Linc00891通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合并抑制miR-27a-3p在骨肉瘤中發(fā)揮抑癌作用

阮成群，肖永杰，李記天△

骨肉瘤（osteosarcoma，OS）是兒童和青少年最常見(jiàn)的原發(fā)惡性骨腫瘤，其發(fā)病率逐年升高［1］。目前常采用手術(shù)切除結(jié)合化療來(lái)控制腫瘤轉(zhuǎn)移，其中局部OS患者的5年生存率約為70%，而轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)性患者的總體生存時(shí)間不足12個(gè)月［2］。所以，尋求新的治療策略及治療靶點(diǎn)至關(guān)重要。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，LncRNA）是一類(lèi)新發(fā)現(xiàn)的非編碼RNA分子，可作為癌基因或抑癌因子發(fā)揮作用，從而調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖等行為。其中Linc00891參與調(diào)控多種細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用的信號(hào)通路［3］。LncRNA和微小RNA（miRNA）可相互調(diào)控，影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展［4］。miR-27a-3p在OS細(xì)胞系中的表達(dá)顯著高于人正常成骨細(xì)胞［5］，且miR-27a-3p能夠通過(guò)激活Wnt/β-連環(huán)素（β-catenin）通路促進(jìn)結(jié)直腸癌的進(jìn)展［6］。但是，Linc00891能否通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合并抑制miR-27a-3p在OS中發(fā)揮抑癌作用，目前相關(guān)研究較少。本研究通過(guò)檢測(cè)Linc00891在不同OS細(xì)胞系及人成骨細(xì)胞系中的表達(dá)情況并分析過(guò)表達(dá)Linc00891對(duì)OS細(xì)胞系增殖、克隆形成、遷移、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響，同時(shí)探討Linc00891和miR-27a-3p的結(jié)合位點(diǎn)以及過(guò)表達(dá)Linc00891和上調(diào)miR-27a-3p對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響，以期為OS的治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 人成骨細(xì)胞系hFOB 1.19（目錄號(hào)：GNHu14）和OS細(xì)胞系U-2 OS（目錄號(hào)：SCSP-5030）、Saos-2（目錄號(hào)：TCHu114）、MG-63（目錄號(hào)：TCHu124）、SW 1353（目錄號(hào)：TCHu128）均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)。DMEM/F12培養(yǎng)基和10%胎牛血清（FBS）均購(gòu)自美國(guó)Giboc公司；CCK-8檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司；RNA提取試劑盒購(gòu)自北京天根生化科技有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自美國(guó)Genecopoeia公司；實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）檢測(cè)試劑盒、Linc00891過(guò)表達(dá)陰性對(duì)照載體（pcDNA-NC）和Linc00891過(guò)表達(dá)載體（pcDNALinc00891）以及Linc00891、β-actin引物均購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司；miR-27a-3p模擬物（miR-27a-3p mimic）購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司；Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑盒購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；PVDF膜購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；ECL顯色試劑盒和BCA蛋白定量試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；鈣黏著蛋白E（E-cadherin，E-cad）、鈣黏著蛋白N（N-cad）、GAPDH小鼠單克隆抗體和辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記山羊抗小鼠IgG二抗均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；RNA pulldown試劑盒購(gòu)自廣州賽誠(chéng)生物科技有限公司；鏈霉親和素磁珠購(gòu)自美國(guó)CST公司；TCF/LEF報(bào)告試劑盒購(gòu)自北京啟為益成科技有限公司；尼康SMZ745光學(xué)顯微鏡購(gòu)自上海普赫生物科技有限公司；TL988 qPCR儀購(gòu)自西安天隆科技有限公司；全能型凝膠成像分析系統(tǒng)ChemiDoc-MP購(gòu)自山東三瑞科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) hFOB 1.19、U-2 OS、Saos-2、MG-63、SW 1353細(xì)胞系均使用含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基并置于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔2~3 d傳代1次。

1.2.2 qPCR檢測(cè)不同OS細(xì)胞系和人成骨細(xì)胞系中Linc00891的表達(dá)水平 使用RNA提取試劑盒提取各種細(xì)胞總RNA，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒得到cDNA并置于-20℃冰箱中保存待用。反應(yīng)程序：94℃10 min；94℃30 s，62℃30 s，62℃30 s，40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)體系參照qPCR試劑盒說(shuō)明書(shū)。以β-actin為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt計(jì)算不同細(xì)胞中Linc00891的相對(duì)表達(dá)水平。引物序列見(jiàn)表1。將Linc00891表達(dá)水平較低的2細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

