miR-144-3p通過(guò)靶向調(diào)控IRS1抑制肺腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移

白俊 胡雅瓊 陳新璐 陳琳 張麗萍 尹崇高 李洪利

在全人類中，肺癌仍然是最常見的死亡原因[1]。其中非小細(xì)胞肺癌（non‐small cell lung cancer,NSCLC）約占肺癌的85%，肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）占NSCLC的60%[2]。目前雖然新技術(shù)和新療法在早期診斷中取得了進(jìn)步，但LUAD患者的5年總生存率仍然很低[3]。因此，深入分析LUAD的轉(zhuǎn)移機(jī)制具有重要意義。

MicroRNAs（miRNAs）通過(guò)互補(bǔ)作用負(fù)向調(diào)控基因表達(dá)，與靶基因mRNA的3'‐非翻譯區(qū)（3'‐UTR）特異性結(jié)合[4]。miRNA與細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等多種細(xì)胞和生理過(guò)程相關(guān)，且其異常表達(dá)與多種人類腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)[5]。有研究[6]顯示miR‐144‐3p可抑制胃癌細(xì)胞進(jìn)展，其表達(dá)水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤原發(fā)灶‐淋巴結(jié)‐轉(zhuǎn)移（tumor‐node‐metastasis,TNM）分期和侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。胰島素受體底物1（insulin receptor substrate 1,IRS1）是一種潛在致癌基因，參與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、骨肉瘤的相關(guān)調(diào)控進(jìn)展[7,8]。有研究[9]表明，miR‐144通過(guò)靶向IRS1在喉鱗癌中起到抑癌作用。但是，關(guān)于miR‐144‐3p靶向IRS1的調(diào)控LUAD機(jī)制仍有待研究。因此本研究將探討miR‐144‐3p是否可以通過(guò)靶向調(diào)控IRS1影響LUAD的侵襲和轉(zhuǎn)移，以期為L(zhǎng)UAD治療提供新方向。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 細(xì)胞株：人正常肺上皮細(xì)胞BEAS‐2B和肺腺癌NCI‐H1299、A549細(xì)胞均購(gòu)自ATCC，并通過(guò)STR細(xì)胞鑒定。miR‐144‐3p引物由上海生工生物工程有限公司設(shè)計(jì)合成。雙熒光素酶報(bào)告基因載體、質(zhì)粒等均由吉?jiǎng)P基因構(gòu)建合成。Lipofectamine2000購(gòu)于Invitrogen公司，8 μm孔徑Transwell小室購(gòu)自BD Biosciences。IRS1抗體為兔抗IRS1抗體（ab40777），β‐actin抗體為兔抗β‐actin抗體（ab8227），抗體均購(gòu)自Abcam公司。

1.2 生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù) GEO數(shù)據(jù)庫(kù)：從基因表達(dá)譜GEO數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.ncbi.nlm.nih.gov）中下載肺腺癌患者資料。GSE51853數(shù)據(jù)集為5例正常組織與76例肺腺癌組織miRNA表達(dá)譜。Kaplan‐Meier Plotter（Kmplot）網(wǎng)站（https://kmplot.com/analysis/）能夠評(píng)估21種癌癥類型中54,000基因?qū)ι媛实挠绊?。Starbase數(shù)據(jù)庫(kù)（http://starbase.sysu.edu.cn/index.php）提供了miRNA和各種RNA分子的相互作用信息，并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了ceRNA網(wǎng)絡(luò)。使用在線預(yù)測(cè)網(wǎng)站miRWalk（http://mirwalk.umm.uni‐heidelberg.de/）、TargetScan（http://www.targetscan.org/）和miRDB（http://mirdb.org/miRDB/）預(yù)測(cè)miRNA的靶基因。使用STRING在線網(wǎng)站（https://string‐db.org/）構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖，導(dǎo)入Cytoscape3.7.1刪除獨(dú)立節(jié)點(diǎn)，對(duì)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行分析，它主要是通過(guò)節(jié)點(diǎn)、邊緣、度和網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)來(lái)測(cè)量網(wǎng)絡(luò)，因此它可以幫助識(shí)別關(guān)鍵基因和關(guān)鍵蛋白質(zhì)群落。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)與分組 常溫復(fù)蘇正常肺上皮細(xì)胞BEAS‐2B，肺腺癌細(xì)胞NCI‐H1299和A549于37oC、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待其生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，鋪于六孔板中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，質(zhì)粒由上海吉?jiǎng)P生物有限公司構(gòu)建。將細(xì)胞分組：①con組：將過(guò)表達(dá)miR‐144對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)入A549細(xì)胞；②miR‐144組：轉(zhuǎn)入miR‐144過(guò)表達(dá)質(zhì)粒；③A549/miR‐144+NC組：同時(shí)轉(zhuǎn)入miR‐144過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和IRS1過(guò)表達(dá)對(duì)照質(zhì)粒；④A549/miR‐144+IRS1組：同時(shí)轉(zhuǎn)入miR‐144過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和IRS1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒。

