男性不育患者精子線粒體膜電位及頂體酶活性檢測(cè)研究

楊茜

（昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院， 云南 昆明）

0 引言

男性不育癥是一種發(fā)病率極高的綜合病癥，導(dǎo)致此病發(fā)生的因素是多種多樣的，在育齡夫婦中，占比高達(dá)10%。一直以來，常規(guī)精液分析在男性生育能力的評(píng)估中占據(jù)著重要作用，但是，單純通過常規(guī)指標(biāo)是很難評(píng)估出精子的受精能力的。常規(guī)檢查和實(shí)際生育能力之間是存在很大差距的，因此，需要對(duì)男性不育患者進(jìn)行精子功能的檢測(cè)[1]，從而提升男性生育能力檢測(cè)的全面程度和科學(xué)程度。一般情況下，精子凋亡表示著精子運(yùn)動(dòng)能力的下降與喪失，所以，精子運(yùn)動(dòng)能力與精子凋亡之間是具有緊密聯(lián)系的。精子頂體酶活性檢測(cè)可以更加科學(xué)、有效地評(píng)估精子受精的能力，在精子生育力的評(píng)估中具有重要意義。本次研究對(duì)男性不育患者的精子線粒體膜電位及頂體酶活性進(jìn)行檢測(cè)[2]，以此評(píng)估其在男性不育的診斷評(píng)估中的作用。

1 資料與方法

1.1 基本資料

研究資料均為本院收集的，是在2019 年12 月至2020年12 月期間收治的男性不育患者共有90 例，其中，弱精子癥30 例，畸精子癥30 例，弱畸精子癥30 例，同時(shí)，選取同期納入的健康人群90 例，對(duì)比這些研究資料的基本情況，無顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具備較好的可比較性（P＞0.05）。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 精液的采集

要求兩組研究對(duì)象禁欲3 天，應(yīng)用手淫法收集被檢測(cè)人員的精液，將精液放在無菌杯內(nèi)，然后放在水浴箱中半小時(shí)，進(jìn)行液化。

1.2.2 常規(guī)精液檢測(cè)

在進(jìn)行精液常規(guī)檢測(cè)的過程中，應(yīng)用精子分析儀，此儀器是由美國BDFACSCalibur 公司生產(chǎn)的，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊(cè)操作規(guī)則進(jìn)行改良巴氏染色和K 嚴(yán)格精子形態(tài)分析。試劑來自于浙江星博生物科技股份有限公司。

1.2.3 精子線粒體膜電位檢測(cè)

常規(guī)洗滌精液標(biāo)本，并對(duì)其實(shí)施離心處理，應(yīng)用PBS懸浮沉淀，獲取精子標(biāo)本，密度控制為300g*5min。加入JC-1（5ug/ml），進(jìn)行恒溫避光，經(jīng)過10 分鐘后實(shí)施洗滌。再應(yīng)用PBS 重懸沉淀。應(yīng)用流式細(xì)胞儀對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。波長488mm，應(yīng)用FSC 和SSC，通過FL1 和FL2 檢測(cè)光強(qiáng)度。MMP 正常精子比例=橙紅色精子百分比。

1.2.4 精子頂體酶檢測(cè)

應(yīng)用Kennedy 方式對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，把標(biāo)本分成測(cè)定管與空白管。各自精子數(shù)7.5*106 個(gè)，進(jìn)行離心處理20 分鐘[3]，然后將精漿去除掉，加入100ul 抑制劑，然后將精漿蛋白酶抑制劑去除，加入1000ul 反應(yīng)液，在對(duì)照管中加入1000ul 終止液。在反應(yīng)停止以后，將兩管實(shí)施離心處理，取上清液200ul，放入空白酶標(biāo)板，檢測(cè)（波長405mm）。按照公式計(jì)算出總頂體酶活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)正態(tài)分布的數(shù)據(jù)進(jìn)行t 檢驗(yàn)，對(duì)非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，采用平均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示數(shù)據(jù)的分布趨勢(shì)，若P＜0.05 表示數(shù)據(jù)的比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩組精子PFM、PNM、MMP、頂體酶活性的檢測(cè)結(jié)果

2 結(jié)果

2.1 比較兩組精子PFM、PNM、MMP、頂體酶活性的檢測(cè)結(jié)果

見表1。

3 討論

精子線粒體在精子獲能與供能中是發(fā)揮著重要作用的，是提供精子運(yùn)動(dòng)動(dòng)力的重要細(xì)胞器[4]。一般情況下，在細(xì)胞正常的代謝中，線粒體能量傳遞到電子，通過呼吸鏈傳遞，并且將質(zhì)子送到內(nèi)膜之外，這樣就形成了電位差距，也就是形成線粒體膜電位。此電位可以對(duì)線粒體產(chǎn)能的狀況進(jìn)行正確反映[5]。當(dāng)MMP 為正常的水平的時(shí)候，跨膜負(fù)電壓水平是比較高，若降低則預(yù)示著供能受到阻礙。本次研究結(jié)果顯示：男性不育患者的MMP 顯著下降，此結(jié)果充分證明了：MMP 在一定程度上可以解釋不育發(fā)生的原因[6]。頂體酶位于精子頭部的基質(zhì)、內(nèi)膜，是一種絲氨酸蛋白溶解酶。隨著頂體的合成，該溶解酶也隨之成型了，而且這種物質(zhì)是沒有活性的[7]。當(dāng)精子獲能、與透明帶結(jié)合的時(shí)候，頂體PH 水平上升，頂體酶活化，為精子和卵子結(jié)合提供能量。通過本研究結(jié)果顯示，男性不育患者的頂體酶活性顯著比正常男性低，這就表示頂體酶活性不正?？赡苁窃斐赡行猿霈F(xiàn)不育的重要原因[8]，同時(shí)其也是導(dǎo)致弱精子癥、畸精子癥、弱畸精子癥的重要原因[9,10]。

總之，精子線粒體膜電位、頂體酶活性檢測(cè)在男性生育力的診斷中具有重要作用，是能夠客觀評(píng)估男性不育患者的精子質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn)，具有實(shí)際研究價(jià)值[11,12]。