血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA聯(lián)合檢測(cè)對(duì)良惡性卵巢囊性病變的鑒別診斷價(jià)值*

李 凡，畢勝利，張學(xué)林，郝 潔，呂 佳

河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.婦科；3.腫瘤科，河北張家口 075100

卵巢囊性病變是體內(nèi)多種內(nèi)分泌系統(tǒng)功能異常協(xié)同作用而導(dǎo)致卵巢產(chǎn)生過量雄性激素的結(jié)果，在婦科疾病中較為常見[1]。其發(fā)病較隱匿，缺乏典型的臨床癥狀及有效的早期鑒別診斷方法，易造成誤診[2]。因此，準(zhǔn)確地鑒別診斷卵巢囊性病變的良惡性對(duì)臨床治療方案的選擇及預(yù)后的改善有重要意義。血清高半胱氨酸蛋白61(Cyr61)是結(jié)締組織生長(zhǎng)因子家族成員之一，近年來其在腫瘤中的調(diào)節(jié)作用已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)[3-4]。血清血管生成素樣蛋白4(Angptl4)是血管生成素樣蛋白家族的成員之一，在糖脂代謝及胰島素抵抗的調(diào)節(jié)中起重要作用，此外還與腫瘤細(xì)胞的遷移密切相關(guān)[5-6]。本研究通過檢測(cè)卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平，探討血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA聯(lián)合檢測(cè)鑒別診斷良惡性卵巢囊性病變的價(jià)值，以期提高卵巢囊性病變良惡性的鑒別診斷率。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年6月至2020年5月在河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院婦科接受治療的156例卵巢囊性病變患者為研究對(duì)象，根據(jù)術(shù)后病理結(jié)果明確病變性質(zhì)，將患者分為良性卵巢囊性病變患者(良性腫瘤組，82例)和惡性卵巢囊性病變患者(惡性腫瘤組，74例)。良性腫瘤組患者年齡20～69歲，平均(47.34±13.17)歲；惡性腫瘤組患者年齡20～68歲，平均(47.02±13.46)歲。2組患者年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。惡性腫瘤組腫瘤最大徑≥5 cm的患者有38例，腫瘤最大徑<5 cm有36例；分化程度：中、高分化46例，低分化28例；FIGO臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期45例，Ⅲ+Ⅳ期29例；組織分型：漿液性腺癌39例，黏液性腺癌35例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例。本研究經(jīng)河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)執(zhí)行；所有研究對(duì)象均為自愿參加，并簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)影像學(xué)及臨床檢查發(fā)現(xiàn)，并經(jīng)病理學(xué)檢查明確病變性質(zhì)；(2)實(shí)驗(yàn)室、臨床檢查及影像學(xué)資料完整、清晰；(3)初次確診，此前未進(jìn)行過放化療及手術(shù)治療；(4)精神狀態(tài)無異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有急性感染性疾病及其他部位原發(fā)性惡性腫瘤；(2)伴有其他婦科疾病；(3)伴有嚴(yán)重心、肝、腎功能不全及凝血功能不全；(4)因其他原因不能參與本研究。

1.2試劑與儀器 RNA提取試劑盒(貨號(hào)：R1200)購自上海恒斐生物科技有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號(hào)：121262)購自北京凱瑞基生物科技有限公司；miScript SYBR?Green 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)試劑盒(貨號(hào)：218076)購自德國(guó)凱杰公司。qPCR儀(型號(hào)：7500)購自美國(guó)Applied Biosystems公司。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集與保存 采集所有受試者入院第2天清晨空腹靜脈血標(biāo)本3 mL，3 000 r/min離心15 min后收集血清，迅速置于-80 ℃保存待測(cè)。

1.3.2血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平檢測(cè) 采用RNA提取試劑盒提取血清總RNA，反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。采用qPCR法測(cè)定血清Cyr61、Angptl4及其內(nèi)參GAPDH的mRNA表達(dá)情況，引物由上海生工生物工程股份有限公司設(shè)計(jì)并合成，引物序列見表1。反應(yīng)體系共20.0 μL：cDNA模板(50 ng/μL)2.0 μL，miScript SYBR?Green Mix 10.0 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.8 μL，ddH2O 6.4 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)。每份樣品均設(shè)3個(gè)重復(fù)孔，采用2-ΔΔCt法計(jì)算血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。

表1 qPCR引物序列

2 結(jié) 果

2.1良性腫瘤組與惡性腫瘤組血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平比較 惡性腫瘤組血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平高于良性腫瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 良性腫瘤組與惡性腫瘤組血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平比較

2.2惡性卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA與Angptl4 mRNA的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，惡性卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA與Angptl4 mRNA呈正相關(guān)(r=0.612，P<0.05)。見圖1。

圖1 惡性卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA與Angptl4 mRNA的相關(guān)性散點(diǎn)圖

2.3血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA與惡性卵巢囊性病變患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 根據(jù)惡性卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平平均值(1.52、1.62)，將患者分為Cyr61 mRNA低表達(dá)組(36例)、高表達(dá)組(38例)，Angptl4 mRNA低表達(dá)組(39例)、高表達(dá)組(35例)。惡性卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA與年齡、腫瘤最大徑、癌組織分型無關(guān)(P>0.05)，與腫瘤分化程度、FIGO臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA與惡性卵巢囊性病變患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

續(xù)表3 血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA與惡性卵巢囊性病變患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