1.4 定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT‐PCR）實(shí)驗(yàn) RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程參考本課題先前已發(fā)表文獻(xiàn)[4]。反應(yīng)條件為95oC 5 s、63oC 30 s、72oC 30 s進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。以U6作為內(nèi)參。miR‐144‐3p的上游引物為3'‐GCGCGCGTACAGTAT AGATGA‐5'，下游引物為5'‐AGTGCAGGGTCCGAGGTAT T‐3'，莖環(huán)結(jié)構(gòu)為5'‐GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAG GTATTCGCACTGGATACGACAGTACA‐3'。

1.5 Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn) Transwell實(shí)驗(yàn)分析A549細(xì)胞的遷移和侵襲能力。將150 μL轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞（4×104個(gè)）懸液接種在含1%胎牛血清的培養(yǎng)基于上室；同時(shí)，將含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基（500 μL）加入下室。與遷移實(shí)驗(yàn)不同的是，在侵襲實(shí)驗(yàn)中使用的Transwell小室涂有基質(zhì)膠。24 h后，甲醇固定后用Giemsa染色，在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。

1.6 CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) 收集各組細(xì)胞，將細(xì)胞懸液接種到96孔板中，每孔約100 μL、2×103個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)24 h后每孔加入含10%CCK8的培養(yǎng)基10 μL，培養(yǎng)1 h后，測(cè)定吸光度值A(chǔ)450 nm，分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染24 h、48 h、72 h、96 h后的細(xì)胞吸光度值A(chǔ)450 nm。獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

1.7 Western blot實(shí)驗(yàn) 轉(zhuǎn)染后的A549細(xì)胞，用RIPA裂解液提取總蛋白，進(jìn)行分離膠濃度為12%的SDS‐PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉，一抗4oC孵育過(guò)夜，在1:5,000稀釋的HRP二抗中孵育1 h，ECL曝光。一抗稀釋度：IRS1為1:1,000、β‐actin為1:1,000。

1.8 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn) 293T細(xì)胞購(gòu)自ATCC，細(xì)胞培養(yǎng)方式按照ATCC建議。構(gòu)建pGL3‐IRS1‐3'‐UTR‐MUT和pGL3‐IRS1‐3'‐UTR‐WT質(zhì)粒，將293T細(xì)胞培養(yǎng)于24孔板中，100 ng的pGL3‐IRS1‐3'‐UTR‐MUT和pGL3‐IRS1‐3'‐UTR‐WT使用Lipofectamine2000（Invitrogen,12566014）和miRNA對(duì)照及過(guò)表達(dá)載體分別共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。培養(yǎng)48 h，用螢火蟲熒光值和海腎熒光值的比值計(jì)算熒光素酶報(bào)告基因的活性。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用 SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD），兩組計(jì)量資料采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR‐144‐3p在肺腺癌組織中表達(dá)降低以及KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路分析 通過(guò)對(duì)GEO2R分析并獲取數(shù)據(jù)集GSE51853，篩選條件為logFC＜‐1（P＜0.05）結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR‐144‐3p在GSE51853數(shù)據(jù)集中的表達(dá)下調(diào)且P值最小；顯示miR‐144‐3p在LUAD組織中表達(dá)降低，且差異顯著（圖1A、圖1B）。此外Starbase數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)果顯示，miR‐144‐3p在LUAD患者組織中的表達(dá)較正常肺腺組織降低（圖1C）。我們用mirTarPathway對(duì)miR‐144‐3p進(jìn)行KEGG通路分析，以明確miR‐144‐3p在各種通路的富集情況，從而對(duì)其發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的機(jī)制進(jìn)行初步預(yù)測(cè)。結(jié)果顯示，miR‐144‐3p在p53信號(hào)通路以及TGF‐beta信號(hào)通路產(chǎn)生富集，這些通路在癌癥中都發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[10]，因此我們可以推測(cè)miR‐144‐3p也許通過(guò)參與相關(guān)通路的調(diào)控從而影響肺腺癌的進(jìn)展（圖1D）。

