生長(zhǎng)因子,其對(duì)于腫瘤新生血管的形成促進(jìn)作用,能夠提高腫瘤病灶的血流灌注量,提高腫瘤細(xì)胞的血氧供應(yīng)程度,最終影響腫瘤細(xì)胞的持續(xù)性異常分裂過程[4]。部分研究者探討了VEGF在鼻咽癌患者病灶組織中的表達(dá)情況,認(rèn)為在鼻咽癌患者中,VEGF蛋白的表達(dá)濃度可明顯上升[5],但缺乏對(duì)于GLUT-1、VEGF的表達(dá)與鼻咽癌患者體內(nèi)微血管密度(MVD)的關(guān)系分析。為了揭露GLUT-1、VEGF的表達(dá)與鼻咽癌患者的病情關(guān)系,從而為臨床上鼻咽癌的診療提供參考,本次研究選取我院病理中心收集的80 例鼻咽癌組織標(biāo)本,探討了GLUT-1、VEGF蛋白的表達(dá)情況。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料

    選取我院2017年5月至2019年10月收集的80例鼻咽癌組織標(biāo)本(鼻咽癌組)及其癌旁組織(對(duì)照組)。入選標(biāo)準(zhǔn):①鼻咽癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[6];②所有標(biāo)本均為手術(shù)后獲取;③手術(shù)前患者未接受放化療、免疫學(xué)治療、內(nèi)分泌治療;④本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理規(guī)定,經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),對(duì)研究對(duì)象的各項(xiàng)資料嚴(yán)格保密。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他部位惡性腫瘤的患者;②未經(jīng)病理學(xué)檢查確診;③資料缺失;④伴有風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病。其中男性60例、女性20例,年齡44~75歲,平均(55.2±9.8)歲;臨床分期:Ⅰ期20例、Ⅱ期25例、Ⅲ期30例、Ⅳ期5例;浸潤(rùn)深度:T1~T2 48例、T3~T4 32例;病灶最大徑≥3 cm 48例、病灶最大徑<3 cm 32例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性43例。

    1.2 免疫組化染色技術(shù)

    免疫組化結(jié)果判定:GLUT-1蛋白陽(yáng)性染色表達(dá)于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中,VEGF蛋白陽(yáng)性染色表達(dá)于細(xì)胞膜中,兩種蛋白的陽(yáng)性染色呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)。①依據(jù)染色的程度分為:未染色(0分)、僅僅淡黃色染色(1分)、棕黃色染色(2分)、染色呈褐色、黑色(3分);②根據(jù)染色的細(xì)胞占比結(jié)果:占比≤10%計(jì)分1分、占比范圍11%~50%計(jì)分2分、占比范圍51%~75%計(jì)分3分、占比>75%計(jì)分4分,染色程度與陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)分之乘積<3分為陰性、≥3分為陽(yáng)性。石蠟切片采用二甲苯進(jìn)行脫臘至水,5%的雙氧水常溫在孵育10 min,采用磷酸鹽緩沖液孵育5 min,蒸餾水沖洗3次,每次5 min,5%的山羊血清抗體封閉10 min,不沖洗,滴加一抗(購(gòu)自abcum公司 批號(hào):20119304 濃度:1∶500),4 ℃冰箱孵育過夜,蒸餾水沖洗3次,每次5 min,滴加生物素標(biāo)記好的二抗(購(gòu)自北京康泰生物 批號(hào):20104856 濃度:1∶1000),37 ℃孵育30 min,蒸餾水沖洗3次,每次5 min,滴加第二代辣根酶標(biāo)記的工作液體,37 ℃孵育10 min,蒸餾水沖洗3次,每次5 min,顯色之后采用酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片,鏡下觀察。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 鼻咽癌組織與鼻咽正常組織中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達(dá)差異

    鼻咽癌組織中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為71.25%、62.50%,均顯著高于對(duì)照組標(biāo)本中的30.00%、25.00%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    表1 鼻咽癌組織與鼻咽正常組織中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達(dá)差異(例,%)

    2.2 鼻咽癌組織GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

    鼻咽癌組織中的GLUT-1蛋白、VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在不同臨床分期、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的組織中比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在不同病灶大小、不同浸潤(rùn)深度的組織中比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2,表3。

    表2 GLUT-1蛋白與鼻咽癌病理特征的關(guān)系(例,%)

    表3 VEGF蛋白與鼻咽癌病理特征的關(guān)系(例,%)

    2.3 不同GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達(dá)的鼻咽癌組織中MVD計(jì)數(shù)比較

    GLUT-1蛋白、VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)鼻咽癌組織中的MVD計(jì)數(shù)均顯著高于陰性表達(dá)的鼻咽癌組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表4,表5。