Tab.1 qPCR primer sequences表1 qPCR引物序列

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組 將1.2.2實(shí)驗(yàn)篩選的細(xì)胞接種于含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)基后進(jìn)行傳代。將Saos-2細(xì)胞、MG-63細(xì)胞分組為：blank組（不轉(zhuǎn)染）、NC組（轉(zhuǎn)染pcDNA-NC）和OE組（轉(zhuǎn)染pcDNA-Linc00891）。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至50%~60%時(shí)，使用Lipfectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑盒將pcDNA-NC、pcDNA-Linc00891分別轉(zhuǎn)染至Saos-2和MG-63細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24 h后進(jìn)行各指標(biāo)檢測(cè)。

1.2.4 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖能力 分別調(diào)整各組細(xì)胞濃度至3×104個(gè)/mL并取100μL細(xì)胞懸液接種于96孔板，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2、24、48、72 h后分別加入CCK-8溶液10μL，繼續(xù)培養(yǎng)2 h，在酶標(biāo)儀上測(cè)定450 nm波長(zhǎng)的光密度（OD）值。

1.2.5 平板克隆法檢測(cè)細(xì)胞克隆形成能力 收集培養(yǎng)24 h后的各組細(xì)胞，胰蛋白酶消化后，配制成濃度為1×106個(gè)/L細(xì)胞懸液，取6孔板，每孔接種1 mL后，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14 d，至形成肉眼可見(jiàn)的克隆時(shí)（克隆細(xì)胞數(shù)100左右），終止培養(yǎng)；棄去培養(yǎng)基，PBS清洗2次后，每孔加入1 mL甲醇固定15 min，以流水緩慢沖洗，每孔再加入1 mL吉姆薩染液染色30 min。流水緩慢沖洗，于通風(fēng)櫥干燥，顯微鏡下計(jì)數(shù)，計(jì)算細(xì)胞克隆形成相對(duì)水平。

1.2.6 Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移能力 取各組細(xì)胞，用不含F(xiàn)BS的DMEM/F12培養(yǎng)基，制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×108個(gè)/mL，取100μL細(xì)胞懸液接種到Transwell小室上室，取600μL含20%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基至下室，37℃培養(yǎng)24 h后，下室用4%多聚甲醛室溫固定20 min，PBS洗滌3次，甲醇固定15 min，0.1%結(jié)晶紫室溫染色40 min。沖洗多余染液，晾干后光學(xué)顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)穿過(guò)微孔膜的細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞遷移相對(duì)水平。

1.2.7 Western blot檢測(cè)E-cad、N-cad蛋白表達(dá) 各組細(xì)胞采用蛋白抽提試劑盒提取總蛋白，BCA蛋白定量試劑盒對(duì)蛋白進(jìn)行定量。依次進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉(zhuǎn)PVDF膜，脫脂奶粉封閉，1∶1 000濃度稀釋后的E-cad、N-cad和GAPDH小鼠單克隆抗體4℃過(guò)夜孵育、TBST緩沖液洗膜，HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG二抗（1∶2 000）中室溫孵育2 h，洗膜，用ECL試劑盒顯色，全能型凝膠成像分析系統(tǒng)拍照，以GAPDH為內(nèi)參，分析各組蛋白表達(dá)水平。

1.2.8 RNA pulldown實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Saos-2細(xì)胞中Linc00891和miR-27a-3p的結(jié)合關(guān)系 取3×106個(gè)細(xì)胞接種在10 cm培養(yǎng)皿上過(guò)夜培養(yǎng)，以終濃度100 nmol/L生物素標(biāo)記的miR-27a-3p mimic（探針由Ribobio定制）轉(zhuǎn)染Saos-2細(xì)胞，對(duì)照組采用生物素標(biāo)記的NC序列進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞，在冰上加細(xì)胞裂解液，于4℃下旋轉(zhuǎn)孵育4 h；將50μL鏈霉親和素磁珠加入上述細(xì)胞裂解液后，在4℃下旋轉(zhuǎn)平衡30 min，離心并清洗收集磁珠，以Trizol法分別提取磁珠pulldown下的總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板，進(jìn)行PCR反應(yīng)，總體系20μL包括10μL 2×EasyPfu PCR SuperMix、上下游引物各1μL，cDNA 1μL、ddH2O 7μL，反應(yīng)程序：95℃5 min；94℃20 s，58℃20 s，72℃2 min，35個(gè)循環(huán)，檢測(cè)其中Linc00891水平，以GAPDH作為內(nèi)參（上游引物5'-AAGTTCAACGGCACAGTCA-3'；下 游 引 物5'-GTCATA?AGTCCCTCCACGAT-3'）。以未經(jīng)RNA pulldown的50μL細(xì)胞裂解液作為input對(duì)照。