圖1 miR-144-3p在LUAD患者組織中的表達(dá)量和miR-144-3p的KEGG通路分析。A：火山圖顯示miR-144-3p在數(shù)據(jù)集GSE51853的表達(dá)差異；B：miR-144-3p在正常和肺腺癌組織中的表達(dá)情況；C：Starbase查詢miR-144-3p的表達(dá)情況；D：KEGG通路分析miR-144-3p的富集情況。Fig 1 Expression of miR-144-3p in lung adenocarcinoma tissue and its KEGG pathway analysis.A:Volcano plot of GSE51853 showing miRNA expression in lung adenocarcinoma tissues and normal tissues; B:The expression of miR-144-3p in normal tissues and cancer tissues; C:Starbase queries the expression of miR-144-3p; D:KEGG pathway analysis the enrichment of miR-144-3p.LUAD:lung adenocarcinoma; TGF:transforming growth factor; KEGG:Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes.****P＜0.0001.

2.2 miR‐144‐3p在肺腺癌細(xì)胞中低表達(dá) qRT‐PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：BEAS‐2B、H1299、A549細(xì)胞株中miR‐144‐3p相對(duì)表達(dá)量分別為1.00±0.00、0.75±0.05、0.54±0.03，因此選取A549細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)研究（P＜0.05，圖2A）。qRT‐PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR‐144過(guò)表達(dá)質(zhì)粒A549/miR‐144后miR‐144‐3p的表達(dá)情況，結(jié)果顯示與A549/con組（1.00±0.00）相比，A549/miR‐144組中的miR‐144‐3p（2.70±0.06）表達(dá)水平顯著增高（P＜0.05，圖2B），提示轉(zhuǎn)染成功。

圖2 miR-144-3p在各組細(xì)胞中的表達(dá)量。A：qRT-PCR驗(yàn)證miR-144-3p在不同細(xì)胞系的表達(dá)情況（**P＜0.01，***P＜0.001）；B：qRT-PCR驗(yàn)證miR-144-3p的轉(zhuǎn)染效率。Fig 2 Expression of miR-144-3p in different cells.A:qRT-PCR verifies the expression of miR-144-3p in different cell lines (**P＜0.01,***P＜0.001); B:qRT-PCR verifies the transfection efficiency of miR-144-3p (*P＜0.05).qRT-PCR:quantitative reverse transcription polymerase chain reaction.

2.3 過(guò)表達(dá)miR‐144抑制肺腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移和增殖能力Transwell遷移實(shí)驗(yàn)顯示，A549/miR‐144組細(xì)胞穿過(guò)下室的細(xì)胞數(shù)（169.33±4.04）比A549/con組細(xì)胞數(shù)（240.00±21.17）明顯減少（P＜0.05)；侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，A549/miR‐144組細(xì)胞穿過(guò)基底膜的細(xì)胞數(shù)（155.33 ±5.03）比A549/con組細(xì)胞數(shù)（205.00±5.00）明顯減少（P＜0.05）（圖3A、圖3B），結(jié)果證明過(guò)表達(dá)miR‐144可以抑制肺腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。通過(guò)CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力，結(jié)果顯示，與對(duì)照組在72 h（0.65±0.05）、96 h（0.96±0.02）的增殖能力相比，過(guò)表達(dá)miR‐144組在72 h（0.43±0.07）、96 h（0.67±0.06）的增殖能力明顯降低。

圖3 過(guò)表達(dá)miR-144抑制A549細(xì)胞的遷移侵襲和增殖能力。A：Transwell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證各組細(xì)胞的遷移和侵襲能力；B:Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（*P＜0.05）；C：CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力（*P＜0.05）。Fig 3 Overexpression of miR-144 inhibits the migration and invasion and proliferation ability of of each group.A:Transwell assay verified the ability of cell migration and invasion in each group; B:Transwell assay was used to detect the statistical analysis of cells in each group (*P＜0.05); C:CCK8 cell proliferation assay was used to detect the proliferation ability of each group (*P＜0.05).OD:optical density.

