熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(FQ-PCR)法、染色涂片法檢測腦脊液(CSF)結(jié)核桿菌值對比

苑高翔

摘要：目的：對比分析熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（FQ-PCR）與染色涂片法檢測腦脊液（CSF）用于結(jié)核桿菌檢測中的診斷價(jià)值。方法：樣本選取80例疑似結(jié)核性腦膜炎（TBF）患者，就診時(shí)間為2019年2月～2020年2月，取CSF標(biāo)本，均行FQ-PCR檢測與染色涂片法檢測。結(jié)果：FQ-PCR檢測陽性率高于染色涂片法檢測陽性率，P<0.05;FQ-PCR法靈敏度、特異度、診斷符合率均高于染色涂片法，P<0.05。結(jié)論：FQ-PCR技術(shù)檢測結(jié)核桿菌，特異性、敏感性較高，用于TBF患者診斷中具有重要價(jià)值。

關(guān)鍵詞：FQ-PCR;染色涂片法;CFS;TBF;腦脊液

Comparison of Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction （FQ-PCR） and Staining Smear in the Detection of Mycobacterium Tuberculosis in Cerebrospinal fluid （CSF）

YUAN Gao-xiang （Taiyuan Fourth People's Hospital， ShanxiTaiyuan 030053）

Abstract： Objective： To compare and analyze the diagnostic value of fluorescence quantitative polymerase chain reaction （FQ-PCR） and staining smear in the detection of cerebrospinal fluid （CSF） in the detection of Mycobacterium tuberculosis. Methods： 80 patients with suspected tuberculous meningitis （TBF） were selected from February 2019 to February 2020. CSF samples were detected by FQ-PCR and staining smear. Results： the positive rate of FQ-PCR was higher than that of staining smear， P<0.05; The sensitivity， specificity and diagnostic coincidence rate of FQ-PCR were higher than those of staining smear， P<0.05.Conclusion： FQ-PCR has high specificity and sensitivity in the detection of Mycobacterium tuberculosis. It is of great value in the diagnosis of TBF patients.

Key words： FQ-PCR; Staining smear method; CFS; TBF; cerebrospinal fluid

結(jié)核桿菌（MTB）是常見傳染性致病菌，人體感染后可能處于無癥狀潛伏感染狀態(tài)，也可能引發(fā)進(jìn)行性病變。肺外結(jié)核類疾病中，TBF發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較高，可致患者死亡[1]。一般而言，TBF高發(fā)于感染MTB 1年內(nèi)，可能與化膿性腦膜炎、病毒性腦炎、腦腫瘤等多種疾病相混淆，具有病情進(jìn)展快、誤診率高、預(yù)后不良等特征，因此早期診斷極為重要。結(jié)合臨床實(shí)踐分析，檢測CSF內(nèi)抗酸桿菌，可提升MTB檢出率[2]。本文以80例疑似TBF患者探究FQ-PCR與染色涂片法檢測價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

樣本選取80例疑似結(jié)核性腦膜炎（TBF）患者，就診時(shí)間2019年2月～2020年2月，男43例、女37例;年齡42～74歲，平均年齡（37.91±5.14）歲。TBF診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）培養(yǎng)MTB結(jié)果呈陽性。檢出腦膜炎后，檢測CSF，檢出MTB，且腦脊液內(nèi)蛋白含量提升、氯化物降低。（2）采集腦脊液標(biāo)本，開展真菌、細(xì)菌檢查，同時(shí)檢測腫瘤細(xì)胞學(xué)，呈陰性。（3）經(jīng)抗結(jié)核治療，均好轉(zhuǎn)。疑似TBF選入標(biāo)準(zhǔn)：（1）采集樣本腦脊液標(biāo)本，主要成分為淋巴細(xì)胞。（2）樣本腦脊液比血漿葡萄糖低于0.5。（3）進(jìn)行CT或MRI檢查提示異常。（4）伴其他結(jié)核類疾病。（5）患者神志改變，且病程大于5d[3]。