1.2.9 TCF/LEF報(bào)告試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Wnt/β-catenin通路激活情況 TCF/LEF報(bào)告載體上載有由TATA box和TCF/LEF響應(yīng)元件所調(diào)控的綠色熒光蛋白（GFP）基因，可通過(guò)檢測(cè)GFP蛋白表達(dá)水平間接反映β-catenin的轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而反映Wnt/β-catenin通路激活情況。野生型或Linc00891過(guò)表達(dá)細(xì)胞以2×104個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種于96孔板，以反向轉(zhuǎn)染方法將50 ng TCF/LEF報(bào)告載體和50 ng miR-27a-3p mimic以Lipofectamine 3000進(jìn)行共轉(zhuǎn)染，對(duì)照組僅轉(zhuǎn)染報(bào)告載體。轉(zhuǎn)染16 h后更換新鮮培養(yǎng)液體，轉(zhuǎn)染24 h后細(xì)胞以50 mmo/L氯化鋰處理，并以酶標(biāo)儀在488/515 nm ex/em下檢測(cè)各孔熒光強(qiáng)度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Graphpad Prism（Ver.8）軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。除標(biāo)注外，各實(shí)驗(yàn)均設(shè)置6個(gè)重復(fù)（3個(gè)生物學(xué)重復(fù)×2個(gè)技術(shù)重復(fù)），并將所有數(shù)據(jù)納入統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。2組數(shù)據(jù)間采用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，多組數(shù)據(jù)間采用單因素方差分析進(jìn)行比較，組間多重比較采用SNK-q檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Linc00891表達(dá)水平 qPCR結(jié)果表明，hFOB 1.19、U-2 OS、Saos-2、MG-63和SW 1353細(xì)胞系中Linc00891的相對(duì)表達(dá)水平分別為1.00±0.11、0.62±0.08、0.53±0.11、0.43±0.09和0.55±0.11。各OS細(xì)胞系Linc00891表達(dá)水平均明顯低于正常成骨細(xì)胞hFOB 1.19細(xì)胞系（n=6，F(xiàn)=28.541，P＜0.05）。其中，Saos-2和MG-63中Linc00891相對(duì)表達(dá)水平較低，因此選擇Saos-2和MG-63 OS細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)研究。

2.2 CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)Linc00891對(duì)OS細(xì)胞增殖的影響 結(jié)果顯示，Saos-2細(xì)胞在48 h和72 h時(shí)，與NC組和blank組比較，OE組細(xì)胞增殖能力顯著降低（P＜0.05）；MG-63細(xì)胞在24 h、48 h和72 h時(shí)，與NC組和blank組比較，OE組細(xì)胞增殖能力顯著降低（P＜0.05），見(jiàn)表2。

Tab.2 Proliferation of Saos-2 and MG-63 cells at different time points in the three groups表2 各組Saos-2、MG-63細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)增殖能力（n=6，OD450±s）

Tab.2 Proliferation of Saos-2 and MG-63 cells at different time points in the three groups表2 各組Saos-2、MG-63細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)增殖能力（n=6，OD450±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與blank組比較，b與NC組比較，P＜0.05

?

2.3 平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)Linc00891對(duì)OS細(xì)胞克隆形成能力的影響 結(jié)果顯示，與NC組和blank組比較，OE組Saos-2和MG-63細(xì)胞克隆形成能力顯著降低（P＜0.05），見(jiàn)表3、圖1。

Tab.3 Comparison of colony forming ability of Saos-2 and MG-63 cells between the three groups表3 各組Saos-2和MG-63細(xì)胞克隆形成能力比較（n=6，±s）

Tab.3 Comparison of colony forming ability of Saos-2 and MG-63 cells between the three groups表3 各組Saos-2和MG-63細(xì)胞克隆形成能力比較（n=6，±s）

＊＊P＜0.01；a與blank組比較，b與NC組比較，P＜0.05

?

