外周血單個核細胞Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平與重癥肺結(jié)核患者預后的相關(guān)性分析

楊芳 ，殷衛(wèi)兵 ，嚴鳴光 ，趙斌 ，王國戧

（1.商丘市第一人民醫(yī)院檢驗科，河南 商丘 476100；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科，河南 新鄉(xiāng) 453100）

肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌傳染而引起的慢性傳染性疾病，是我的高發(fā)性傳染病，可累及機體多個器官，以肺部感染最常見，主要表現(xiàn)為午后低熱、盜汗、乏力、消瘦、咳嗽咳痰、咯血、呼吸困難等，重癥肺結(jié)核是指其癥狀嚴重的發(fā)病類型，可表現(xiàn)為大咯血、血行播散型肺結(jié)核、結(jié)核性腦膜炎、呼吸衰竭等，嚴重威脅國民生命健康[1,2]。研究表明，外周單個核細胞 （Peripheral mononuclear cells，PBMC）Blimp1 基因、 干擾素 γ （Interferon γ，IFN-γ）、白介素 10（Interleukin 10，IL-10）均可參與調(diào)節(jié)機體免疫炎癥反應，與肺結(jié)核疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[3,4]。在上述研究背景下，本研究對本院92 例重癥肺結(jié)核患者的臨床病理資料進行回顧性分析，來探討其臨床預后與 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平的關(guān)系，旨為臨床防治重癥肺結(jié)核提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料 將 2017 年 8 月-2019 年 8 月本院的重癥肺結(jié)核患者92 例作為研究對象，納入標準：均符合《肺結(jié)核診斷和治療指南》中重癥肺結(jié)核的診斷標準[5]。

排除標準：合并除肺結(jié)核外其他肺部疾病者；合并除肺結(jié)核外其他傳染性疾病者者； 合并免疫功能障礙者；合并惡性腫瘤者；臨床病理資料不全者。根據(jù)患者6 個月內(nèi)臨床結(jié)局的不同分為存活組n=60 與死亡組n=32。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會會議表決通過。

1.2 方法 收集所有患者的臨床資料，進行回顧性分析。采集兩組外周靜脈血5ml，置于抗凝管內(nèi)靜置1.5h，用密度梯度離心法分離PBMC，用離心機（德國 Hettich，ROTOFIX32A） 離心 10min，轉(zhuǎn)速3000r/min，用移液槍抽取上清液置入微型離心管中,-80℃保存?zhèn)溆?。用TRIzol 試劑提取兩組PBMC總 DNA，用 DAN 探針、 熒光定量試劑盒、PCR 儀（美國 ABI，QuantStudio3）對 PBMC Blimp1 基因進行標記、擴增，記錄Ct 值，按公式2-△Ct計算其表達水平，相關(guān)試劑盒均購自北京凱瑞基生物科技有限公司，所有操作流程均嚴格參照試劑和儀器說明書。采用酶聯(lián)免疫吸附實驗試劑法檢測患者外周血清IFN-γ、IL-10 水平，用急診血氣分析儀（美國GEM，3500）檢測患者血漿二氧化碳分壓（Partial pressure of carbon dioxide ，PaCO2）、氧分壓（Oxygen partial pressure ，PaO2）水平，相關(guān)試劑盒均購自武漢華聯(lián)科生物科技有限公司，操作流程均嚴格參照相關(guān)試劑和儀器說明書。

1.3 觀察指標 ⑴觀察比較存活組與死亡組一般資料情況的差異，包括年齡、性別、病程、吸煙史、糖尿病史、冠心病史、是否合并呼吸衰竭、PaCO2、PaO2、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平。分析影響重癥肺結(jié)核患者預后的相關(guān)因素，并進行Logistic多因素回歸分析，觀察其獨立危險因素。⑵用ROC曲線分析 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平對重癥肺結(jié)核患者臨床預后的預測價值。

