ISO15189體系下全自動(dòng)血凝分析儀的3Q驗(yàn)證

莎 仁 梁 魚

1.內(nèi)蒙古自治區(qū)巴彥淖爾市醫(yī)院檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古巴彥淖爾 015000；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特 010110

隨著凝血檢測(cè)項(xiàng)目在臨床的不斷發(fā)展，臨床以及相關(guān)領(lǐng)域?qū)δ獧z測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和凝血檢測(cè)效率的要求越來越高[1]。因此，為確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠，在ISO15189體系下對(duì)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備進(jìn)行3Q驗(yàn)證非常有必要。3Q驗(yàn)證即IQ、OQ和PQ，其中最關(guān)鍵的步驟為PQ即性能驗(yàn)證，要求驗(yàn)證頻率是每年一次[2]。ISO15189體系也要求實(shí)驗(yàn)室新儀器在安裝和應(yīng)用于臨床檢測(cè)前應(yīng)對(duì)其性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證[3-5]，這都是保證檢測(cè)過程每個(gè)環(huán)節(jié)質(zhì)量的重要手段[6]。美國FDA也有同樣的規(guī)定[7-8]。目前國內(nèi)已有很多品牌的全自動(dòng)凝血分析儀的性能驗(yàn)證報(bào)道[9-10]。以SysmexCS-2500全自動(dòng)血凝分析儀為例，探究在15189體系下該全自動(dòng)血凝分析儀的性能驗(yàn)證過程。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器為日本希森美康公司（Sysmex）[11]生產(chǎn)的SysmexCS-2500全自動(dòng)血凝分析儀；試劑為凝血酶原時(shí)間（PT）測(cè)定試劑盒（批號(hào)565631）、活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）測(cè)定試劑盒（批號(hào)556969）、凝血酶時(shí)間（TT）測(cè)定試劑盒（批號(hào)556839）、纖維蛋白原（FIB）測(cè)定試劑盒（批號(hào)595024）、D-二聚體；質(zhì)控品為正常凝血質(zhì)控品：質(zhì)控1（批號(hào)548087）和 INNOOANCED-DIMERControl1（批 號(hào)562243）；異常凝血質(zhì)控品：質(zhì)控P（批號(hào)562143）和 INNOOANCED-DIMERControl2（批號(hào) 556715）。

1.2 方法

1.2.1 批內(nèi)精密度 根據(jù)《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》[12]、《D-二聚體定量檢測(cè)》文件[13]選取2個(gè)濃度水平高低值樣本，連續(xù)重復(fù)測(cè)定11次，計(jì)算變異系數(shù)（CV），標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。要求計(jì)算CV值需≤廠家要求。

1.2.2 日間精密度 根據(jù)CLSI EP15-A3文件[14]選取兩個(gè)水平質(zhì)控品，每天取出兩個(gè)水平的樣品各一份測(cè)定一次，共測(cè)定20 d，計(jì)算CV，SD。要求計(jì)算CV值需≤廠家要求。

1.2.3 準(zhǔn)確性

1.2.3.1 準(zhǔn)確性（PT、APTT、TT、FIB） 根據(jù) CLSI EP15-A3文件[15]取兩個(gè)水平的血凝質(zhì)控品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算每份樣本檢測(cè)結(jié)果與靶值的相對(duì)偏差。以偏差為評(píng)價(jià)指標(biāo)，要求計(jì)算的檢測(cè)結(jié)果與靶值的偏差在廠家規(guī)定的允許范圍內(nèi)。

1.2.3.2 準(zhǔn)確性（D-二聚體） 根據(jù)EP15-A3文件[15]選取兩個(gè)水平的定值質(zhì)控品重復(fù)測(cè)定3次。要求D-二聚體低值、高值測(cè)定結(jié)果在廠家規(guī)定的允許范圍內(nèi)。

1.2.4 線性范圍 根據(jù)408-2012《臨床化學(xué)設(shè)備線性評(píng)價(jià)指南》[16]選取一份接近預(yù)期上限的高值血漿樣本（H），F(xiàn)IB、D-二聚體按 100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%的比例進(jìn)行稀釋。每個(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定2次，計(jì)算均值。計(jì)算y=ax+b，驗(yàn)證線性范圍，需符合a值在1±0.05范圍內(nèi)，R2≥0.9801的要求。

1.2.5 FIB、D-二聚體檢測(cè)下限靈敏度 根據(jù)EP9-A3文件[17]連續(xù)測(cè)定接近理論低值水平血漿10次。結(jié)果需符合CV%＜20%。

1.2.6 攜帶污染率

1.2.6.1 PT、APTT、TT、FIB攜帶污染率 連續(xù)測(cè)定對(duì)倍稀釋的正常血漿PT或APTT三次（j1、j2、j3）后，立即連續(xù)測(cè)定原血漿FIB或TT三次（i1、i2、i3），再連續(xù)測(cè)定血漿 PT或 APTT三次（j4、j5、j6）。根據(jù)下面公式計(jì)算PT、APTT、TT攜帶污染率CV值，要求均應(yīng)≤10%。血漿中FIB的濃度要求在3～4 g/L。

