高效價冷凝集素對紅細(xì)胞凝集及交叉配血的影響

李 亮，王 波，曹承華

1.南陽市中心醫(yī)院輸血科(河南 南陽 473200)

2.河南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院(河南 開封 475004)

交叉配血是指臨床上供血者的紅細(xì)胞懸液和受血者的血清、受血者的紅細(xì)胞懸液和供血者的血清同時進(jìn)行凝集試驗，其目的在于驗證受血者和供血者的ABO血型鑒定是否正確，從而避免出現(xiàn)溶血性輸血反應(yīng)[1]。臨床中多種原因會導(dǎo)致患者血液中冷凝集素效價增高而導(dǎo)致交叉配血試驗不合、血型鑒定困難，影響輸血治療。研究表明[2]自身紅細(xì)胞在低溫時會發(fā)生凝集現(xiàn)象，尤其是4℃時會出現(xiàn)明顯的紅細(xì)胞凝集。為保障臨床用血的安全，探討不同溫度條件下高效價冷凝集素對紅細(xì)胞凝集及交叉配血的影響，故選取了50例因為緊急情況需要進(jìn)行輸血的患者展開相關(guān)研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料選取南陽市中心醫(yī)院于2016年12月-2019年12月間收治的50例需要采取輸血治療的患者，其血紅蛋白均低于60 g/L；經(jīng)過院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者及其家屬均知情同意并且自愿參與本次研究。排除：①合并有自身免疫性疾病的患者；②合并有嚴(yán)重肝腎功能障礙的患者；③臨床治療依從性差的患者；④血型為Rh(-)的患者；⑤臨床資料缺失不全的患者；⑥傳染性疾病患者。其中男性24例，女性26例，年齡22～80歲，平均年齡(44.29±11.75)歲。原發(fā)疾?。鹤陨砻庖咝载氀?4例，骨髓異常增生綜合征10例，高球蛋白血癥8例，多發(fā)性骨髓瘤9例，慢性肺心病3例，傳染性單核細(xì)胞增多癥2例，陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿2例，外傷2例。

1.2研究方法①血液樣本采集：靜脈采血，分別采集EDTA抗凝樣本4 mL和不抗凝樣本5 mL；②紅細(xì)胞處理：抗凝管中提取紅細(xì)胞樣本，37℃水浴30 min，檢測無凝集后進(jìn)行后續(xù)操作，若發(fā)生凝集則重復(fù)進(jìn)行水浴，直至無凝集發(fā)生。③血清處理：干燥管中取出血清樣本后加入處理過的紅細(xì)胞，比例為1∶1，混合后置于4℃環(huán)境下冷藏30 min，進(jìn)行冷吸收處理，必要時可進(jìn)行多次處理。

冷吸收處理后的樣本即刻進(jìn)行分離處理，3 000 r/min離心5 min，隨后進(jìn)行交叉配血、冷凝集素試驗、ABO反定型實驗等。①血清交叉配血：采用鹽水法和凝聚胺法實施交叉配血，步驟參照ABO正反定型試劑卡(美國Ortho Clinical Diagnostics，Inc公司)說明書執(zhí)行，主、次側(cè)凝集則表示配血不符，使用24℃ 0.9%氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞，3次后配合2%紅細(xì)胞懸液再次進(jìn)行交叉配血。②電子交叉配血：采用全自動血庫系統(tǒng)；不規(guī)則抗體為陰性的前提下，結(jié)合血鑒定結(jié)果確認(rèn)血型匹配的一致性；不規(guī)則抗體為陽性則鑒定抗體對應(yīng)紅細(xì)胞確定抗體性質(zhì)，再判斷血型匹配的一致性。分別在室溫20℃和37℃時進(jìn)行交叉配血。③冷凝集素試驗：在采集的血清標(biāo)本中加入O型健康人的紅細(xì)胞或同型血，在20℃和37℃條件下觀察紅細(xì)胞凝集情況。④ABO反定型實驗：根據(jù)說明書操作鑒定ABO血型，采用鹽水試管法抗A抗B血型定型試劑對患者紅細(xì)胞進(jìn)行正定型，用ABO試劑紅細(xì)胞對患者血清進(jìn)行反定型。

1.3觀察指標(biāo)觀察患者血清交叉和電子交叉主次側(cè)配型的結(jié)果，分別記錄患者在不同溫度下電子交叉配血試驗的結(jié)果以及ABO血型的正反定型，分析患者的冷凝集素試驗紅細(xì)胞凝集情況和交叉配血的結(jié)果。交叉配血成功判定標(biāo)準(zhǔn)：主、次側(cè)未見凝集，顯微鏡下可見紅細(xì)胞散在、彌漫排序，排除免疫反應(yīng)對結(jié)果的影響后可確定。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理使用SPSS 21.0軟件行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用率(%)表示，比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1血清學(xué)交叉配血和電子交叉配血結(jié)果比較兩種交叉配血方式的不規(guī)則抗體篩查陽性和主側(cè)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；血清學(xué)交叉配血方式的次側(cè)相合顯著低于電子交叉配血方式(χ2=10.283，P<0.05)，見表1。