2.4血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA對(duì)良惡性卵巢囊性病變的鑒別診斷價(jià)值 以血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA為檢驗(yàn)變量繪制ROC曲線，結(jié)果顯示，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA單獨(dú)檢測(cè)鑒別診斷良惡性卵巢囊性病變的曲線下面積(AUC)分別為0.849(95%CI:0.790～0.908)、0.893(95%CI:0.841～0.946)，最佳臨界值分別為1.278、1.358，特異度分別為78.0%、81.7%，靈敏度分別為78.4%、87.8%。血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA聯(lián)合檢測(cè)鑒別診斷良惡性卵巢囊性病變的AUC為0.921(95%CI:0.876～0.966)，特異度為91.5%，靈敏度為85.1%。見圖2。

圖2 血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA對(duì)良惡性卵巢囊性病變鑒別診斷的ROC曲線

2.5影響惡性卵巢囊性病變發(fā)生的多因素Logistic回歸分析 將是否發(fā)生惡性卵巢囊性病變作為因變量，以血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA、腫瘤分化程度、FIGO臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移作為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA、FIGO臨床分期是影響惡性卵巢囊性病變發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響惡性卵巢囊性病變發(fā)生的多因素Logistic回歸分析結(jié)果

3 討 論

卵巢囊性病變是發(fā)生在各個(gè)年齡階段的女性常見生殖系統(tǒng)疾病，若不能及時(shí)治療，會(huì)出現(xiàn)多種嚴(yán)重的并發(fā)癥，同時(shí)還會(huì)對(duì)患者生殖功能及體內(nèi)激素水平造成影響，嚴(yán)重影響女性的生殖健康及生活質(zhì)量[7-9]。目前，卵巢囊性病變檢查主要采用常規(guī)超聲，但其檢查只能表明卵巢上有異常的包塊出現(xiàn)，無法說明包塊的具體性質(zhì)，且該檢查方式受操作醫(yī)生專業(yè)水平等多種因素影響[10-11]。因此，臨床上缺乏鑒別診斷卵巢囊性病變良惡性的有效指標(biāo)。

Cyr61是一種富含半胱氨酸的分泌性肝素連接蛋白，可與多種調(diào)節(jié)細(xì)胞功能及信號(hào)傳導(dǎo)通路的分子相互作用，進(jìn)而參與細(xì)胞分化、增殖和血管生成，最終在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[12-14]。本研究結(jié)果顯示，惡性腫瘤組患者血清Cyr61 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平高于良性腫瘤組，與孟春艷等[15]及ZHANG等[16]研究結(jié)果中的表達(dá)趨勢(shì)一致。血清Cyr61 mRNA與腫瘤分化程度、FIGO臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且血清Cyr61 mRNA是影響惡性卵巢囊性病變發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示血清Cyr61 mRNA可能通過高表達(dá)在惡性卵巢囊性病變中發(fā)揮重要作用，推測(cè)原因是血清Cyr61 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平升高后，與體內(nèi)不同因子相互作用，使血清Cyr61 mRNA在細(xì)胞環(huán)境中發(fā)揮生物效應(yīng)，進(jìn)而參與血管生成及惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移等進(jìn)程。此外，ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清Cyr61 mRNA對(duì)良惡性卵巢囊性病變有一定的鑒別診斷價(jià)值，其AUC為0.849，特異度、靈敏度分別為78.0%、78.4%。表明血清Cyr61 mRNA相對(duì)表達(dá)水平的異常升高對(duì)惡性卵巢囊性病變的發(fā)生有一定提示作用，但其特異度、靈敏度均相對(duì)較低，需與其他指標(biāo)聯(lián)合使用。

Angptl4主要在脂肪組織及肝臟中表達(dá)，它是一種在代謝綜合征及糖尿病等疾病發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用的脂肪因子，對(duì)糖脂代謝的作用是其研究熱點(diǎn)[17-18]。近年研究表明，Angptl4參與上皮細(xì)胞分化，通過激活某些信號(hào)通路，在腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移中起著重要作用[19]。CONWAY等[20]研究表明，PRSS21/testisin可通過拮抗Angptl4來抑制卵巢腫瘤的轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，惡性腫瘤組血清Angptl4 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平高于良性腫瘤組，血清Angptl4 mRNA是影響惡性卵巢囊性病變發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且血清Angptl4 mRNA與腫瘤分化程度、FIGO臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。提示Angptl4可能不僅參與惡性卵巢囊性病變的發(fā)生、發(fā)展，還與其腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，Angptl4可能是通過與細(xì)胞因子結(jié)合，進(jìn)而激活其下游相關(guān)信號(hào)通路，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，加速患者病情進(jìn)展。ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清Angptl4 mRNA對(duì)良惡性卵巢囊性病變有較高的鑒別診斷價(jià)值，其AUC為0.893，特異度和靈敏度分別為81.7%、87.8%，均高于血清Cyr61 mRNA，而血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA聯(lián)合檢測(cè)后的鑒別診斷價(jià)值高于其單獨(dú)檢測(cè)，表明血清Angptl4 mRNA的異常升高可對(duì)卵巢囊性病變由良性轉(zhuǎn)為惡性有重要提示作用，且血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA聯(lián)合檢測(cè)鑒別診斷價(jià)值更高。但卵巢囊性病變是一個(gè)多基因、多因素共同參與的復(fù)雜過程，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA在其發(fā)病機(jī)制中的具體作用，仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量深入研究。

綜上所述，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA對(duì)卵巢囊性病變的良惡性均有一定的鑒別診斷價(jià)值。