乳香的薄層色譜研究*

劉世軍 ，宋忠興 ，郭 潔 ，許 剛 ，陳衍斌 ，張雪原 ，張 娛 ，劉紅波

1 陜西中醫(yī)藥大學(xué)/陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心，陜西 咸陽 712083；2 陜西省創(chuàng)新藥物研究中心；3 陜西步長制藥有限公司

乳香為橄欖科植物乳香樹Boswellia carteriiBirdw.及同屬植物Boswellia bhawdajianaBirdw.樹皮滲出的樹脂［1］。主要分布于紅海沿岸至利比亞、蘇丹、土耳其等，主產(chǎn)于紅海沿岸的索馬里和埃塞俄比亞，分為索馬里乳香和埃塞俄比亞乳香，每種乳香又分為乳香珠和原乳香，我國有些地方也有分布。

心腦血管疾病是發(fā)病率較高的人類疾病之一，步長腦心通［2-3］是治療此類疾病的有效藥品，受到廣泛關(guān)注。乳香味辛、苦，性溫，具有活血定痛，消腫生肌的功效?？捎糜谛乇孕耐?、胃脘疼痛、痛經(jīng)經(jīng)閉、產(chǎn)后瘀阻、癥瘕腹痛、風(fēng)濕痹痛、筋脈拘急、跌打損傷、癰腫瘡瘍等病癥。乳香作為步長腦心通里重要的樹脂類藥材之一，充分發(fā)揮其化瘀通絡(luò)的作用，對于氣虛血滯、脈絡(luò)瘀阻所致的中風(fēng)有著顯著的療效。

2015 年版一部《中華人民共和國藥典》對乳香的成分鑒別采用的方法是氣相色譜法，這種方法雖然精確，但操作復(fù)雜，成本較高。本試驗采用薄層色譜法對其原藥材進行鑒別，不僅價格低廉，操作簡單，可操作性強，而且還能全面地將原藥材盡可能多的成分進行提取鑒別。

1 試劑與儀器

1.1 儀器FA2004B 型電子天平（上海佑科儀器儀表有限公司），KQ-300DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），100×200 雙槽層析缸，硅膠G 薄層板（青島海浪硅膠干燥劑有限公司），101 型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京科偉永興儀器有限公司），揮發(fā)油提取器，電熱套（北京科偉永興儀器有限公司）。

1.2 試藥同一產(chǎn)地乳香見表1，不同品質(zhì)乳香見表2。

表1 同一產(chǎn)地乳香藥材

表2 不同品質(zhì)乳香藥材

1.3 試劑甲醇（成都市科隆化學(xué)品有限公司），環(huán)己烷（天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司），乙醚（洛陽市化學(xué)試劑廠），石油醚（60-90℃）（成都市科龍化工試劑廠），苯（天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司），乙酸乙酯（天津市天力化學(xué)試劑有限公司），甲酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），以上試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶劑的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取乳香對照藥材0.5173 g，加入甲醇5 mL，超聲提取30 min，取出，放至室溫后，取上清液過0.22 μm 微孔濾膜，置于1.5 mL 小離心管中，稍揮去溶劑，放于冰箱中，備用。

2.1.2 乳香供試品溶液的制備 按照表2 中藥材乳香編號，分取表中藥材的用量，加入10 mL 甲醇，超聲提取30 min，靜置，取上清液，過0.22 μm微孔濾膜，置于1.5 mL小離心管中，稍揮去溶劑，放于冰箱中備用。

2.1.3 供試品溶液的制備 取乳香藥材適量，研細，按照表1中藥材的量稱取粉末，加入甲醇10 mL，超聲提取30 min，取出，待冷卻至室溫后取上清液，過 0.22 μm 微孔濾膜，置于 1.5 mL 小離心管中，稍揮去溶劑，置于冰箱中備用。同法制得3 批供試藥材試液。

2.1.4 揮發(fā)油的制備［4-5］取乳香藥材適量，稍研成小塊，稱取200 g置于圓底燒瓶中，加入1600 mL飲用水，采用水蒸氣蒸餾法，回流提取至揮發(fā)油液面不再增加，收集揮發(fā)油。精密量取揮發(fā)油200 μL，加入400 μL 甲醇，制得揮發(fā)油稀釋液，置于冰箱中備用。

2.2 展開系統(tǒng)與試驗結(jié)果

2.2.1 展開系統(tǒng)［1］根據(jù)2015年版第一部《中華人民共和國藥典》中沒藥的鑒別方法進行展開。分別吸取3 批乳香供試藥材試液和乳香對照藥材試液約2 μL，點于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-乙醚（4∶1）為展開劑展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液顯色，置于105℃條件下至斑點清晰，見圖1。

經(jīng)查閱資料，選用苯-乙酸乙酯（95∶5）為展開劑，采用一次展開法見圖2。二次展開法進行展開見圖3。展開完全后，取出，晾干，用5%香草醛硫酸為顯色劑進行顯色，日光下即可觀察，或置于105℃條件下顯色完全。

