miR-150調(diào)控PDCD4對結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞的影響①

楊盛婭 孫亞萍 劉立賓 盛云峰 鮑志堅(jiān) 浙江省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院杭州310007

結(jié)核病(tuberculosis,TB)是由結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的,嚴(yán)重危害人類健康的一種肺部慢性傳染性疾病[1-3]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報(bào)告,在全球范圍內(nèi),2018年約有1 000萬人罹患TB,死亡人數(shù)約120萬[4]。中國是世界第二大肺結(jié)核易感國家,結(jié)核感染比例約占全球總數(shù)的9%[3-4]。目前臨床上以痰培養(yǎng)MTB陽性作為診斷肺結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn),而MTB生長緩慢且培養(yǎng)周期較長,不利于患者的早期診斷及治療[5]。因此,仍迫切需要進(jìn)一步篩選更具敏感性、準(zhǔn)確性的生物學(xué)標(biāo)志物,簡便的診斷方法及深入的機(jī)制探討,為肺結(jié)核患者臨床治療提供分子水平的理論指導(dǎo)。

隨著近年深入的機(jī)制探討,研究發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核能夠引起多種細(xì)胞因子活化,單核巨噬細(xì)胞浸潤擴(kuò)大,誘發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)[3,6]。MTB是一類典型的胞內(nèi)寄生菌,通過飛沫、呼吸道傳播侵入機(jī)體,最終可被巨噬細(xì)胞識別,并使巨噬細(xì)胞釋放TNF-α等炎癥因子,從而抑制MTB的生長及進(jìn)一步擴(kuò)散。同時(shí),TNF-α致敏周圍T淋巴細(xì)胞,釋放其他細(xì)胞炎癥因子,包括IFN-γ、IL-1β等,促使Th1/Th2比例平衡形成及介導(dǎo)效應(yīng)T細(xì)胞的直接殺傷作用[7]。然而,對于人體中MTB感染巨噬細(xì)胞的有效診斷及治療策略依然有限。巨噬細(xì)胞是MTB的主要靶細(xì)胞和寄居場所,為MTB感染免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞[8]。MTB感染機(jī)體初期,巨噬細(xì)胞的凋亡是機(jī)體內(nèi)MTB繼續(xù)生長、擴(kuò)散的重要先天性防御機(jī)制[9]。因此,加強(qiáng)細(xì)胞炎癥因子水平變化及細(xì)胞凋亡的研究能夠?yàn)榉谓Y(jié)核發(fā)病及其機(jī)制探討提供新思路、新途徑。

微小RNA(microRNAs,miRNA)廣泛存在于真核生物,高度保守,長約18～22 bp,為單鏈非編碼RNA小分子,能與對應(yīng)的靶基因3′-非翻譯區(qū)(3′-untranslated region,3′-UTR)非完全或完全配對結(jié)合,從而在基因轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因mRNA的表達(dá)水平[10-11]。同時(shí),miRNA的異常表達(dá)與多種生物過程密切相關(guān),如細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、凋亡等。ZHANG等[12]通過對肺結(jié)核患者與健康人的血液進(jìn)行miRNA和mRNA表達(dá)譜的綜合分析,發(fā)現(xiàn)41種miRNA存在差異性表達(dá),其中miRNA-150顯著下調(diào)。然而,侯杏芳等[13]指出miRNA-150在TB患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中表達(dá)水平顯著升高,尤其是涂陽患者,可能具有診斷TB的臨床價(jià)值。同時(shí)研究者發(fā)現(xiàn),miR-150顯著增強(qiáng)動(dòng)脈粥樣硬化中的炎癥反應(yīng),并可預(yù)測膿毒血癥患者的生存獲益,抑制脂多糖(LPS)介導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)及凋亡[14-15]。另一方面,在高濃度葡萄糖處理的心臟成纖維細(xì)胞中抑制miR-150減輕心臟炎癥和纖維化[16]。目前對miR-150及其靶基因在肺結(jié)核中的研究較少。此外,研究表明miRNA可作為海綿吸附mRNA形成競爭性RNA機(jī)制,并在MTB感染巨噬細(xì)胞的分枝桿菌活力和炎癥因子分泌中發(fā)揮關(guān)鍵作用[17]。通過生物信息學(xué)預(yù)測,程序性細(xì)胞死亡蛋白4(programmed cell death protein 4,PDCD4)可能是miRNA-150的作用靶點(diǎn)之一。PDCD4是一種促凋亡基因,在人類肺、肝、腦、胰腺等組織中都有表達(dá)[18]。近年有研究發(fā)現(xiàn)PDCD4在肺纖維化、非小細(xì)胞性肺癌過程中低表達(dá)[19-20]。但miR-150靶向調(diào)控PDCD4對MTB感染巨噬細(xì)胞是否具有調(diào)節(jié)作用尚無詳細(xì)報(bào)道。