表1 比較輸血患者血清學(xué)交叉配血和電子交叉配血的結(jié)果

2.2不同溫度下的電子交叉配血結(jié)果比較在20℃時，電子交叉配血出現(xiàn)凝集率顯著高于37℃時(P<0.05)，見表2。

表2 比較不同溫度下的電子交叉配血結(jié)果

2.3不同溫度下紅細(xì)胞ABO血型鑒定結(jié)果比較兩種溫度下O型和正定型A型、反定型B型均有出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，并且在溫度為20℃時自身對照和O型出現(xiàn)凝集，見表3。

表3 不同溫度下紅細(xì)胞ABO血型鑒定結(jié)果比較

3 討論

交叉配血試驗在臨床上包含有主試驗和副試驗兩種，其中主試驗是采用供血者的紅細(xì)胞血液和受血者的血清做試驗，從而檢測兩者之間是否存在反應(yīng)的抗體；副試驗則是采取受血者的紅細(xì)胞懸液和供血者的血清進(jìn)行試驗，檢測兩者之間是否含有不合抗體[3-4]。交叉配血試驗的目的在于鑒定受血者與供血者之間的ABO血型是否匹配正確，盡可能地避免受血者出現(xiàn)溶血性輸血反應(yīng)[5-6]。冷凝集素是臨床上一種冷反應(yīng)型抗紅細(xì)胞抗體，又被稱之為冷型血凝素，同時也是一種可以存在于正常人血清之中的抗體，正常生理情況下并不會促使機(jī)體內(nèi)紅細(xì)胞發(fā)生凝集，而在0～5℃溫度下最容易和紅細(xì)胞膜抗原相結(jié)合，但是低效價一般不具備臨床意義[7-8]。臨床上在進(jìn)行交叉配血試驗時，高滴度的冷凝集素會對交叉配血試驗的結(jié)果產(chǎn)生一定程度的影響，進(jìn)而會影響到患者的輸血治療[9]。作為目前臨床上極為重要的治療手段之一，輸血治療的安全性和有效性非常重要，而目前臨床上所使用的配血方法主要是電子交叉配血和ABO血型正反定型，如何避免冷凝集素對配血的影響，進(jìn)而保證患者臨床輸血的安全是臨床研究的一大熱點[10]。根據(jù)有關(guān)資料顯示[11]，當(dāng)溫度低于一定程度時，冷凝集素的濃度就會大大升高，從而使得循環(huán)之中的自身抗體會和紅細(xì)胞表面抗原進(jìn)行結(jié)合，進(jìn)而導(dǎo)致血液凝集的現(xiàn)象出現(xiàn)。如果因為高效價冷凝集素影響了配血的結(jié)果使得臨床輸血治療中給患者輸入了假陰性配血，其后果將會非常嚴(yán)重，如出現(xiàn)腎功能損害、溶血反應(yīng)等情況，如果不能夠及時進(jìn)行有效處理，還會對患者的生命安全造成極大的威脅[12]。

在本次研究中，兩種交叉配血方式的不規(guī)則抗體篩查陽性和主側(cè)差異并無統(tǒng)計學(xué)意義；血清學(xué)交叉配血方式的次側(cè)相合顯著低于電子交叉配血方式，與既往研究結(jié)果相符[13]。在20℃時，電子交叉配血出現(xiàn)的凝集例數(shù)顯著多于37℃時，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。兩種溫度下O型和正定型A型、反定型B型均有出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，并且在溫度為20℃時自身對照和O型出現(xiàn)凝集。在溫度低于37℃時當(dāng)向患者的血清標(biāo)本中加入O型健康人或同型紅細(xì)胞會出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象；當(dāng)溫度處于4℃時可以看見紅細(xì)胞明顯凝集；當(dāng)溫度回升為37℃時，其凝集現(xiàn)象又會消失。采用鹽水法和凝聚胺法實施交叉配血試驗時，室溫下次側(cè)管和主側(cè)管均會出現(xiàn)程度不一的凝集顆粒；用同樣的方法和處理過的患者血清再次在37℃下輕搖試管，主次側(cè)都沒有出現(xiàn)凝集，將其倒入預(yù)溫好的載玻片中，顯微鏡下能夠看到紅細(xì)胞彌漫、散在排列，可以排除其他亞型抗體所導(dǎo)致的免疫反應(yīng)對結(jié)果的干擾，交叉配血成功。

綜上所述，在低溫條件下采用高效價冷凝集素能夠促進(jìn)患者紅細(xì)胞的凝集，對電子交叉配血試驗的結(jié)果和ABO血型正反定型造成一定程度的干擾，進(jìn)而會影響到患者的臨床輸血治療。