1.2 方法

染色涂片法檢測：采集腦脊液標(biāo)本后，開展離心處理，隨后對沉渣進(jìn)行涂片染色，通過鏡檢觀察抗酸桿菌。

FQ-PCR法檢測：依據(jù)試劑盒要求進(jìn)行相關(guān)操作，取500μL腦脊液標(biāo)本與200μL濃縮液震勻，離心力8000*g，3min后，將上清液倒出，置入無菌生理鹽水1mL，進(jìn)行重懸沉淀，再次調(diào)節(jié)離心力8000×g，3min后，將上清液倒出，獲取沉渣留用[4]。隨后置入核酸釋放劑50μL，混合均勻，隨后靜置2～3min。準(zhǔn)備PCR反應(yīng)液（38μL）+內(nèi)標(biāo)（1μL）+酶結(jié)合物（2μL）+制備好樣本（5μL）置入PCR反應(yīng)管中。調(diào)節(jié)反應(yīng)條件，94℃環(huán)境下預(yù)變5min，隨后94℃ 15s，57℃ 30s，反應(yīng)45個(gè)循環(huán)調(diào)至25℃延伸10s。陰性標(biāo)準(zhǔn)：樣本Ct值>39，內(nèi)標(biāo)呈陽性;陽性標(biāo)準(zhǔn)：樣本Ct值≤39，曲線呈S形[5]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS21.0處理本文樣本數(shù)據(jù)，%、（）記錄疑似TBF患者資料，兩組差異經(jīng)χ2、t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 分析兩種方案檢測結(jié)果

染色涂片法檢測，4例檢出抗酸桿菌，陽性率5.00%;FQ-PCR法檢測，檢出陽性12例，陽性率15.00%。見表1。

2.2 分析兩種方案檢測性能

對選入80例疑似TBF樣本進(jìn)行CT與MRI等影像學(xué)檢查與CSF生化檢查，同時(shí)結(jié)合臨床癥狀分析，15例確診為TBF。計(jì)算兩種檢測方案靈敏度、特異度與診斷符合率，可見FQ-PCR法均高于染色涂片法。見表2。

3討論

臨床診斷TBF患者，多結(jié)合CSF檢查、臨床癥狀及CT、MRI等影像學(xué)診斷綜合分析，檢測CSF時(shí)，涉及學(xué)科較多，包括病原學(xué)、免疫學(xué)與細(xì)胞學(xué)等，診斷難度較高[6]。由于TBF病情較重，因此發(fā)病后需盡早診斷，以改善TBF患者預(yù)后[7]。臨床診斷結(jié)核類疾病金標(biāo)準(zhǔn)為培養(yǎng)MTB，檢出結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但檢測時(shí)間過長，受檢者需4～8周方可取得檢測結(jié)果，具有較高特異性。此外，培養(yǎng)MTB僅活菌可被培養(yǎng)，限制了結(jié)核類疾病初期診斷，不利于早期治療。近年來，F(xiàn)Q-PCR技術(shù)快速發(fā)展，具有靈敏度、特異度高等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛用于病原體檢測中[8]。

結(jié)核本實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，60例疑似TBF開展染色涂片法檢測，4例檢出抗酸桿菌，陽性率5.00%;開展FQ-PCR法檢測，12例呈陽性，陽性率15.00%。FQ-PCR法檢測陽性率高于染色涂片法，P<0.05。對選入疑似TBF樣本進(jìn)行CT與MRI等影像學(xué)檢查與CSF生化檢查，同時(shí)結(jié)合臨床癥狀分析，15例確診為TBF，可計(jì)算FQ-PCR法檢測靈敏度、特異度、診斷符合率均高于染色涂片法檢測。FQ-PCR法陽性率較染色涂片法高，可能與PCR敏感性過高有關(guān)，在檢查期間受感染影響，出現(xiàn)假陽性，導(dǎo)致FQ-PCR法檢出陽性率高于染色涂片法[9]。但本文數(shù)據(jù)中，F(xiàn)Q-PCR法檢出陽性患者與臨床確診病例相符，可見FQ-PCR檢測具有重要價(jià)值。

綜上所述，雖FQ-PCR技術(shù)不可取代傳統(tǒng)方案成為檢測結(jié)核類疾病金標(biāo)準(zhǔn)，但隨著FQ-PCR技術(shù)不斷成熟，已成為診斷MTB重要方案，具有檢查周期短、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，適用于不典型病例或傳統(tǒng)方案無法檢出病例檢查中，具備臨床推廣價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

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