    表4 GLUT-1蛋白陽(yáng)性與陰性表達(dá)組織中MVD計(jì)數(shù)比較

    表5 VEGF蛋白陽(yáng)性與陰性表達(dá)組織中MVD計(jì)數(shù)比較

    3 討論

    長(zhǎng)期吸煙、HPV病毒感染等內(nèi)外環(huán)境誘導(dǎo)的鼻粘膜上皮細(xì)胞的損傷,能夠在異常增殖分裂過程中增加鼻咽癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[7]。臨床上鼻咽癌的發(fā)生總體呈現(xiàn)出了高發(fā)態(tài)勢(shì)和年輕化的發(fā)病趨勢(shì),長(zhǎng)期的鼻咽癌病情進(jìn)展,能夠?qū)е禄颊哌h(yuǎn)期總體生存時(shí)間的顯著縮短[8]。部分研究者報(bào)道的鼻咽癌的5年內(nèi)病死率可超過15%以上,同時(shí)其5年內(nèi)的復(fù)發(fā)或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)可超過20%以上[9]。在研究鼻咽癌發(fā)病機(jī)理的過程中,越來(lái)越多的研究關(guān)注到腫瘤蛋白在惡性腫瘤發(fā)生過程中的價(jià)值。雖然有研究探討了上皮非特異性腫瘤標(biāo)志物對(duì)于鼻咽癌病情評(píng)估的非標(biāo)注作用,但依靠普通非特異性腫瘤標(biāo)志物評(píng)估鼻咽癌病情的靈敏度及可靠性均較低[10]。而通過尋找可靠而高靈敏度的腫瘤病情評(píng)估指標(biāo),能夠在揭露鼻咽癌發(fā)病機(jī)理的同時(shí),為臨床上鼻咽癌的診療提供臨床方面的參考。

    GLUT-1是葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白,其能夠通過運(yùn)載葡萄糖蛋白,提高癌細(xì)胞對(duì)于葡萄糖氧化呼吸鏈的吸收利用速率,最終影響到腫瘤細(xì)胞的增殖過程。GLUT-1對(duì)于葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體結(jié)構(gòu)的調(diào)控作用,能夠影響到腫瘤細(xì)胞膜上受體的激活程度,提高腫瘤細(xì)胞內(nèi)第二信使的上調(diào)水平;VEGF作為生長(zhǎng)因子家族成員,其能夠通過影響到血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷修復(fù)過程,加劇腫瘤新生血管的形成速度,最終參與到惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中[11]。已有的現(xiàn)階段研究主要探討了VEGF對(duì)于鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)影響,認(rèn)為VEGF能夠顯著影響到鼻咽癌細(xì)胞的浸潤(rùn)過程[12],但缺乏對(duì)于GLUT-1、VEGF的表達(dá)與MVD的關(guān)系分析。

    本次研究中免疫組化的相關(guān)探討發(fā)現(xiàn),在鼻咽癌病灶組織中,GLUT-1、VEGF蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率水平明顯的上升,高于良性病變組,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著,表明GLUT-1、VEGF蛋白的高表達(dá)能夠顯著影響到鼻咽癌的病情進(jìn)展。GLUT-1、VEGF的蛋白高表達(dá),能夠在癌基因的激活、葡萄糖代謝轉(zhuǎn)運(yùn)、腫瘤血管的重塑化等方面發(fā)揮作用,從而最終影響到鼻咽部惡性腫瘤的發(fā)生。例如有其他研究者也發(fā)現(xiàn),在發(fā)生了局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中,鼻咽癌病灶組織中GLUT-1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可上升25%~55%,同時(shí)GLUT-1蛋白的表達(dá)還與鼻咽癌患者遠(yuǎn)期的總體生存時(shí)間有關(guān)[13-14]。在探討GLUT-1、VEGF蛋白的表達(dá)與鼻咽癌患者臨床病理特征的關(guān)系時(shí),發(fā)現(xiàn)在不同的臨床分期或者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中,GLUT-1、VEGF蛋白的表達(dá)具有顯著的差異,提示了GLUT-1、VEGF蛋白的表達(dá)能夠影響到鼻咽癌患者的臨床病理特征進(jìn)展。GLUT-1對(duì)于鼻咽癌臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響,在于其能夠影響到癌細(xì)胞膜上ATP控制的膜離子通道蛋白的開放程度,提高了腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和粘附能力,最終促進(jìn)了臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生;VEGF的高表達(dá)對(duì)于鼻咽癌臨床病理特征的影響,在于其能夠提高病灶組織細(xì)胞的血流灌注量和血氧水平,從而影響到鼻咽部腫瘤的淋巴結(jié)浸潤(rùn)和侵犯過程[15]。MVD是評(píng)估腫瘤病灶血管形成的相關(guān)指標(biāo),MVD的過度上升能夠顯著增加遠(yuǎn)期腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn),GLUT-1、VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)的鼻咽癌組織中的MVD計(jì)數(shù)均明顯上升,提示了GLUT-1、VEGF的表達(dá)還能夠影響到腫瘤血管的分布密度。

    綜上所述,鼻咽癌組織中GLUT-1、VEGF蛋白表達(dá)上調(diào),與腫瘤發(fā)生發(fā)展及微血管形成均具有一定的關(guān)系。但關(guān)于GLUT-1、VEGF蛋白影響MVD表達(dá)的具體機(jī)制仍然需要進(jìn)一步的探討。

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