2.4 IRS1為miR‐144‐3p的Hub基因 利用預(yù)測(cè)軟件miRDB、miRWalk、TargetScan預(yù)測(cè)miR‐144‐3p的靶基因，交集得到122個(gè)靶基因（圖4A）。我們使用STRING分析miR‐144‐3p靶基因間的蛋白相互作用關(guān)系，并構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，根據(jù)基因間的相互作用強(qiáng)度及置信度運(yùn)用Cytoscape繪制蛋白互作網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行篩選。結(jié)果顯示，degree值的前十位基因?yàn)椋═JP1、ZEB2、FMR1、FN1、ZEB1、GRM5、CREB1、PBRM1、IRS1、SMARCA4）（圖4B、圖4C），其中顏色由藍(lán)色到橘色，表示degree值由小到大，并且degree值越高，節(jié)點(diǎn)的大小越大，結(jié)合分?jǐn)?shù)越高，邊的寬度越寬。GEDs在線數(shù)據(jù)庫(kù)查詢IRS1在癌癥中的表達(dá)情況，與正常組織相比，IRS1在LUAD中表達(dá)升高（圖4D），且高表達(dá)水平的IRS1與患者不良預(yù)后相關(guān)（P=0.018，圖4E）。因此我們選定IRS1進(jìn)行下一步研究。

圖4 miR-144-3p的Hub基因篩選。A：基因預(yù)測(cè)維恩圖；B：PPI互作網(wǎng)絡(luò)；C：Cytoscape檢測(cè)靶向基因的樞紐基因；D：IRS1在正常組織和肺腺癌組織中的表達(dá)；E：IRS1的生存曲線分析。Fig 4 Hub gene screening of miR-144-3p.A:The venn plot of predicted genes; B:PPI interaction network; C:The Hub genes of targeted genes made by Cytoscape; D:IRS1 expression in normal lung adenocarcinoma tissues and lung adenocarcinoma tissues; E:Survival analysis of of IRS1(P=0.018).PPI:protein protein interaction.

2.5 miR‐144‐3p通過(guò)靶向調(diào)控IRS1抑制LUAD細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力 通過(guò)雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，將miR‐144質(zhì)粒與pGL3‐IRS1‐3'‐UTR‐WT報(bào)告載體共轉(zhuǎn)染后，熒光素酶活性降低（P＜0.05）；而將miR‐144質(zhì)粒與pGL3‐IRS1‐3'‐UTR‐MUT報(bào)告載體共轉(zhuǎn)染后，熒光素酶活性無(wú)明顯變化（圖5A）。結(jié)果表明IRS1 mRNA的3'‐UTR是miR‐144的直接結(jié)合位點(diǎn)。Western blot實(shí)驗(yàn)顯示，IRS1在A549細(xì)胞（1.64±0.10）中的表達(dá)明顯高于BEAS‐2B（1.00±0.04）（P＜0.05，圖5B），在A549/miR‐144組細(xì)胞中的IRS1蛋白表達(dá)（0.62±0.03）明顯比A549/con組細(xì)胞的（1.00±0.12）低（P＜0.05，圖5C）。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示miR‐144+IRS1組穿過(guò)基底膜的細(xì)胞數(shù)（313.33±10.41）比miR‐144+NC組細(xì)胞數(shù)明顯增多（133.33±7.64），侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示miR‐144+IRS1組穿過(guò)基底膜的細(xì)胞數(shù)（224.67±9.61）比miR‐144+NC組細(xì)胞數(shù)明顯增多（113.67±7.09）且差異顯著（P＜0.05，圖5D）。結(jié)果表明，IRS1 mRNA的3'‐UTR是miR‐144的直接結(jié)合位點(diǎn)，且miR‐144可以通過(guò)靶向調(diào)控IRS1抑制LUAD細(xì)胞的遷移和侵襲能力。

圖5 miR-144靶向調(diào)控IRS1抑制肺腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。A：熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同組細(xì)胞的熒光素酶活性；B：Western blot驗(yàn)證IRS1的表達(dá)；C：Western blot檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-144后IRS1的表達(dá)情況；D：Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同組細(xì)胞的遷移和侵襲能力。Fig 5 miR-144 inhibits the invasion and migration ability of lung adenocarcinoma cancer by targeting the regulation of IRS1.A:Luciferase activity of cells in different group was detected by luciferase experiment; B:Western blot to verify IRS1 expression; C:Western blot to detect the expression of IRS1 after overexpression of miR-144; D:Transwell experiment detects the migration and invasion ability of different groups of cells.NS：no significance.