2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)Linc00891對(duì)OS細(xì)胞遷移能力的影響 結(jié)果顯示，與NC組和blank組比較，OE組Saos-2和MG-63細(xì)胞遷移能力顯著降低（P＜0.05），見(jiàn)圖2、表4。

Fig.1 Clone formation of Saos-2 and MG-63 cells in each group圖1 各組Saos-2和MG-63細(xì)胞克隆形成情況

Fig.2 Migration levels of Saos-2 and MG-63 cells in each group(crystal violet stain,×200)圖2 各組Saos-2和MG-63細(xì)胞遷移水平（結(jié)晶紫染色，×200）

Tab.4 Comparison of migration ability of Saos-2 and MG-63 cells between the three groups表4 各組Saos-2和MG-63細(xì)胞遷移能力比較（n=6，±s）

Tab.4 Comparison of migration ability of Saos-2 and MG-63 cells between the three groups表4 各組Saos-2和MG-63細(xì)胞遷移能力比較（n=6，±s）

＊＊P＜0.01；a與blank組比較，b與NC組比較，P＜0.05

?

2.5 各組細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與NC組和blank組比較，OE組Saos-2和MG-63細(xì)胞N-cad/E-cad比值顯著降低（P＜0.05），見(jiàn)圖3、表5。

2.6 OS細(xì)胞Saos-2中Linc00891和miR-27a-3p的結(jié)合關(guān)系 RNA pulldown結(jié)果顯示，input-bio-N、pulldown-bio-NC、input-bio-miR-27a-3p和pull?down-bio-miR-27a-3p組中Linc00891相對(duì)值分別為1.00±0.10、0.01±0.00、1.00±0.12和0.92±0.09。與pulldown-bio-NC組比較，其余各組Linc00891相對(duì)值顯著升高（n=6，F(xiàn)=172.375，P＜0.05）。見(jiàn)圖4。

Fig.3 The N-cad and E-cad protein expression levels in Saos-2 and MG-63 cells in each group圖3 各組Saos-2、MG-63細(xì)胞N-cad、E-cad蛋白表達(dá)水平

Tab.5 N-cad/E-cad ratio in Saos-2 and MG-63 cells ineach group表5 各組Saos-2和MG-63細(xì)胞N-cad/E-cad比值（n=6，±s）

Tab.5 N-cad/E-cad ratio in Saos-2 and MG-63 cells ineach group表5 各組Saos-2和MG-63細(xì)胞N-cad/E-cad比值（n=6，±s）

＊＊P＜0.01；a與blank組比較，P＜0.05，b與NC組比較，P＜0.05

?

Fig.4 Binding relationship between Linc00891 and miR-27a-3p圖4 Linc00891和miR-27a-3p的結(jié)合關(guān)系

2.7 過(guò)表達(dá)Linc00891和上調(diào)miR-27a-3p對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響 TCF/LEF報(bào)告試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示，與野生型細(xì)胞中GFP熒光強(qiáng)度（1.00±0.10）比較，過(guò)表達(dá)Linc00891細(xì)胞中GFP熒光強(qiáng)度（0.40±0.04）顯著降低（n=6，t=13.646，P＜0.05），轉(zhuǎn)染miR-27a-3p mimic細(xì)胞中GFP熒光強(qiáng)度（3.87±0.34）顯著升高（n=6，t=19.836，P＜0.05）；與過(guò)表達(dá)Linc00891細(xì)胞中GFP熒光強(qiáng)度比較，過(guò)表達(dá)Linc00891同時(shí)轉(zhuǎn)染miR-27a-3p mimic細(xì)胞中GFP熒光強(qiáng)度（2.01±0.37）顯著升高（n=6，t=10.597，P＜0.05）。見(jiàn)圖5。

Fig.5 Effects of overexpression of Linc00891 and up regulation of miR-27a-3p on Wnt/β-catenin signaling pathway圖5 過(guò)表達(dá)Linc00891和上調(diào)miR-27a-3p對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響

3 討論

OS的發(fā)病率最高年齡段為15~19歲，且具有高轉(zhuǎn)移率這一顯著特點(diǎn)［7］。雖然近年來(lái)關(guān)于OS的基礎(chǔ)和臨床研究均取得了一定的進(jìn)展，但相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制尚不清楚，因此缺乏有效的特異性生物靶向治療藥物。探討OS細(xì)胞潛在的分子機(jī)制是研究的熱點(diǎn)。