1.2.6.2 D-二聚體、FDP攜帶污染率

1.2.6.2.1 高值樣本對(duì)低值樣本的污染率 低值樣本置樣本架1和3位置，高值樣本置于2位置，每個(gè)樣本分別測(cè)定3次，記錄結(jié)果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。計(jì)算：K1=[N4-Mean（N1，N2，N3）]/Mean（N1，N2，N3）。 計(jì) 算 結(jié) 果 K1 應(yīng)≤10.0%。

1.2.6.2.2 低值樣本對(duì)高值樣本的污染率 高值樣本置樣本架1和3位置，低值樣本置于2位置，每個(gè)樣本分別測(cè)定3次，記錄結(jié)果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。 計(jì) 算：K2=[A4-Mean（A1，A2，A3）]/Mean（A1，A2，A3）。 計(jì) 算 結(jié) 果 K2 應(yīng)≤10.0%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)算的各檢驗(yàn)指標(biāo)性能驗(yàn)證結(jié)果的CV值用百分?jǐn)?shù)的形式表示。

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)精密度

批內(nèi)精密度正常質(zhì)控和異常質(zhì)控CV值均符合廠家要求，驗(yàn)證合格。見表1～2。

表1 批內(nèi)精密度正常質(zhì)控水平驗(yàn)證結(jié)果

表2 批內(nèi)精密度異常質(zhì)控水平驗(yàn)證結(jié)果

2.2 日間精密度

日間精密度正常質(zhì)控和異常質(zhì)控CV值均符合廠家要求，驗(yàn)證合格。見表3～4。

表3 日間精密度正常質(zhì)控水平驗(yàn)證結(jié)果

表4 日間精密度異常質(zhì)控水平驗(yàn)證結(jié)果

2.3 準(zhǔn)確性

2.3.1 準(zhǔn) 確 性（PT、APTT、FIB、TT） PT、APTT、FIB、TT檢測(cè)結(jié)果與靶值的偏差均符合要求，驗(yàn)證合格。見表5～6。

表5 準(zhǔn)確性正常質(zhì)控水平驗(yàn)證結(jié)果

表6 準(zhǔn)確性異常質(zhì)控水平驗(yàn)證結(jié)果

2.3.2 準(zhǔn)確性（D-二聚體） D-二聚體檢測(cè)結(jié)果與靶值的偏差符合要求，驗(yàn)證合格。見表7～8。

表7 D-二聚體低值準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果

表8 D-二聚體高值準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果

2.4 線性范圍

所得FIB與D-二聚體的線性驗(yàn)證回歸方程均符合要求，驗(yàn)證合格。見圖1～2。

圖1 驗(yàn)證FIB線性結(jié)果圖

圖2 D-二聚體線性結(jié)果圖

2.5 檢測(cè)下限（靈敏度）

FIB與D-二聚體檢測(cè)結(jié)果CV值均符合要求。見表9。

表9 CS-2500靈敏度驗(yàn)證結(jié)果

2.6 攜帶污染率

檢測(cè)結(jié)果顯示PT/FIB、APTT/TT、FIB、TT/APTT、K1、K2的攜帶污染率CV值分別為-0.97%、0.50%、-0.52%、1.56%、2.56%、2.65%，均＜10%，符合要求，驗(yàn)證合格。

3 討論

本研究在ISO15189體系下，參照CLSI頒布的EP系列文件，結(jié)合實(shí)際，對(duì)CS-2500全自動(dòng)血凝分析儀進(jìn)行了性能驗(yàn)證。精密度是用變異系數(shù)CV來衡量在規(guī)定的條件下對(duì)同一被測(cè)量品進(jìn)行連續(xù)多次獨(dú)立檢驗(yàn)所得的測(cè)定結(jié)果之間的一致性。進(jìn)行精密度驗(yàn)證是ISO15189體系中性能驗(yàn)證的關(guān)鍵一步[4]，也是進(jìn)行其他項(xiàng)目性能驗(yàn)證的前提和基礎(chǔ)[6]。準(zhǔn)確性是衡量三次測(cè)量結(jié)果與靶值之間的一致程度的指標(biāo)。線性范圍是檢測(cè)確定測(cè)定值與稀釋倍數(shù)呈線性關(guān)系的范圍。靈敏度是儀器測(cè)量最小被測(cè)量的能力，所測(cè)的最小量越小，該儀器的靈敏度越高。攜帶污染率是具體的量化攜帶污染，其值越小代表儀器檢測(cè)過程樣本相互影響越小。國內(nèi)已有相應(yīng)文獻(xiàn)綜述FIB項(xiàng)目比其他項(xiàng)目污染率高[5]。

SysmexCS-2500全自動(dòng)血凝分析儀檢測(cè)項(xiàng)目的3Q性能驗(yàn)證結(jié)果均符合廠家標(biāo)識(shí)要求，同時(shí)該血凝分析儀多數(shù)驗(yàn)證指標(biāo)也能達(dá)到ISO15189的規(guī)定要求[6]。所以通過驗(yàn)證可以確定該血凝分析儀精密度良好、準(zhǔn)確性可靠、線性相關(guān)性較好、靈敏度較高、攜帶污染率低并具有較好的自潔能力，可用于ISO15189認(rèn)可的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室凝血檢測(cè)等工作，向臨床提供準(zhǔn)確真實(shí)可靠的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)。