本研究采用MTB毒株H37Rv感染THP-1細(xì)胞系,并預(yù)測miRNA-150的靶基因；通過過表達(dá)miR-150或抑制miR-150表達(dá)檢測miR-150對下游靶基因PDCD4表達(dá)的影響,進(jìn)而對THP-1源巨噬細(xì)胞炎癥因子,細(xì)胞活力及凋亡進(jìn)行檢測,旨在探討miR-150靶向調(diào)控PDCD4對結(jié)核桿菌H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞的作用,為闡明肺結(jié)核的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制提供新的見解。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞系及菌株 人單核細(xì)胞THP-1、人腎上皮細(xì)胞系HEK293細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫；結(jié)核分枝桿菌毒株H37Rv菌株購自美國模式培養(yǎng)物研究所(American Type Culture Collection,ATCC 27294)；相關(guān)細(xì)菌實(shí)驗(yàn)操作與感染均在杭州市疾控中心生物安全防護(hù)三級實(shí)驗(yàn)室指導(dǎo)完成。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 RPMI1640培養(yǎng)基購自Gibco公司；CCK-8細(xì)胞活力檢測試劑盒均購自凱基公司；IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-1βELISA試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司；TRIzol試劑、LipofectamineTM2000 Reagent購自Thermo Fisher Scientific公司；兔單克隆抗體Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9購自Abcam公司；兔抗人GAPDH抗體購自華安公司；HRP標(biāo)記的二抗山羊抗兔IgG購自美國Santa Cruz公司；佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)購自美國Sigma公司；SYBR?Premix Ex TaqTMⅡRT-PCR試劑盒購自大連TaKaRa公司。miRNA-150模擬物(miRNA-150 mimic)、陰性對照模擬物(negative control mimic,NC-mimic)、miRNA-150抑制物(miR-150 inhibitor)、陰性對照抑制物(negative control inhibitor,NC-inhibitor)購自廣州銳博生物科技公司。PDCD4干擾序列(siRNA-PDCD4):5′-GCTGCTCTGGATAAGGCTA-3′和陰性對照序列(NCPDCD4):5′-GTTGAGCGACTGAGCACCGA-3′由上海生工生物公司設(shè)計(jì)合成。

1.2 方法

1.2.1 THP-1細(xì)胞培養(yǎng)及H37Rv感染 THP-1細(xì)胞采用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),2～3 d換液1次。THP-1細(xì)胞處于對數(shù)生長期且狀態(tài)良好時(shí),以1×106ml,接種于6孔板,每孔細(xì)胞中加入濃度為160 nmol/L的PMA,刺激48 h后,細(xì)胞由懸浮狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橘N壁狀態(tài),表明細(xì)胞已誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞。在巨噬細(xì)胞內(nèi)以MOI=10∶1(H37Rv∶THP-1)加入濃度為1.0 g/L(活菌數(shù):1.0×107CFU/ml)的細(xì)菌,共培養(yǎng)4 h后,PBS潤洗細(xì)胞3次,每次5 min。隨后,加入含200μg/ml阿米卡霉素的完全RPMI1640培養(yǎng)液,作用1 h清除細(xì)胞外分枝桿菌。再次以PBS潤洗3次,新鮮培養(yǎng)液加入細(xì)胞中,繼續(xù)培養(yǎng)24 h、36 h和48 h。qPCR檢測miR-150和PDCD4的mRNA表達(dá)水平,ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中IFN-γ及炎癥因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)含量。