2.2.2 試驗結(jié)果 乳香藥材與對照藥材顯示斑點基本一致。以環(huán)己烷-乙醚（4∶1）為展開劑，所顯示出的斑點較少，以苯-乙酸乙酯（95∶5）為展開劑，所顯示出的斑點較多。兩種展開條件下特征都很明顯，均可作為鑒別依據(jù)。但由于后者顯示斑點較多，所以本實驗以第二種展開劑為最終結(jié)果。

2.3 不同品質(zhì)乳香的薄層層析與結(jié)果

2.3.1 展開系統(tǒng) 按照表2 中的編號順序，依次點樣，分別以苯-乙酸乙酯（19∶1）（圖 4A）、苯-乙酸乙酯（25∶1）（圖4B）為展開劑進行二次展開，待展開完全后，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液顯色，日光下即可觀察到斑點，再置于105℃條件下至顯色完全，并記錄結(jié)果。

2.3.2 乳香薄層結(jié)果 根據(jù)實驗結(jié)果圖可知，以苯-乙酸乙酯（25∶1）為展開劑時，展開效果較好，所以本實驗選用苯-乙酸乙酯（25∶1）為展開劑，經(jīng)二次展開得到其指紋圖譜結(jié)果。見圖4。

圖1 環(huán)己烷-乙醚（4∶1）為展開劑的乳香薄層色譜圖

圖2 苯-乙酸乙酯（95∶5）為展開劑一次展開

圖3 苯-乙酸乙酯（95∶5）為展開劑二次展開

圖4 不同比例苯-乙酸乙酯為展開劑的乳香薄層色譜圖

圖5 不同比例環(huán)己烷-乙醚、純環(huán)己烷、純石油醚為展開劑的乳香揮發(fā)油薄層色譜圖

2.4 乳香揮發(fā)油展開系統(tǒng)的討論分別吸取乳香揮發(fā)油稀釋液2 μL，點于硅膠G 板上，以環(huán)己烷-乙醚（4∶1）為展開劑展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液顯色，置于105℃條件下至斑點清晰。在環(huán)己烷-乙醚（4∶1）的展開條件下，極性稍大的環(huán)己烷-乙醚（4∶1）成分可以較好地分開，但是展開前沿極性稍小的部分未能很好展開，現(xiàn)以極性稍小的未展開部分為主要對象，對其展開劑的選擇進行討論。

展開系統(tǒng)的選擇：分別以不同比例環(huán)己烷-乙醚（圖5A-F）、純環(huán)己烷（圖5G）、純石油醚（圖5H）為展開劑展開，待展開完全后，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇進行顯色，置于105℃條件下至顯色完全。

從試驗結(jié)果可以看出，以純石油醚為展開劑，乳香揮發(fā)油分離效果較好。

為提高乳香揮發(fā)油斑點分離度，改變月牙形斑點，將石油醚與環(huán)己烷按不同比例混合作為展開劑。見圖6。

分離效果有所提高但仍不是很理想，并且部分斑點呈月牙形。選擇在分離較好的以石油醚-環(huán)己烷（2∶1）為展開劑的混合展開劑中加入一滴甲酸，并采用二維法［5］進行展開，分離效果明顯提高。見圖7—8。

圖6 不同比例石油醚-環(huán)己烷為展開劑的乳香揮發(fā)油薄層色譜圖

圖7 石油醚-環(huán)己烷（2：1）為展開劑的乳香揮發(fā)油薄層色譜圖

3 討論

本實驗采用多次薄層色譜法中的二次展開法，在原藥材的分離方面重復(fù)性好，特征明顯，可以考慮作為乳香定性鑒別及指紋圖譜研究的參考。乳香揮發(fā)油極性與藥材甲醇提取液極性不同，在原藥材所用的薄層條件下不能很好地分離，需要改變展開條件。對于本實驗，乳香揮發(fā)油極性極小且成分復(fù)雜，采用環(huán)己烷-乙醚（4∶1）只能將極性較大的成分分離，而極性較小的部分需要極性更小的展開劑，如本法采用的環(huán)己烷、石油醚及環(huán)己烷與石油醚的混合物等。

二維薄層色譜技術(shù)是一種新型的薄層色譜技術(shù)，可在保留一維色譜結(jié)果的基礎(chǔ)上再次進行展開，將很難分開的化合物進行分離，既保留了一維薄層色譜的優(yōu)點又改進了一維色譜的缺點。本實驗嘗試了分離效果更好的二維薄層色譜技術(shù)。

薄層色譜法受外部因素影響較大，如溫度、展開劑種類、點樣誤差、展開方法等。試驗宜在溫濕度變化差異較小的室內(nèi)環(huán)境下進行。

圖8 石油醚-環(huán)己烷（2：1）+甲酸（1滴）為展開劑的乳香揮發(fā)油薄層色譜圖