1.4 統(tǒng)計學方法 用SPSS20.0 軟件進行統(tǒng)計分析，計量數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標準差(±s)的方式表示，采用t 檢驗。計數(shù)數(shù)據(jù)組間比較采用卡方檢驗。獨立影響因素分析采用Logistic 回歸模型。用ROC 曲線及AUC 評價指標對疾病預后的預測價值。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者聯(lián)合預測重癥肺結(jié)核患者臨床預后的ROC 曲線分析ROC 曲線分析結(jié)果顯示，PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者聯(lián)合對重癥肺結(jié)核患者臨床預后均具有預測價值（P＜0.05），且 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 三者聯(lián)合的AUC 大于各單一指標，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1，圖1。

圖1 PBMCBlimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者聯(lián)合預測重癥肺結(jié)核患者臨床預后的ROC曲線

2.2 死亡組與存活組一般資料比較 兩組在年齡、性別、病程、吸煙史、糖尿病史、冠心病史、PaCO2、PaO2上無明顯差異（P＞0.05），在是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 上差異明顯 （P＜0.05）。見表2。

表1 PBMCBlimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者聯(lián)合預測重癥肺結(jié)核患者臨床預后的ROC曲線分析

表2 死亡組與存活組一般資料比較

2.3 重癥肺結(jié)核患者預后的Logistic 多因素回歸分析 將重癥肺結(jié)核患者存活或者死亡作為因變量，將單因素分析中差異具有統(tǒng)計學意義的因素（是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10）作為自變量，并進行賦值，重癥肺結(jié)核患者預后（存活=0，死亡=1），是否合并呼吸衰竭（否=0，是=1）、PBMC Blimp1 （≥1.45=0，＜1.45=1）、IFN-γ（pg/ml） （≤70.74 =0，＞70.74 =1）、IL -10 （pg/ml） （≥69.67=0，＜69.67=1），其中 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 臨界值水平均根據(jù)ROC 曲線分析確定。將上述數(shù)據(jù)納入Logistic 回歸模型，結(jié)果顯示，是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 是重癥肺結(jié)核患者死亡的獨立影響因素 （OR=1.413、2.280、2.307、1.570，P＜0.05）。見表3。

表3 重癥肺結(jié)核患者預后的Logistic多因素回歸分析

3 討論

全世界每年的肺結(jié)核發(fā)病人數(shù)逾千萬，我國是典型的肺結(jié)核疫情高負擔國家,發(fā)病人數(shù)高居全球第2，該病傳染性強，主要通過呼吸道飛沫傳播,若不及時加以治療，病情進展至重癥肺結(jié)核后，癥狀嚴重，可造成心肺功能障礙，預后多為不良，明確影響重癥肺結(jié)核預后的相關(guān)因素對臨床防治該病具有重要意義[1]。研究表明，PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 可廣泛參與結(jié)核分枝桿菌介導的肺部炎癥反應，影響疾病進程[6]?，F(xiàn)為探討PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平與重癥肺結(jié)核患者預后的相關(guān)性，特做此研究。