1.2.2 CCK-8法檢測H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞活性 在96孔板中加入1×105個(gè)THP-1細(xì)胞,經(jīng)PMA及H37Rv誘導(dǎo)后,利用LipofectamineTM2000分別轉(zhuǎn)染 miRNA-150 mimic、NC-mimic、miR-150 inhibitor及NC-inhibitor。miRNA-150 mimic轉(zhuǎn)染終濃度為100 nmol/L,miR-150 inhibitor轉(zhuǎn)染終濃度為200 nmol/L,共培養(yǎng)48 h。每孔加入CCK-8檢測液10μl,37℃培養(yǎng)4 h,酶標(biāo)儀在450 nm測定吸光度(OD)值。細(xì)胞活力=[OD實(shí)驗(yàn)組-OD空白組]/[OD對照組-OD空白組]×100%；對照組細(xì)胞活力為100%。miRNA-150 mimics序 列 為:5′-GCCGAATTCGCATAGGGTGGAGTGGGTGT-3′,miR-150 inhibitors序列為:5′-GATCCCCCACTGGTACAAGGGTTGGGAGA-3′。

1.2.3 miR-150潛在靶基因的預(yù)測 miRNAs通過海綿作用吸附內(nèi)源性RNA分子調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)。本研究運(yùn)用StarBase(http://starbase.sysu.edu.cn/index.php)、Targetscan(http://www.targetscan.org/vert_71/)、miRTarBase(http://mirtarbase.mbc.nctu.edu.tw/php/index.php)和 miRSystem(http://mirsystem.cgm.ntu.edu.tw/index.php)數(shù)據(jù)庫,以“miR-150”為關(guān)鍵詞,檢索其潛在靶基因。通過Venny2.10(https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html)線上工具繪制韋恩圖并取交集,從而獲得miR-150潛在作用靶基因。

1.2.4 熒光定量PCR檢測THP-1巨噬細(xì)胞中miR-150和PDCD4表達(dá) THP-1巨噬細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-150 mimic和miR-150 inhibitor后,加入1 ml TRIzol試劑,依據(jù)TRIzol試劑說明書提取細(xì)胞樣本的總RNA。以O(shè)ne-Step miRNA RT Kit反轉(zhuǎn)錄制備cDNA。熒光定量PCR采用SYBR法,在ABI 7500 Fast Real Time PCR System進(jìn)行PCR擴(kuò)增,檢測miR-150和PDCD4的mRNA表達(dá)水平。擴(kuò)增條件:95℃預(yù)變性30 s,95℃變性5 s,60℃退火30 s,變性和退火步驟40個(gè)循環(huán)。引物序列如下:miR-150,F:5′-CTGCTTAGTGGCTCTACTCCTG-3′,R:5′-TCCCCTCTGGCTTATGTCC-3′；U6 F:5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,R:5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′；PDCD4 F:5′-AAGAAAGGTGGTGCAGGAGG-3′,R:5′-TGACTAGCCTTCCCCTCCAA-3′；GAPDH F:5′-GAAAGCCTGCCGGTGACTAA-3′,R:5′-GCATCACCCGGAGGAGAAAT-3′。分 別 以U6和GAPDH為 內(nèi) 參 基 因,以2-ΔΔCt計(jì) 算miRNA-150、PDCD4相對表達(dá)量。