3 討論

腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移在肺癌最初診斷時(shí)經(jīng)常見到，是肺癌相關(guān)死亡的主要原因[11]。目前已經(jīng)報(bào)道了許多關(guān)于miRNA對(duì)肺癌的調(diào)節(jié)，例如，miR‐193阻止NSCLC的侵襲和遷移[12]。miR‐454作為一種預(yù)后因素，對(duì)肺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移做出了貢獻(xiàn)[13]。關(guān)于人類癌癥的研究，miR‐144的異常下調(diào)已在多種人類惡性腫瘤中被證實(shí)，包括膽管癌、結(jié)直腸癌、膀胱癌和甲狀腺癌[14]。

IRS1是一種潛在的致癌基因，與多種惡性腫瘤有關(guān)[15]。在功能上，IRS1不僅誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生，而且是多種致癌途徑的樞紐。研究表明，IRS1可能作為癌基因參與癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、遷移、侵襲和分化[16]，并且在胰腺癌[17]、結(jié)直腸癌[18]、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤[19]中高表達(dá)。IRS1異常表達(dá)與預(yù)后差、復(fù)發(fā)率高和惡性腫瘤的生存率相關(guān)，我們當(dāng)前的目的是揭示IRS1在LUAD中發(fā)揮作用的機(jī)制[20]。

有證據(jù)[21]表明miR‐144還可以通過(guò)靶向ZFX抑制肝癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。miR‐144通過(guò)靶向TIGAR抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡和自噬[22]。LUAD復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的潛在機(jī)制尚不清楚。本次實(shí)驗(yàn)研究了microRNA‐144‐3p（miR‐144‐3p）在LUAD發(fā)生和進(jìn)展中的作用。通過(guò)由GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中的GSE51853數(shù)據(jù)集，篩選得到了與LUAD相關(guān)的miR‐144‐3p，生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)顯示miR‐144‐3p在LUAD中表達(dá)降低，KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn)miR‐144‐3p與癌癥通路相關(guān)。qRT‐PCR檢測(cè)miR‐144‐3p在肺腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況。在體外，miR‐144‐3p上調(diào)降低細(xì)胞存活率和遷移率，反之亦然。有研究[23]表明，XIST通過(guò)抑制miR‐144調(diào)控IRS1的表達(dá)和PI3K/AKT信號(hào)通路促進(jìn)喉鱗癌的進(jìn)展。本研究通過(guò)PPI和CytoHubba識(shí)別候選基因，最終選取IRS1作為研究對(duì)象。另外GEDS數(shù)據(jù)庫(kù)以及Kmplot數(shù)據(jù)庫(kù)分析了IRS1在正常與癌癥組織中的表達(dá)，生存分析以及靶向結(jié)合情況。在機(jī)制上，miR‐144‐3p能夠負(fù)調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)移蛋白IRS1。我們的結(jié)果支持miR‐144‐3p通過(guò)靶向IRS1參與LUAD的進(jìn)展，因而它有可能成為L(zhǎng)UAD潛在的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，后續(xù)我們的實(shí)驗(yàn)將繼續(xù)研究miR‐144‐3p在相關(guān)信號(hào)通路中的作用。

綜上所述，miR‐144‐3p與靶基因IRS1很有可能參與LUAD的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，這對(duì)完善miR‐144‐3p與LUAD的關(guān)系提供了參考資料。對(duì)開拓miR‐144‐3p在LUAD中的研究提供了新的方向。

Author contributions

Bai J,Hu YQ and Chen XL conceived and designed the study.Bai J and Hu YQ performed the experiments.Chen L and Zhang LP analyzed the data.Yin CG and Li HL contributed analysis tools.Yin CG and Li HL provided critical inputs on design,analysis,and interpretation of the study.All the authors had access to the data.All authors read and approved the final manuscript assubmitted.