本研究結(jié)果顯示，存活組與死亡組在是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 上差異明顯，Logistic 多因素回歸分析結(jié)果顯示，是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 是重癥肺結(jié)核患者死亡的獨立影響因素 （OR=1.413、2.280、2.307、1.570，P＜0.05），提示合并呼吸衰竭、Blimp1＜1.45、IFN-γ＞70.74pg/ml、IL-10＜69.67pg/ml 是重癥肺結(jié)核患者死亡的獨立危險因素。探究其原因，研究表明，重癥肺結(jié)核患者合并呼吸衰竭可進一步加重患者肺通氣功能障礙，造成機體缺氧、二氧化碳潴留，導致一系列生理、精神、代謝紊亂癥狀，可危及機體多個臟器功能，引起多器官功能障礙綜合征，致死率極高[7]。此外，PBMC Blimp1 基因可合成轉(zhuǎn)錄因子Blimp1 蛋白，從而發(fā)揮誘導細胞免疫，增強機體免疫力的作用，相關(guān)研究表明，Blimp1 屬于鋅指蛋白基因家族的一員，具有5 個鋅指結(jié)構(gòu)，可誘導B 淋巴細胞增殖分化，促進特異性抗體的合成與分泌，調(diào)節(jié)機體免疫功能，Blimp1 表達水平過低可抑制患者機體免疫球蛋白的合成，增強肺結(jié)核疾病活動性，不利于患者臨床預后[8]。另外，IFN-γ 是一種具有抗病毒、 抗腫瘤作用的細胞因子，可在細菌內(nèi)毒素環(huán)境下誘導各種炎癥因子的合成與分泌，調(diào)節(jié)機體免疫炎癥系統(tǒng)，其表達水平過高可能預示重癥肺結(jié)核患者病情較重，體內(nèi)結(jié)核菌素合成分泌旺盛，導致IFN-γ 水平適應性增高[9]。最后，IL-10 是目前公認的抑炎因子，具有抑制機體炎癥因子合成釋放，降低炎癥損傷的作用，其表達水平降低可導致機體對結(jié)核桿菌的免疫殺傷力降低，肺部炎癥損傷加重，提高患者死亡率[10]。

本研究ROC 曲線分析結(jié)果顯示，Blimp1、IFN-γ、IL-10 及其三者聯(lián)合對重癥肺結(jié)核患者臨床預后均具有預測價值，且 Blimp1、IFN-γ、IL-10 三者聯(lián)合的AUC 大于各單一指標，差異均具有統(tǒng)計學意義，提示 Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平與重癥肺結(jié)核患者臨床預后密切相關(guān)，對重癥肺結(jié)核患者臨床預后可能具有一定的預測價值。探究其機制，肺結(jié)核的主要發(fā)病機制是結(jié)核桿菌感染引起機體T細胞介導的免疫反應與遲發(fā)型性過敏反應，反應過程生成大量炎性細胞因子，前者對結(jié)核桿菌形成免疫殺傷力，后者對患者肺部組織造成炎癥損傷，這兩種反應的劇烈程度對肺結(jié)核患者病情的轉(zhuǎn)歸與預后起到?jīng)Q定性作用[11]。研究表明，Blimp1可促進T 細胞的增殖分化，調(diào)節(jié)Th1/Th2 細胞失衡，增強機體細胞免疫[12]；IFN-γ 可激活巨噬細胞活性，促進炎癥因子的分泌，加重炎癥損傷[13]；IL-10 可以抑制巨噬細胞的抗原呈遞作用，抑制炎癥因子釋放，減輕炎癥損傷[14]，三者均對重癥肺結(jié)核患者機體T 細胞介導的免疫反應與遲發(fā)型性過敏反應產(chǎn)生重要影響，從而一定程度上決定著患者的臨床預后。Liu Y 等人[15]的研究表明，Blimp1 對診斷肺結(jié)核活動性，評價其臨床預后具有重要價值；Basingnaa A 等人[16]的研究表明，IFN-γ、IL-10水平預測對肺結(jié)核患者臨床預后的敏感度為0.728，特異度為0.866，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；按上述研究報道均與本研究結(jié)果相符合。

綜上所述，合并呼吸衰竭、Blimp1＜1.45、IFN-γ＞70.74pg/ml、IL-10＜69.67pg/ml 是重癥肺結(jié)核患者死亡的獨立危險因素，Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平與重癥肺結(jié)核患者臨床預后密切相關(guān)，該結(jié)論與國內(nèi)外研究報道基本一致，Blimp1、IFN-γ、IL-10作為客觀、可量化的實驗室指標，打破了臨床長久以來對重癥肺結(jié)核患者預后經(jīng)驗性判斷的模式，將有望成為臨床預測重癥肺結(jié)核患者預后的新指標。