1.2.5 熒光素酶活性檢測 將miRNA預(yù)測靶基因PDCD4的3′UTR克隆到熒光素酶報(bào)告載體上。由上?？党缮锕こ逃邢薰就瓿梢吧?WT)突變型(MUT)PDCD4 mRNA 3′UTR熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定。取對數(shù)生長期的HEK293細(xì)胞,根據(jù)脂質(zhì)體LipofectamineTM2000說明書操作步驟進(jìn)行,將miRNA-150 mimics和NC-mimic及WT和MUT PDCD4 mRNA 3′UTR共轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞。同時(shí)加入100μl海腎熒光素酶(pGL-TK)作為熒光霉素活性的檢測參照。轉(zhuǎn)染后24 h使用Promega公司的雙熒光素酶檢測系統(tǒng)和熒光素酶檢測儀檢測熒光素酶含量。

1.2.6 miRNA及siRNA轉(zhuǎn)染至THP-1巨噬細(xì)胞將miR-150 inhibitor及PDCD4-siRNA單獨(dú)及共同轉(zhuǎn)染至H37Rv感染的THP-1巨噬細(xì)胞。ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中IFN-γ及炎癥因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)含量,Western blot法分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表達(dá)水平。

1.2.7 Western blot分析 采用細(xì)胞裂解液裂解各組THP-1巨噬細(xì)胞以提取總蛋白,經(jīng)BCA蛋白定量檢測試劑盒進(jìn)行定量。取含20μg蛋白的裂解液,經(jīng)10%SDS-PAGE 120 V電泳,再轉(zhuǎn)移至PVDF膜,以5%脫脂奶粉封閉1 h,加入特異性一抗于4℃過夜孵育。次日PBST漂洗3次,每次10 min后,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG抗體,孵育2 h,經(jīng)ECL曝光成像。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)以表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn),多組比較采用單因素One-ANOVA方差分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用受試者工作特征(ROC)曲線分析診斷敏感度及特異度。

2 結(jié)果

2.1 H37Rv促進(jìn)THP-1巨噬細(xì)胞炎癥因子的釋放ELISA結(jié)果顯示,與正常培養(yǎng)THP-1源巨噬細(xì)胞相比,IFN-γ、IL-1β、TNF-α與IL-6的含量在H37Rv感染THP-1細(xì)胞中顯著升高,且呈時(shí)間作用依賴性(圖1)。

2.2 miR-150促進(jìn)THP-1巨噬細(xì)胞活性 在THP-1巨噬細(xì)胞中過表達(dá)miR-150后,細(xì)胞的活性較NCmimic組明顯升高(P＜0.01)；當(dāng)miR-150表達(dá)被抑制后,細(xì)胞相對活性相比NC-inhibitor組有所下調(diào)(P＜0.05)。見圖2。

圖1 炎癥因子在H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞的情況Fig.1 Condition of inflammatory cytokines in H37Rvinfected THP-1 macrophage

圖2 CCK-8檢測THP-1巨噬細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-150 mimic和miR-150 inhibitor 24 h后細(xì)胞活力Fig.2 Cell viability of THP-1 macrophage was detected by CCK-8 when transfected with miR-150 mimic and miR-150 inhibitor for 24 h

2.3 PDCD4可作為miR-150直接靶基因 miRNAs通過海綿作用吸附內(nèi)源性RNA分子而調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)。經(jīng)數(shù)據(jù)庫分析獲知PDCD4可能為miR-150的候選靶點(diǎn)(圖3A)。qPCR結(jié)果顯示,miR-150 mimic抑制PDCD4 mRNA表達(dá),而在miR-150 inhibitor組中PDCD4 mRNA表達(dá)顯著升高(圖3B、C,P＜0.05)。圖3D為miR-150與PDCD4的3′-UTR的結(jié)合位點(diǎn)。熒光雙素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)顯示,熒光素酶活性在WT型PDCD3 3′-UTR質(zhì)粒與miR-150 mimic共轉(zhuǎn)染下顯著降低(P＜0.01),而MUT型PDCD4 3′-UTR質(zhì)粒與miR-150 mimic共轉(zhuǎn)染未見明顯差異(圖3E)。結(jié)果表明miR-150和PDCD4的基因表達(dá)相關(guān)。