LncRNA是多種生物過(guò)程的重要調(diào)控因子［8］，其中LncRNA-miRNA-mRNA軸在OS的發(fā)展中起關(guān)鍵作用，可為癌癥的診斷和治療提供新的途徑［9］。本研究發(fā)現(xiàn)Linc00891在OS細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著低于正常骨細(xì)胞，且過(guò)表達(dá)Linc00891可顯著抑制OS細(xì)胞在體外的增殖、克隆形成、遷移能力以及降低N-cad/E-cad比值，進(jìn)而抑制細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，提示其可能在OS中發(fā)揮抑癌作用。袁建敏等［10］研究發(fā)現(xiàn)化療藥物順鉑可顯著抑制OS細(xì)胞U-2 OS增殖，促進(jìn)其凋亡，然而OS易對(duì)鉑類(lèi)藥物產(chǎn)生耐藥性，單一鉑類(lèi)用藥會(huì)促進(jìn)耐藥細(xì)胞的生長(zhǎng)，因此順鉑、阿霉素、甲氨蝶呤聯(lián)合用藥或阿霉素和甲氨蝶呤聯(lián)合用藥是OS治療中常見(jiàn)的化療方案。梁宏彬等［11］研究發(fā)現(xiàn)激活Wnt/β-catenin通路可顯著提高卵巢癌細(xì)胞對(duì)鉑類(lèi)組合藥物化療耐藥性，與腫瘤進(jìn)展和患者的不良預(yù)后具有顯著相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Linc00891可顯著抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路，提示Linc00891可能通過(guò)抑制Wnt/β-catenin通路，降低OS細(xì)胞對(duì)鉑類(lèi)組合藥物的化療耐藥性。此外，Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活對(duì)OS的進(jìn)展起到關(guān)鍵作用：Wnt信號(hào)的異常激活可促進(jìn)OS細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移［12］，抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路可廣泛抑制OS細(xì)胞的生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)凋亡［13］。

LncRNA參與腫瘤細(xì)胞中諸生物學(xué)過(guò)程的最主要機(jī)制是競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miRNA并抑制后者的功能［14］。本研究前期通過(guò)ENCORI網(wǎng)站檢索了有AGO CLIPseq數(shù)據(jù)支持的可能與Linc00891發(fā)生相互作用的miRNA，發(fā)現(xiàn)Linc00891和miR-27a-3p可發(fā)生相互作用，并且通過(guò)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Linc00891和已知對(duì)OS進(jìn)展有明確促進(jìn)作用的miR-27a-3p存在直接的相互作用，且miR-27a-3p mimic轉(zhuǎn)染可克服過(guò)表達(dá)Linc00891對(duì)OS細(xì)胞中Wnt/β-catenin通路的抑制作用，提示Linc00891可能抑制miR-27a-3p在OS細(xì)胞中的功能。miR-27a-3p可在卵巢癌［15］、乳腺癌［16］、膠質(zhì)瘤［17］和胰腺導(dǎo)管腺癌［18］中提高Wnt/β-catenin通路的激活水平，這一點(diǎn)也在本研究的OS細(xì)胞中得到證實(shí)，因此筆者推斷Linc00891可能是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-27a-3p并抑制其對(duì)Wnt/β-catenin通路的激活作用。除此之外，miR-27b-3p在乳腺癌細(xì)胞中可通過(guò)CBLB/GRB2途徑促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖并提高多藥耐藥性［19］，在結(jié)直腸癌細(xì)胞中通過(guò)靶向HOXA10促進(jìn)癌細(xì)胞的遷移和侵襲［20］。Linc00891是否對(duì)上述途徑發(fā)揮類(lèi)似的作用以及Linc00891與OS的臨床相關(guān)性值得進(jìn)一步研究，其在其他腫瘤中可能發(fā)揮的作用亦值得探索。本研究未對(duì)Linc00891對(duì)OS的抑癌作用進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，也未驗(yàn)證Linc00891是否通過(guò)其他途徑發(fā)揮抑癌作用。

綜上，本研究揭示了Linc00891在OS中的抑癌作用，而其發(fā)揮抑癌作用的機(jī)制可能是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-27a-3p并抑制其對(duì)Wnt/β-catenin通路的激活，進(jìn)而抑制癌細(xì)胞增殖、遷移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。