圖3 miR-150負(fù)向調(diào)控PDCD4的表達(dá)Fig.3 miR-150 negatively regulates expression of PDCD4

圖4 共轉(zhuǎn)染miR-150 inhibitor與PDCD4-siRNA對H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響Fig.4 Effect of expression on inflammatory cytokines in H37Rv-infected THP-1 macrophage with cotransfection of miR-150 inhibitor and PDCD4-siRNA

2.4 miR-150靶向作用于PDCD4調(diào)控H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá) ELISA結(jié)果顯示,在H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞下,與NCinhibitor組相比,miRNA-150 inhibitor顯著抑制H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞IFN-γ、IL-6、TNF-α和IL-1β的釋放(圖4,P＜0.05或P＜0.001)；此外,與miRNA-150 inhibitor+PDCD4-NC組相比,PDND2 siRNA反轉(zhuǎn)miRNA-150 inhibitor的抑制效應(yīng),促使IFN-γ、IL-6、TNF-α和IL-1β的釋放。

2.5 miR-150靶向作用于PDCD4調(diào)控H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá) Western blot結(jié)果顯示,H37Rv感染細(xì)胞后,Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高,而Bax及Caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著降低。與NC-inhibitor組相比,miR-150 inhibitor組中Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著降低(P＜0.05,圖5A、B),且Bax及Caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著升高(P＜0.01；圖5A、C、D)。miR-150 inhibitor與PDCD4-siRNA共轉(zhuǎn)染下,miR-150 inhibitor對Bax及Caspase-3蛋白表達(dá)水平的升高效應(yīng)在PDCD4-siRNA作用下所阻遏。結(jié)果表明,在巨噬細(xì)胞中,在miR-150可能通過靶基因PDCD4的相互作用而參與對細(xì)胞凋亡的影響。

3 討論

圖5 H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞共轉(zhuǎn)染miR-150 inhibitor和PDCD4-siRNA后凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平Fig.5 Expressions of apoptosis-related proteins in H37Rv infected THP-1 macrophage with cotransfection of miR-150 inhibitor and PDCD4-siRNA

miRNAs已被證實(shí)在宿主對細(xì)胞內(nèi)分枝桿菌誘導(dǎo)的免疫和炎癥反應(yīng)中起重要作用,并可能影響結(jié)核患者巨噬細(xì)胞的炎癥功能[21]。研究發(fā)現(xiàn),成人TB患者在PBMC、血清、痰液、血漿中存在差異表達(dá)的miRNA,其中miR-150、miR-125b、miR-155、miR-192、miR-144有望成為診斷TB的分子標(biāo)志物[8,13]。本研究通過在H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞中miR-150的檢測,發(fā)現(xiàn)miR-150表達(dá)顯著升高,提示PBMC中miRNA-150水平可能在一定程度上反映肺結(jié)核組織損傷的嚴(yán)重程度。

血清IFN-γ、炎癥細(xì)胞因子水平與肺結(jié)核感染發(fā)病及其進(jìn)展密切相關(guān)。IFN-γ增強(qiáng)T細(xì)胞功能,而IL-6由Th2細(xì)胞分泌而來,能夠抑制Th1細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng),造成巨噬細(xì)胞失活。本研究發(fā)現(xiàn),H37Rv感染顯著增加THP-1巨噬細(xì)胞IFN-γ、IL-1β、TNF-α與IL-6含量,且含量水平隨H37Rv作用時(shí)間增加逐漸升高,呈現(xiàn)時(shí)間作用依賴性,該結(jié)果與FU等[22]一致。研究運(yùn)用miR-150 inhibitor抑制miR-150表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)IFN-γ、IL-1β、TNF-α與IL-6含量顯著降低,提示miR-150在維持機(jī)體免疫功能上可能為正向調(diào)控因子,參與了肺結(jié)核感染發(fā)病過程。

本研究通過StarBase等miRNA靶基因預(yù)測數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)miR-150可能與PDCD4存在靶向作用關(guān)系。本文通過雙熒光素酶報(bào)告檢測了miR-150與PDCD4的靶向作用關(guān)系。PDCD4參與多種生物過程,如凋亡和炎癥。LIANG等[23]發(fā)現(xiàn)在氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)刺激的巨噬細(xì)胞形成的泡沫細(xì)胞(動(dòng)脈粥樣硬化病變的特征性病理細(xì)胞)中,共轉(zhuǎn)染miR-16 mimic和siRNA-PDCD4顯著抑制IL-6和TNF-α等促炎因子的分泌和表達(dá)。本研究結(jié)果顯示miR-150 inhibitor與PDCD4-siRNA共轉(zhuǎn)染可逆轉(zhuǎn)miR-150 inhibitor降低炎癥因子表達(dá)的效應(yīng),提示miR-150靶向調(diào)控PDCD4可能為參與TB免疫反應(yīng)的機(jī)制之一。

巨噬細(xì)胞對MTB的防御機(jī)制決定MTB感染的發(fā)展與結(jié)果。致病性MTB通過抑制巨噬細(xì)胞凋亡而得以在其胞內(nèi)存活、繁殖,并促進(jìn)巨噬細(xì)胞壞死進(jìn)而在體內(nèi)進(jìn)一步擴(kuò)散,表明巨噬細(xì)胞凋亡是機(jī)體重要的固有免疫防御機(jī)制。本文探究miR-150變化對H37Rv感染THP-1源巨噬細(xì)胞的活力及凋亡相關(guān)蛋白的影響。相較于對照組,過表達(dá)miR-150時(shí),細(xì)胞活力升高；在miR-150表達(dá)被抑制時(shí),細(xì)胞活力下降且Bcl-2蛋白表達(dá)減少,Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)增加。提示miR-150可能具有抑制巨噬細(xì)胞凋亡的作用。與此同時(shí),miR-150 inhibitor和PDCD4-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí),上述蛋白表達(dá)水平呈現(xiàn)相反效應(yīng)。推測在巨噬細(xì)胞中,MTB可能通過上調(diào)miR-150及下調(diào)PDCD4抑制巨噬細(xì)胞凋亡,從而規(guī)避細(xì)胞對MTB的免疫清除。巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子是調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答過程的效應(yīng)之一,并可通過自身凋亡而殺死胞內(nèi)MTB,是宿主巨噬細(xì)胞抵御胞內(nèi)病原體的重要機(jī)制。本研究結(jié)果表明,H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞可促進(jìn)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-1β、TNF-α與IL-6產(chǎn)生,巨噬細(xì)胞凋亡顯著減弱,提示過度炎癥反應(yīng)與MTB的免疫逃逸相關(guān)。進(jìn)一步結(jié)果發(fā)現(xiàn),miR-150沉默能夠通過上調(diào)PDCD4水平減弱H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞IFN-γ、IL-1β、TNF-α與IL-6產(chǎn)生,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

本研究證實(shí)在H37Rv感染THP-1巨噬細(xì)胞中miR-150表達(dá)水平升高,miR-150可靶向作用于PDCD4,降低PDCD4表達(dá)水平。因此,miR-150/PDCD4作用軸可能在巨噬細(xì)胞中具有抑制細(xì)胞凋亡與增強(qiáng)細(xì)胞活力的作用。綜上所述,在TB中,miR-150可能作為輔助診斷的重要指標(biāo),其具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步驗(yàn)證及探索。